專利名稱：一種胎牛血清生產工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種胎牛血清，更具體地說涉及一種胎牛血清的生產工藝。
技術背景胎牛血清系健康懷孕母牛八月齡左右胎牛的血液為原料，經無菌采集、低 溫分離，微孔過濾分裝而成。具有極佳的促細胞生長作用，適用于原代和傳代 細胞株的保藏及嬌貴細胞的培養，主要用于高、精、尖的生物和醫學實驗當中。 目前，由于國內技術上的原因，暫時還沒有真正意義上的胎牛血清，幾乎全部依賴進口，進口胎牛血清價格偏高，每升達到6000元左右。從美國、歐洲進口 胎牛血清不僅成本高，而且有瘋牛病的隱患。發明內容本發明的目的是提供一種胎牛血清生產工藝，通過對胎牛血清生產的關鍵 過程，原血清的采集和生產過程的控制，開發并規模化生產高端優化的胎牛血 清產品，徹底改變我國胎牛血清完全依賴國外進口的狀況，大幅度提升中國牛 血清產業的技術層次和產品級別。本發明包括全封閉無菌采集、低溫分離、微孔膜過濾，其特點是將懷孕8個月左右的母牛進行剖腹產，產前采用側臥保定方法，麻醉采用全身麻醉和術 部局部麻醉相結合的方法。手術切口位置選擇在左肷窩腹壁的三分之一處，髂
結節下角IO公分的下方為起始位置，作反斜杠"/"標記，切口長為30公分， 到左乳房靜脈前8公分處。切至腹膜時，用止血鉗提出腹膜作一切U，再用手 術剪剪開腹膜，找準于宮，前推瘤胃，雙手抱出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的 腳或頭，將子宮大彎拉出腹壁切口處，在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗 布后，沿子宮角大彎，避開子宮阜，作一與腹壁切口等長的切口。然后抓住胎 牛前兩肢，抬出胎牛帶進潔凈室層流罩下的采血架上，將其背高頭低，頭部朝 右懸掛保定。胎牛拉出后縫合母牛子宮，在此同時對胎牛也進行心臟穿刺采血。 縫合子宮采用3#羊腸線，然后用0.9%生理鹽水沖洗腹腔，清理千凈后，在子 宮切口處涂上大油劑，將子宮納入腹腔，對整個腹腔作無菌處理，最后依次作 腹腔縫合。心臟穿刺采血前做好采血器械的準備和消毒工作，取一 30cm長的 20mm穿刺采血管，穿刺采血管通過離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛 皮紙包裹嚴密，再用高壓蒸汽滅菌器高壓1個小時。在第三肋間胸骨左緣的lH 中，用聽診器來確定心跳最顯的部位，用75%的酒精檫試消毒，最后將穿刺采血 管針頭垂直刺入心臟，血液隨即通過采血管進入離心瓶內。 一頭胎牛一個瓶， 采血完畢，立即換上無孔瓶蓋。將離心瓶放入大容量冷凍離心機以3400轉/分 的轉速離心30分鐘，析出血清在潔凈室的超凈臺上收集到己滅菌的容器內冷凍 保存。胎牛血清成品的生產在凈化車間內進行，首先做好原血清的解凍工作， 將原血清整齊地擺放在融凍間的鐵架上，核對容器編號，做好記錄，用26° C 熱風均勻地循環整個房間，使原血清化開。過濾和分裝在局部百級下進行，采 用進口的微孔過濾膜，過濾孔徑為0.1um，經過3次過濾；成品分裝貼完瓶簽 后，放入-2(TC以下速凍庫內快速冷凍24小時。本發明的優點是目前，胎牛血清幾乎全部依賴進口，進口胎牛血清價格 偏高，達到每升6000元左右。從美國、歐洲進口胎牛血清不僅成本高，而且有
瘋牛病的隱患。而我們采用本工藝生產的胎牛血清價格每升只有4000—5000元 左右，徹底改變了我國胎牛血清完全依賴國外進口的狀況，這樣可以大幅度提 升中國血清產業的技術層次和產品級別。
具體實施方式
胎牛原血清采集的關鍵技術主要是懷孕母牛的剖腹產和胎牛的全封閉無菌 心臟穿刺采血。對懷孕8個月左右的母牛進行剖腹產，產前采用側臥保定方法， 保定時兩前腿綁好向前拉，兩后腿綁好向后拉，頭部用繩固定。麻醉時采取全 身麻醉和術部局部麻醉相結合的方法，即全身麻醉采用2%普魯卡因腰旁神經干 傳導麻醉，局部麻醉分別麻醉第18肋間神經、髂腹下神經和髂腹股溝神經。確 實有效的麻醉是順利進行剖腹產的重要保證。因此，找準注射位置，垂直進針 達腰椎橫突游離端前角或后角，并將針前移至橫突前緣或后緣下刺1公分左右， 注射藥液10ml，然后提至皮下注射10ml，分別各點注射。術部表面用0.5%鹽 酸普魯卡因麻醉。用囊腫穿刺針，外套16號針頭作護套保護進針，邊推液邊后 退，效果較好。手術切口位置選擇在左肷窩腹壁的上三分之一處，髂結節下角 10公分的下方為起始部位，作反斜杠"/ "標記，切口長約30公分，到左乳房 靜脈前8公分左右處。該切口的優點是靠近子宮角，便于術中縫合快速收縮的 子宮，其次是內容物不易流入腹腔，減少腹腔被污染而帶來腹、盆兩腔感染而 引發的生殖系統器質性病變的風險。手術切口處一定要剃毛，并作嚴格消毒， 防止切口處的毛物污染術者的手及器械而引發術后感染傷口及兩腔。確保無菌 操作，防止污染腹腔，正確科學選定手術部位是成功手術的前提，也利于后續 操作的順利進行。手術時，術者手、器械要嚴格消毒。切開皮膚，肌層要果斷， 避免復刀。為避免手術刀傷及子宮或瘤胃，當切開腹腔切至腹膜時，用止血鉗 提出腹膜作一切口，再用手術剪剪開腹膜，找準子宮切口，前推瘤胃，雙手抱 出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的腳或頭，小心地將子宮大彎拉出腹壁切l」處， 在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗布后，沿著子宮角大彎，避開子宮阜， 作一與腹壁切口等長的切口。先剝離一部分子宮切口附近胎膜，然后抓住胎牛 兩前肢，由助手抬出胎牛后迅速帶進潔凈室，空氣潔凈度達到百級的層流罩卩 的采血架上，將其背高頭低、頭部朝右懸掛保定。快速、有效的子宮縫合是手 術成敗的關鍵，由于產出胎牛后的子宮收縮極快，因此，在胎牛拉出后一定要快速縫合子宮，在此同時對胎牛也進行心臟穿剌采血。縫合子宮使用3#羊腸線， 第一層對子宮切口全層連續縫合，第二層進行漿膜肌層連續內翻縫合術口，然 后用0.9%生理鹽水對腹腔沖洗、清理干凈，在腹壁切口處涂上大油劑，把子宮 納入腹腔。對整個腹腔作無菌化處理，最后依次作腹腔縫合，并對各層作無菌 化處理。在整個腹腔內操作過程中，嚴格做到無菌操作，杜絕術者手、針、刀、 剪等器械碰及卵巢、輸卵管等生殖附件。嚴格控制羊水、胎盤等碎片流入腹腔， 以免引起腹腔內感染。子宮要縫合確實，以防止子宮內容物流入腹腔引發的術 后感染。該階段操作中，關鍵是控制腹腔、盆腔污染，避免兩腔感染而引發生 殖道附件器質性病變而致不育。胎牛心臟穿刺采血前應做好采血器械的準備和消毒工作。取一 30cm長的 20mm穿刺采血管，然后將離心瓶瓶蓋打孔，其孔徑與穿刺采血管直徑相同，使 穿刺采血管通過1000ml離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛皮紙包裹嚴 密，再用高壓蒸汽滅菌器12rC高壓'l個小時左右。這樣穿刺采血管和離心瓶連 成一體，可以減少胎牛血接觸空氣污染機會，同時避免了由于紅細胞破裂，血 清溶血。采血前要探明心臟搏動最強部位，通常在第三肋間胸骨左緣的正中， 用聽診器來確定心跳最顯的部位，用75%的酒精擦試消毒后，將穿刺采血管針
頭垂直刺入心臟，血液隨即通過釆血管進入離心瓶內。注意事項(l)動作宜迅 速，縮短在心臟內的留針時間和防止血液凝固。(2)如果針頭已進入心臟但抽不 出血時，應將針頭稍微后退一點。(3)在胸腔內針頭不應左右擺動以防止傷及心， 肺。 一頭胎牛一個瓶，待血液收集完后，立即換掉采血時使用的離心瓶瓶蓋， 擰上無孔的離心瓶瓶蓋。將離心瓶放入大容量冷凍離心機內，以3400轉/分的轉 速離心30分鐘，再將析出的血清在潔凈室的超凈臺上收集到已滅菌的容器內， 并迅速冷凍保存。原血清在整個貯存過程溫度要求在-2(TC以下。為了便于溯源， 從開始就要做好各項記錄，如母牛的相關資料、生產過程記錄、 一只胎牛血清 的數量及其裝入容器的編號等等。胎牛血清成品生產在凈化車間內進行，首先做好原血清的解凍工作。根據 生產計劃，將原血清整齊地擺放在融凍間的鐵架上(要一一核對容器編號，并 做好記錄)，用26"C熱風均勻地循環整個房間，使得原血清能化開。尤其過濾和 分裝兩個關鍵過程是在空氣潔凈度達到百級的層流罩下的潔凈臺上進行的。采 用進口的微孔過濾膜，最小過濾孔徑為0.1um (100nm)，經過3次過濾。成品 分裝貼完瓶簽后馬上放入-2(TC以下速凍庫內快速冷凍24小時。胎牛血清成品 的貯存也在-2(TC以下。
權利要求
1、一種胎牛血清生產工藝，包括全封閉無菌采集、低溫分離、微孔膜過濾，其特征在于a、將懷孕8個月的母牛進行剖腹產，產前采用側臥保定方法；麻醉采用全身麻醉和術部局部麻醉相結合的方法；b、手術切口位置選擇在左肷窩腹壁的三分之一處，髂結節下角10公分的下方為起始位置，作反斜杠“/”標記，切口長為30公分，到左乳房靜脈前8公分處；c、切至腹膜時，用止血鉗提出腹膜作一切口，再用手術剪剪開腹膜，找準子宮，前推瘤胃，雙手抱出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的腳或頭，將子宮大彎拉出腹壁切口處，在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗布后，沿子宮角大彎，避開子宮阜，作一與腹壁切口等長的切口，然后抓住胎牛前兩肢，抬出胎牛帶進放置在潔凈室層流罩下的采血架上，將其背高頭低，頭部朝右懸掛保定；d、胎牛拉出后縫合母牛子宮，在此同時對胎牛也進行心臟穿刺采血；縫合子宮采用3#羊腸線，然后用0.9％生理鹽水沖洗腹腔，清理干凈后，在子宮切口處涂上大油劑，將子宮納入腹腔，對整個腹腔作無菌處理，最后依次作腹腔縫合；胎牛心臟穿刺采血是在潔凈室層流罩下進行的，心臟穿刺采血前要做好采血器械的準備和消毒工作，取一30cm長的20mm穿刺采血管，穿刺采血管通過離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛皮紙包裹嚴密，再用高壓蒸汽滅菌器高壓1個小時；在第三肋間胸骨左緣的正中，用聽診器來確定心跳最顯的部位，用75％的酒精檫試消毒，最后將穿刺采血管針頭垂直刺入心臟，血液隨即通過采血管進入離心瓶內；一頭胎牛一個瓶，采血完畢，立即換上無孔瓶蓋；e、將離心瓶放入大容量冷凍離心機中，以3400轉/分的轉速離心30分鐘，析出血清在超凈臺上收集到已滅菌的容器內冷凍保存；f、胎牛血清成品生產在凈化車間內進行，首先做好原血清的解凍工作，將原血清整齊地擺放在融凍間的鐵架上，核對容器編號，做好記錄，用26℃熱風均勻地循環整個房間，使原血清化開；g、胎牛血清的過濾和分裝在局部百級下進行，采用進口的微孔過濾膜，過濾孔徑為0.1μm，經過3次過濾；成品分裝貼完瓶簽后，放入-20℃以下速凍庫內快速冷凍24小時。
2. 根據權利要求1所述的一種胎牛血清生產工藝，其中所說的產前側臥保 定方法是將母牛兩前腿綁好向前拉，兩后腿綁好向后拉，頭部用繩固定。
3. 根據權利要求1所述的一種胎牛血清生產工藝，其中所說的麻醉時采用 全身麻醉和術部局部麻醉相結合的方法是全身麻醉采用2%普魯卡因腰旁神經 干傳導麻醉；局部麻醉分別麻醉第18肋間神經，髂腹下神經和髂腹股溝神經。
全文摘要
本發明涉及一種胎牛血清生產工藝。本發明包括全封閉無菌采集、低溫分離、微孔膜過濾，其特點是將懷孕8個月左右的母牛進行剖腹產，產前采用側臥保定方法，麻醉采用全身麻醉和術部局部麻醉相結合的方法。對胎牛進行全封閉無菌心臟穿刺采血，待血液收集完后，用大容量冷凍離心機以3400轉/分的轉速離心30分鐘，析出的血清在“局部百級”下收集到已滅菌的容器內，迅速冷凍保存。本發明的優點是進口胎牛血清價格偏高，達到每升6000元左右。從美國、歐洲進口胎牛血清不僅成本高，而且有瘋牛病的隱患。而我們采用本工藝生產的胎牛血清價格每升只有4000-5000元左右，徹底改變了我國胎牛血清完全依賴國外進口的狀況。
文檔編號A61D1/00GK101112334SQ20061010447
公開日2008年1月30日 申請日期2006年7月28日 優先權日2006年7月28日
發明者富小剛, 馬忠仁 申請人:蘭州民科生物技術中心