[0047] 優選地，將處于生長指數期的所述布朗克假絲酵母菌接種于所述的曬青毛茶中。 生長指數期可通過用常規的方法描繪所述布朗克假絲酵母菌的生長曲線來確定。
[0048] 發明人通過大量的試驗摸索發現，當接種的菌種濃度過低時，菌種繁殖慢，發酵的 時間會延長，時間成本增加；當接種的菌種濃度過高時，菌種生長較快，茶葉內含物質被過 度利用，運會造成發酵熟茶的口感淡，對品質影響較大。因此，優選地，所述布朗克假絲酵母 菌的接種量為每克曬青毛茶接種5. 0 X 104至1. 0 X 10 6個，優選7. 0 X 10 4至9. 0 X 10 5個，更 優選9. 8 X 1〇4個至1. 2 X 10 5個，最優選1. 0 X 10 5個。
[0049] 優選地，在所述接種之前，對所述的曬青毛茶進行滅菌處理，W進一步保證單菌發 酵。
[0050] 發明人還發現，當發酵短于2周時，不能形成熟茶的品質，湯色、口感均接近生茶 的特點；當發酵大于6周時，茶葉內含物質被過度利用，內含物質減少較多，運會造成發酵 熟茶的口感淡。因此，優選地，所述發酵培養在20-50°C的條件下發酵2-6周，更優選在 25-45Γ的條件下發酵2-4周。還優選地，在所述發酵培養時，對培養物進行補水，優選每周 補水一次，每次補水的量可W為：W每次補水之前的培養物的總重量計為6-10% (v/m)。優 選地，在所述發酵培養時，對培養物進行翻堆。
[0051] 在所述發酵培養過程中，培養基可W使用常規的PDA培養基、ISP 2號培養基等多 種培養基進行培養，其中優選使用ISP 2號培養基。
[0052] 優選地，在本發明的方法中，所述布朗克假絲酵母菌為上文所述的假絲酵母菌 TMCC 70011 菌株。
[0053] 本發明的又一個方面提供了假絲酵母菌（Candida blankii)在普巧茶加工中的應 用。所述假絲酵母菌優選為上文所述的假絲酵母菌TMCC 70011菌株。
[0054] W下通過例子的方式進一步解釋或說明本發明的內容，但運些例子不應被理解為 對本發明的保護范圍的限制。 陽055] 實施例
[0056] 實施例1 :假絲酵母菌TMCC 70011菌株的分離純化
[0057] 從正在發酵的普巧茶渥堆（采集自郝海茶業有限責任公司）中采集新鮮的發酵茶 樣，通過下文所述的純化培養基分離得到150株布朗克假絲酵母菌。經過形態觀察和基因 測序（委托深圳華大基因公司）分析，選取TMCC 70011菌株。
[0058] 分離純化方法如下：
[0059] (1)純化培養基準備：
[0060] 培養基配方：蛋白腺4g，葡萄糖4g，酵母浸膏5g，瓊脂糖2g，蒸饋水1000ml，抑為 自然狀態化.8-7. 3)。
[0061] 將配制好的培養基12rC滅菌40分鐘，冷卻至45°C左右，倒入無菌培養皿中，每皿 約20ml，冷卻凝固后備用；
[0062] (2)樣品處理：取待分離的普巧茶發酵渥堆茶樣，研磨粉碎，取Ig，在超凈臺中加 入到裝有9ml無菌水的試管中，振蕩制成菌懸液，濃度記為10°;
[006引 做稀釋：按十倍稀釋法逐步稀釋，稀釋7次為止，分別將濃度記為10 1、10 2、10 3、 10 4、10 5、10 6、10 7。十倍稀釋法是指下一管的菌懸液濃度是上一管的十分之一. W64] (4)接種：將標記為10 2、10 3、10 4、10 5、10 6、10 7濃度的菌懸液分別取500 μ 1注 入到步驟（1)中已準制好的培養皿中，并用涂布棒均勻涂布，每個濃度Ξ個重復。完成后， 放置于35°C下培養，每隔24小時觀察一次；
[00化](5)純化：培養4天后，挑取單菌落轉接到新鮮固體PDA培養基中培養，多次劃線 純化直至得到純化菌株；
[0066] (6)選取TMCC 70011菌株：經過形態觀察和基因測序分析，選取TMCC 70011菌 株。
[0067] 實施例2 :假絲酵母菌TMCC 70011菌株的生產應用
[0068] 將純化得到的TMCC 70011菌株通過平板挑取單菌落接種于ISP2號液體培養基 中，在搖床中Wl50rpm、3(TC培養7小時至生長指數期。將大葉種曬青毛茶（采集自郝海 茶業有限責任公司）加水至含水量達到基于潮水之前的曬青毛茶的總重量計為35% (m/ m)，12rC滅菌30分鐘，按每克曬青毛茶1. OX 1〇5個的接種量接種所述培養至生長指數期 的TMCC 70011菌株，然后放置于35°C培養3周。W周為單位進行補水并翻堆，每次按照 10% (v/m)(w每次補水之前的培養物的總重量計）的量補水。隨著TMCC 70011菌株的大 量繁殖，其分泌的酶量也增加，在蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、糖化酶等酶的作用下，普巧茶 中還原性糖、氨基酸、可溶性碳水化合物和水化果膠的含量不斷增加，由此豐富了普巧茶的 滋味。
[0069] 經過接種TMCC 70011菌株進行發酵的普巧茶，具有湯色深紅略渾、甜感明顯、槐 花香高揚持久的特點。普巧茶中茶氨酸含量為1.8% (m/m)，茶褐素含量為12.4% (m/m)， 可溶性糖含量為2.9% (m/m)，水浸出物含量為36% (m/m)。其中，茶氨酸、茶褐素、可溶性 糖、水浸出物的含量的測定方法均按照國家標準方法檢測。
[0070] 按照上述相同的方法，在不同的發酵條件下將TMCC 70011菌株應用于普巧茶的 發酵，同樣獲得了良好的效果。具體數據請參見表1和表2。 陽〇7U 表1 :相同溫度、時間，不同接種量下，TMCC 70011菌株發酵普巧茶的內含物質檢 測結果：（發酵條件：35°C發酵3周；接種量單位：個菌體/克曬青毛茶）
[0072]
陽〇7：3] 表2 :不同溫度、時間下，TMCC 70011菌株發酵普巧茶的內含物質檢測結果:(接種 量：每克曬青毛茶1.0 Xl〇5個）
[0074]
[0075] 表3 :傳統的渥堆發酵普巧熟茶（渥堆發酵6周）（大益2013年7572普巧熟茶） 的品質檢測結果：
[0076]
[0077] 本實施例發酵的普巧熟茶與傳統渥堆發酵的普巧熟茶相比，湯色、香氣、滋味等感 官品質提高（見表4)。
[0078] 由本發明可知，將布朗克假絲酵母菌應用于普巧茶的生產，不僅能保持普巧茶原 有的品質，而且能增加普巧茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，且縮短了發酵的周期。運為普 巧茶滋味的豐富和新產品的開發提供了重要的應用基礎，對普巧茶產業的發展發揮了積極 的作用。
[0079] 表4 :實施例2發酵的普巧熟茶與傳統渥堆發酵的普巧熟茶（渥堆發酵6周，大益 2013年7572普巧熟茶）的感官評價比較：(+代表程度）
[0080]
【主權項】
1. 一種假絲酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏編號為CGMCC No. 8682。2. -種加工普海茶的方法，包括將分離純化的假絲酵母菌（Candida blankii)接種于 大葉種曬青毛茶中，進行發酵培養。3. 根據權利要求2所述的方法，其中所述大葉種曬青毛茶為已潮水的大葉種曬青毛 茶。4. 根據權利要求3所述的方法，其中所述已潮水的大葉種曬青毛茶的含水量為基于潮 水之前的曬青毛茶的總重量計為20-40% (m/m)。5. 根據權利要求2所述的方法，其中將處于生長指數期的所述假絲酵母菌接種于所述 的曬青毛茶中。6. 根據權利要求2所述的方法，其中所述假絲酵母菌的接種量為每克所述的曬青毛茶 接種 5· OX 104至 1. 0X 10 6個。7. 根據權利要求2所述的方法，其中在所述接種之前，對所述的曬青毛茶進行滅菌處 理。8. 根據權利要求2所述的方法，其中所述發酵培養在20-50°C的條件下發酵2-6周。9. 根據權利要求2所述的方法，其中所述發酵培養在25-45Γ的條件下發酵2-4周。10. 根據權利要求2所述的方法，其中在所述發酵培養時，對培養物進行補水。11. 根據權利要求2所述的方法，其中在所述發酵培養時，對培養物進行翻堆。12. 根據權利要求2所述的方法，其中所述假絲酵母菌為保藏編號為CGMCC No. 8682的 假絲酵母菌菌株。13. 假絲酵母菌（Candida blankii)在普海茶加工中的應用。14. 根據權利要求12所述的應用，其中所述假絲酵母菌為保藏編號為CGMCC No. 8682 的假絲酵母菌菌株。
【專利摘要】本發明涉及一種假絲酵母菌菌株及其應用，以及加工普洱茶的方法。所述假絲酵母菌(Candida？blankii)菌株，其保藏編號為CGMCC？No.8682。該菌株可用于普洱茶的加工。所述加工普洱茶的方法包括將分離純化的假絲酵母菌(Candida？blankii)接種于大葉種曬青毛茶中，進行發酵培養。本發明不僅能保持普洱茶原有的品質，而且能增加普洱茶的特殊香氣和湯色的明亮程度，可以得到湯色深紅略渾、甜感明顯、具有槐花香高揚持久特點的普洱熟茶，而且縮短了發酵的周期。CGMCC No.868220140106
【IPC分類】C12N1/16, C12R1/72, A23F3/10
【公開號】CN105670948
【申請號】
【發明人】高林瑞, 唐蜀昆, 劉韜, 盧開陽, 任萬增, 童一峰, 黃華偉, 田飛, 鄒小林, 盧曉慧
【申請人】勐海茶業有限責任公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年11月20日