對植物病害防治有用的假霉素的制作方法

專利名稱：對植物病害防治有用的假霉素的制作方法
技術領域：
本發明涉及假霉素(Pseudomycin)作為防治植物和作物病害有效殺真菌劑的應用，并且更具體地涉及假霉素防治引起植物和作物病害的具體真菌種類的應用。
背景技術：
一類新的抗真菌劑，假霉素，顯示有很大希望用于治療各種患者的真菌感染。(參見，也就是，Harrison，L.，等，“假霉素，來自丁香假單胞菌具有廣譜抗真菌活性的新穎肽家族”(Pseudomycins，a family ofnovel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrumantifungal activity)，普通微生物學雜志(J.Gen.Microbiology)，137(12)，2857-65(1991)和美國專利Nos.5,576,298和5,837,685)。假霉素是來自丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)分離物的天然產物。丁香假單胞菌是一個大的植物伴生細菌群，其已經是幾個生物活性物質的來源，例如桿菌肽和丁香霉素。丁香假單胞菌的天然菌株和轉座子致突變體都產生具有抗真菌活性的化合物。丁香假單胞菌MSU 174野生型菌株的轉座子致調節突變體，以MSU 16H(ATCC 67028)知名，產生幾種假霉素。假霉素A、B、C和C’已經被分離，其化學特征已經被描述，并顯示具有廣譜的抗真菌活性，包括抗人類和植物中的重要真菌病原體的活性。假霉素與丁香霉素和其他來自丁香假單胞菌分離物的抗真菌素在結構上相關但又明顯不同。假霉素A、B、C和C’的肽部分與帶有末端羧基的L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)一致，該末端羧基與N-末端絲氨酸上OH環合成大環。通過N-酰基側鏈來區分結構類似物，也就是，假霉素A由3，4-二羥基十四烷酸酯而N-酰化，假霉素B由3-羥基十四烷酸酯而N-酰化，假霉素C由3，4-二羥基十六烷酸酯而N-酰化，和假霉素C’由3-羥基十六烷酸酯而N-酰化。(參見，也就是，Bollio，A.，等，“來自丁香假單胞菌的新穎生物活性脂縮肽假霉素”(Novel bioactivelipodepsipeptides from Pseudomonas syringaethe pseudomycins)，歐洲生化學會聯合會快報(FEBS Letters)，355(1)，96-100，(1994)和Coiro，V.M.，等，“由對NMR數據進行距離幾何學和分子動力學的計算機模擬確定的丁香假單胞菌MSU 16H的植物毒性脂縮肽假霉素A的溶液構象”(Solution conformation of the Pseudomonas syringae MSU 16Hphytotoxic lipodepsipeptide Pseudomycin A determined by computersimulations using distance geometry and molecular dynamics from NMRdate)，歐洲生物化學雜志(Eur.J.Biochem.)，257(2)，499-456(1998).)本發明提供對植物和作物防治真菌病害特別有用的假霉素類化合物。
發明概述本發明的一個目的是提供治療或預防植物和作物病害的方法。
本發明的另外一個目的是提供應用某些假霉素治療或預防植物和作物病害的方法。
本發明還有另外一個目的是應用某些假霉素以預防或治療由真菌引起的植物和作物病害。
本發明的其他目的和優勢將隨著本發明描述的進行變明顯。
作為上述目的和優勢的補充，本發明提供預防或治療與真菌相關的植物和作物病害的方法，其包括將有效量的一種和多種假霉素產品應用于所述植物或作物。
優選實施方式描述本公開涉及發現統稱為假霉素的一類脂肽化合物新的、以前未知的作為殺真菌劑或抗真菌劑的應用。在優選的實施方式，個別的和作為一組的假霉素對于治療或保護受到與球腔菌(Mycosphaerella sp.)(真菌的有性階段或性階段)相關并且實際上與包括殼針孢(Septoriasp.)和尾孢霉菌(Cercospora sp.)這些所知真菌的所有各種無性階段相關的子囊真菌類侵害的植物特別有用。另外，許多其他非常重要經濟植物的致病真菌可被假霉素殺滅，包括Tapesia yallundae、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、婁地青霉(Penicillum roqueforti)、鏈核盤菌(Monilinia sp.)、白地霉(Geotrichum candidum)。所以，假霉素，獨自地或個別地，用于治療植物以預防它們受到這些真菌引起的侵害。
由這些生物引起病害類型的變化從貯藏的植物(水果和蔬菜)到非常嚴重的野外病害例如香蕉黑葉斑病(Black Sigatoka)以及斷莖病和小麥斑病。
本發現涉及以前未知的一批非常重要的植物致病真菌，這些真菌似乎生物學上相關并對一種或多種假霉素敏感，并且可以被這些假霉素抑制和殺滅。這些真菌和一些以前未被發現的其他真菌，產生地球上一些最嚴重的植物病害。目前這些真菌導致的疾病用人工合成殺真菌劑的一個或多個的復雜混合物來控制，這些殺真菌劑引起環境損害并且對人類健康可能有未知的危險。另一方面，對于控制某些植物病害的人工合成化學藥物的使用，假霉素提供了一個安全、有效的替代。另外，使用假霉素控制植物病害有一些好處，因為使用天然產物控制病害使得生產者能夠宣告作物在對產品有更多益處的生物/有機條件下生長。這是值得注意的，因為目前世界上還沒有任何主要作物使用天然殺真菌劑來控制植物病害。假霉素無疑地為農業生產者和消費者都提供了許多好處。
作為說明假霉素如何及為什么會對世界農業有益的例子，幾種假霉素例如假霉素A、B、B’、C和C’的最小抑制濃度(MIC)范圍為1mg/ml或更小。對于農業狀況的有效應用，這是非常理想的濃度。當進行抗斐濟球腔菌(Mycosphaerella fijiensis)分離物8088/88試驗時，這些化合物產生甚至更大的效應(小于1.0mg)。斐濟球腔菌是香蕉和大蕉(plantain)黑葉斑病的致病生物。目前，在世界范圍內，這些作物的生產者為了香蕉收成必須以30次/年的速度噴霧三種殺真菌劑(人工合成)的混合物。單是這一種病害呈現了整個世界每一種作物的殺真菌劑最大消耗。這些合成殺真菌劑使用的缺點有很多，包括1.它們的費用非常高(數百萬美元)；2.由于施用了殺真菌劑，生產者不能出售有機地生長的產品；和3.經過幾十年殺真菌劑連續使用產生對人類和環境健康風險的不確定性。種植園里香蕉樹冠下的土壤出現動物生命的貧乏并且顯示殺真菌劑殘余物的增加。另一方面，天然產生的假霉素看來對于控制香蕉葉斑病更有效，而同時對環境和人類健康提供益處。
另外，假霉素對許多其他引起植物病害的真菌有效，包括破壞貯藏時植物產品的真菌例如青霉(Penicillium sp.)、鏈核盤菌、地霉(Geotrichum sp.)。將假霉素用于收獲的水果能阻止真菌感染和貯藏腐爛。
還有其他可能的假霉素應用，包括在小麥上施用以控制由殼針孢，具體來說，S.nodurum和小麥殼針孢(S.triticii)引起的病害，并且，基于這些分子的生物活性，實際上是控制世界上引起任何植物病害的任何殼針孢引起的疾病。同樣地，與球腔菌相關的其他真菌受到影響，它們包括由尾孢霉菌引起的植物病害，尾孢霉菌造成甜菜和許多其他作物的葉斑病。其他致病生物體也受到假霉素的影響，它們包括Dreschslera portulaceae。
依照本發明，發現本文所描述的假霉素對以前未知的和密切相關的植物致病真菌族有巨大的抗真菌活性。本主族由有性階段真菌球腔菌和其無性階段的每一個段代表例如殼針孢和尾孢霉菌代表。通常，假霉素可以單獨使用或作為制劑混合物用于預防植物真菌感染。這些化合物對田間或貯藏作物的潛在應用是可以設想的。
于是，本發明的目的是展示許多非常重要經濟植物的致病真菌易受一種或多種假霉素作用的影響，假霉素最初從植物伴生細菌丁香假單胞菌分離得到。
對本發明方法有用的假霉素優選丁香假單胞菌產生的假霉素，包括鑒定為假霉素A、A’、B、B’、C和C’的假霉素及其衍生物例如假霉素A-PO4，其為磷酸鹽衍生物，和假霉素A-FB，二者都是已知的。
這些假霉素被用于多種易于感染真菌引起的寄生性病害的植物和作物。與此相關，本發明的假霉素組合物主要用于預防真菌引起的寄生性病害的發病，所以優選在病害發作前治療植物和作物。然而，假霉素組合物對于治療已感染植物也是有用的。
本發明的假霉素組合物在非常低的濃度即1至100微克級假霉素/毫升水溶液也有效。在這方面，本發明假霉素組合物應用的優選方法是治療時將指示濃度的假霉素組合物直接噴灑到需要治療的植物或作物。本發明的假霉素組合物可能是溶液、懸浮液或乳濁液形式，或者任何其他適于噴灑到植物和作物的形式。
本發明采用的優選假霉素和它們的制備方法是已知的或在下面申請中被完全公開和描述，即共同未決的于2000年4月14日提出申請的PCT/US00/08728和于2000年4月14日提出申請的PCT/US00/08727，這兩個申請都指定美國。這兩個申請的全部內容都是作為參考而引入本文。
正如本文所用，術語“假霉素”指具有下式I的化合物
其中R是親脂部分。假霉素化合物A、A’、B、B’、C、C’用上式I代表，其中R如下定義。
假霉素化合物AR＝3，4-二羥基十四烷酰基假霉素化合物A’ R＝3，4-二羥基十五烷酸酯假霉素化合物BR＝3-羥基十四烷酰基假霉素化合物B’ R＝3-羥基十二烷酸酯假霉素化合物CR＝3，4-二羥基十六烷酰基假霉素化合物C’ R＝3-羥基十六烷酰基正如本文所用，假霉素指已經從細菌丁香假單胞菌分離到的抗真菌劑家族的一個或多個成員。假霉素是脂縮肽(lipodepsipeptide)，并且是一個包括一個或多個非普通氨基酸和具有一個或多個附加疏水性或脂肪酸側鏈的環肽。具體說來，假霉素是脂縮九肽，其環肽部位由內酯鍵環合并包括非普通氨基酸4-氯蘇氨酸、3-羥基天冬氨酸、去氫-2-氨基丁酸和2，4-二氨基丁酸。認為這些非普通氨基酸跟假霉素的生物特征相關，例如血清中的穩定性和它們的殺滅活性。假霉素包括假霉素A、假霉素A’、假霉素B、假霉素B’、假霉素C和假霉素C’。這些假霉素的每一個具有相同的環肽核，但是它們的不同在于連在這個核上的疏水性側鏈。
假霉素A、A’、B、B’、C、C’的每一個已經被分離和純化并且它們的結構特征已經通過包括氨基酸序列分析、NMR和質譜的方法描述。假霉素A、B、C和C’在1996年11月19日授予G.Strobel等的美國專利No.5,576,298；Harrison等，“假霉素，來自丁香假單胞菌具有廣譜抗真菌活性的新穎肽家族”，普通微生物學雜志(J.Gen.Microbiology)，137，2857-2865(1991)；和Bollio等，“來自丁香假單胞菌的新穎生物活性脂縮肽假霉素”，歐洲生化學會聯合會快報(FEBSletters)，355，96-100，(1994)中被討論。假霉素A’和B’由PalaniappanKulanthaivel等在美國專利申請系列No.PCT/US00/08727中描述，標題為“假霉素天然產物”，申請日與本申請相同，并且在實施例中舉例說明，其全文作為參考而引入本文。幾個假霉素的抗真菌活性與具有以Tn 903命名的轉座子的丁香假單胞菌相關，其編碼的因子包括卡那霉素耐藥性。轉座子Tn 903的序列和操縱方法是已知的。Oka等，“卡那霉素耐藥性轉座子Tn 903的核苷酸排列順序”(Nucleotidesequence of the kanamycin resistance transposon Tn 903)分子生物學雜志(J.Mol.Biol.)147，217-226(1981)。本段落引用的每一個參考文獻都具體引入本文作為參考。
假霉素的結構和性質都不同。優選的假霉素A、B、C和C’顯示具有抗多種真菌的活性并且也顯示通常可接受的毒性。與其他優選的假霉素相比，假霉素B具有更大的抗某些真菌的潛力和更低的毒性水平。因此，對于目前的方法，更優選假霉素B。每個假霉素具有環形九肽環，其具有序列為Ser-Dab-Asp-Lys-Dab-aThr-Dhb-HOAsp-ClThr(絲氨酸；2，4-二氨基丁酸；天冬氨酸；賴氨酸；2，4-二氨基丁酸；別蘇氨酸；去氫-2-氨基丁酸；3-羥基天冬氨酸；4-氯蘇氨酸)，更具體來說，L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)，其ClThr的羧基和絲氨酸的羥基以內酯鍵成環。假霉素的不同之處在于與N-末端絲氨酸氨基相連的親脂部分的種類。絲氨酸的氨基在假霉素A中與3，4-二羥基十四烷酰部分的羧基形成酰胺鍵，在假霉素化合物B中是與3-單羥基十四烷酰部分形成酰胺鍵，在假霉素化合物C中是與3，4-二羥基十六烷酰部分形成酰胺鍵，在假霉素化合物C’中是與3-單羥基十六烷酰部分形成酰胺鍵。絲氨酸的羧基與環的Dab形成酰胺鍵。
本發明采用的假霉素可能以它們可接受的鹽的形式使用。術語“可接受的”，正如本文所用，指上面所述對活有機體基本上沒有毒性化合物的鹽類。通常可接受的鹽包括那些通過本發明的化合物與無機酸或有機酸或無機堿的反應來制備的鹽類。這樣的鹽稱為酸加成鹽和堿加成鹽。
通常用以形成酸加成鹽的酸是無機酸例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸和磷酸，和有機酸例如對甲苯磺酸、甲基磺酸、草酸、對溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸和乙酸。這些藥學可接受的鹽的實例是硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、單氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-2，6-二酸鹽、安息香酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽和扁桃酸鹽。優選的藥學可接受的加成鹽是那些由無機酸例如鹽酸和氫溴酸形成的鹽，和那些由有機酸例如馬來酸和甲基磺酸形成的鹽。
堿加成鹽包括那些來自無機堿的鹽，例如銨、堿金屬、堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽。于是對于制備本發明鹽有用的這類堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈣和碳酸鈣。尤其優選鉀和鈉的鹽形式。
應該認識到，形成本發明任何鹽的一部分的具體帶相反電荷離子不是關鍵本質，只要鹽總體上是藥學可接受的鹽并且只要帶相反電荷離子總體上使鹽不出現非理想性質。
在參考下列例子情況下本發明可能會更好的被理解。這些例子是為了代表本發明的具體實施方式
，并不是為了限制本發明的范圍。
保藏的生物材料公眾可由美國典型培養物保藏中心，Parklawn Drive，Rockville，MD，USA獲得丁香假單胞菌MSU 16H，編號ATCC 67028。丁香假單胞菌菌株25-B1、7H9-1和67H1在2000年3月23日被存放于美國典型培養物保藏中心并指定下列編號25-B1 編號PTA-16227H9-1 編號PTA-162367H1 編號PTA-1621假霉素從丁香假單胞菌的液體培養物中分離得到。丁香假單胞菌為植物伴生微生物，能產生多種毒植物素和其他復合肽1-3。在二十世紀八十年代后期，顯示丁香假單胞菌能產生抗真菌劑。基本上，有這樣的觀念即生長在植物上的內共生體產生抗真菌劑以預防植物的真菌病害。假霉素被鑒定為有生物活性的抗真菌劑。野生型丁香假單胞菌的轉座子致突變體顯示能高度表達這些天然產物。蒙大拿州大學(Montana State University)研制的這些轉座子致突變體菌株4被成功地用于接種榆樹以控制荷蘭榆病5-6。另外，這些天然產物已經顯示對大田作物、水果和其他植物(表1-3)病害具有選擇性的抗真菌活性。例如，假霉素顯示令人滿意的抗斐濟球腔菌活性(引起香蕉黑葉斑病的斐濟球腔菌比當今世界任何其他植物病害需要更多的殺真菌劑和殺真菌劑施用。假霉素也顯示能預防芒果的早熟腐爛。
實施例1這些天然產物的可再現大規模生產(千克)已經被成功地證實了。游離堿和替代鹽形式的純化樣品被制備。近似地，34種植物致病真菌被用來評價假霉素A、B、B’、C、C’的抗真菌特性。在第2天和第5天兩個時間點測定抑制濃度。
表1用感興趣的致病菌測試抗真菌活性a.向日葵鏈格孢(Alternaria helianthi)＝向日葵葉斑病b.絲囊霉(Aphanomyces sp.)＝許多植物的根腐、幼苗枯萎，包括甜菜c.麥根腐平臍蠕孢(Bipolaris sorokiniana)＝大麥粒枯病d.蔥腐葡萄孢(Botrytis alli)＝洋蔥灰霉頸腐病e.炭色旋孢霉(Cochliobolis carbonum)＝玉米葉枯病f.蒂腐色二孢(Diplodia natalensis)＝葡萄果腐病g.Dreschslera portulacae＝馬齒莧屬植物的葉斑病√h.D.teres＝大麥網斑病i.D.tritici-repentis小麥葉斑病j.燕麥鐮孢(Fusarium avenaceum)＝幾種大田作物的根腐病k.大刀鐮孢(F.culmorum)＝鐮孢菌赤霉病l.尖孢鐮孢(F.oxysporum)＝鐮孢菌維管枯萎病m.茄病鐮孢(F.solani)＝根腐n.白地霉＝番茄田間腐爛√
o.果生鏈核盤菌(Monilinia fructicola)＝核果的褐腐病p.斐濟球腔菌＝香蕉黑葉斑病√(圖3)q.婁地青霉＝貯藏水果的綠霉病√r.玉蜀黍葉點霉(Phyllosticta maydis)＝玉米黃色葉斑病s.疫霉(Phytophthoras)引起枯萎病、腐爛t.茄屬絲核菌(Rhizoctonia solani)＝絲核菌根腐u.油菜核盤菌(Sclerotina sclerotiorum)＝許多植物品種的頸腐病v.小麥殼針孢＝小麥葉斑枯病和穎斑枯病√(圖5)w.Tapesia acuformis＝造成小麥的所有病害x.玉蜀黍黑粉菌＝玉米黑穗病√y.大麗花輪枝孢(Verticillium dahliae)＝許多作物和樹種的黃萎病＝對假霉素非常敏感材料和方法在室溫下將被測試真菌培養于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)板上。假霉素和縮肽的原液以5mg/ml濃度懸浮于二甲基亞砜(DMSO)并在-20℃下貯藏。化合物的連續稀釋在試驗的當天完成。所有連續稀釋在DMSO中完成。注意對一些真菌進行甲醇中假霉素B和B’的初步試驗，幾個真菌顯示在甲醇存在下生長被抑制。在原始數據部分注意到這些。
在24-孔細胞培養器(Costar 3524)中完成檢驗分析，并且每孔有990ul馬鈴薯葡萄糖培養液(PDB，Difco)和10ul被測試化合物。初步測試濃度為50-1.56ug/ml(假霉素的最終濃度)。被測試假霉素的實際濃度為50、25、12.5、6.25、3.12和1.56ug/ml。每個孔接種適當的真菌。除非特別提到，真菌接種物由～4mm2PDA塊和真菌菌絲體組成。例外如下。玉蜀黍黑粉菌該真菌在PAD上生長很像酵母，將細胞從PAD原種盤刮出，重新懸浮于PDB并且向每個孔加入10ul接種物。鏈核盤菌該真菌的菌絲體在PDA上長成非常松散的薄片并且不粘附瓊脂塊。用金屬棒將真菌菌絲體磨碎于500ul PDB中并且向每個孔加入10ul接種物。斐濟球腔菌、大麥殼針孢(Septoriapasserinii)、小麥殼針孢這些真菌生長都很慢，所以如果將帶有真菌菌絲體的一小塊瓊脂作為接種物，則很難評價結果。對于這些真菌，用金屬棒將菌絲體磨碎于500ul PDB中并且向每個孔加入10ul接種物。
在2天和5天評價孔中真菌的生長。對一些生長緩慢真菌的生長在稍后日子評價，因為在2或5天進行評價是不可能的。通過由接種于990ul馬鈴薯葡萄糖培養液和10ul二甲基亞砜(DMSO)的真菌組成的對照比較來評價生長。使用另一個只由接種于PDB真菌組成的對照以確保DMSO不抑制真菌的生長。DMSO不影響任何所測試真菌，除Dreschslera portulacae注意到一些抑制之外。
顯示抑制作用的任何真菌被再次測試。對于被重復的試驗，新的原液用另一批次假霉素制成。注意假霉素B’和縮肽原液用第一次批材料再次制成，因為這些不包括在第二批次中。即使在添加最低水平假霉素情況下，這些真菌中的幾個顯示無生長，并在第三次用更低水平假霉素(2-0.0625ug/ml最終濃度假霉素)進行再測試。所測試的實際假霉素濃度為2、1、0.5、0.25、0.125和0.0625ug/ml。A-PO4和A-FB分別為假霉素A的磷酸鹽和游離堿。
表22天結果-指示濃度是導致無生長的化合物最低水平(ug/ml)。NI，無抑制作用；p(部分的)，至少50％抑制；-，沒有測出。如果試驗的次數大于1，那么對真菌進行的試驗次數在圓括號里注明。對于幾個生長緩慢的真菌，在觀察前過去的天數(如果與2天不同)被注明。
表35天結果-指示濃度是導致無生長的化合物最低水平(ug/ml)。NI，無抑制作用；p(部分的)，至少50％抑制；-，沒有測出(生長緩慢)。如果試驗的次數大于1，那么對真菌進行的試驗次數在圓括號里注明。對于幾個生長緩慢的真菌，在觀察前過去的天數(如果與5天不同)被注明。
以上試驗的回顧顯示一種或幾種假霉素對所測試真菌抑制最好，而不是所有被測試化合物在相同試驗方式都產生應答。即使初步試驗的假霉素最低濃度1.56ug/ml，六個真菌顯示無生長。這些真菌在甚至更低濃度假霉素情況下被再次測試。例如，即使在0.0625ug/ml假霉素A(PO4)、B和C(9天)情況下，Dreschslera portulacae顯示無生長。斐濟球腔菌的兩個不同分離物對低劑量假霉素的應答不同。香蕉葉斑病分離物似乎被每個下至～1ug/ml假霉素抑制。然而，8088/88分離物被假霉素B最好地抑制，濃度為0.125ug/ml培養21天無生長。小麥殼針孢和大麥殼針孢被所有假霉素強烈地抑制，當假霉素B濃度為0.0625ug/ml培養5天，小麥殼針孢顯示無生長，而當假霉素A(游離堿)、B、C和C’濃度為0.0625ug/ml培養5天，大麥殼針孢顯示無生長。假霉素C或C’對玉蜀黍黑粉菌的抑制最好，濃度為0.25ug/ml培養5天無生長。在所測試假霉素最高水平情況下，這些真菌中的一些顯示只有較小的生長抑制(例如，向日葵鏈格孢、絲囊霉、蔥腐葡萄孢、油菜核盤菌、Tapesia acuformis、Tapesia yallundae和大麗花輪枝孢)。對于幾種真菌，一種和幾種假霉素顯示很好抑制作用，但不是所有的。這些包括茄屬絲核菌，B’對其抑制最好(6.25ug/ml 5天無生長)；鏈核盤菌，B和C’對其抑制最好(6.25ug/ml 5天無生長)；白地霉，B對其抑制最好(3.12ug/ml 5天無生長)；和婁地青霉，B’對其抑制最好(1.56ug/ml 5天無生長)。
從這個數據可以得到結論，假霉素是一組選擇性“天然”殺真菌劑。一些對收獲后作物和其他植物品種引起感染的真菌對假霉素敏感(例如，青霉和地霉)。假霉素顯示對斐濟球腔菌(香蕉)有給人深刻印象的活性。初步制備物和純化的材料在植物病害控制方面具有潛在作用。假霉素的大規模生產是切實可行的并且生產相對便宜。天然產物或許具有環境相容性，并且可能是安全的。
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權利要求
1.預防或治療植物或作物抗真菌相關病害的方法，其包括將有效量的一種或多種假霉素組合物施用于所述植物或作物。
2.權利要求1的方法，其中假霉素是從植物伴生細菌丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)分離得到。
3.權利要求2的方法，其中所述假霉素選自假霉素A、假霉素A’、假霉素B、假霉素B’、假霉素C、假霉素C’。
4.權利要求1的方法，其中假霉素以水懸浮液、溶液或乳化液形式在大約1至100微克每毫升濃度范圍施用于所述植物或作物。
5.權利要求1的方法，其中所述假霉素組合物施用于易受球腔菌(Mycosphaerella sp.)和該真菌無性階段感染的植物。
6.權利要求1的方法，其中所述植物和作物選自香蕉、大蕉、向日葵、甜菜、大麥、洋蔥、玉米、葡萄、馬齒莧(bortulaca)、小麥、番茄和谷物。
全文摘要
通過最初從丁香假單胞菌分離到的假霉素組合物的應用來保護或治療易于受真菌相關疾病侵害的植物和作物。
文檔編號A01N43/713GK1536963SQ01814299
公開日2004年10月13日 申請日期2001年8月17日 優先權日2000年8月18日
發明者加里·A·斯特羅貝爾, 加里 A 斯特羅貝爾, J 羅德里格斯, 邁克爾·J·羅德里格斯 申請人:蒙大拿州立大學, 美國禮來公司