利用了新絲狀菌的植物的土壤傳染性病害防除材料的制作方法

專利名稱：利用了新絲狀菌的植物的土壤傳染性病害防除材料的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新菌株(SD-06菌株)，以及含有所述菌體或其培養物作為有效成分 的土壤傳染性病害防除材料，通過在對象植物的田地和/或苗床的土壤中混合施用所述新 菌株，保持防除土壤傳染性病害、特別是頂囊殼屬菌病害或鐮刀菌屬菌病害的效果。
背景技術：
土壤傳染性病害是一旦發生就很難防除、有可能會導致產地的損毀的重要病害。其 中，在蔬菜類中鐮刀菌屬菌引起的土壤傳染性病害的受災較大，涉及番茄凋萎病、菠菜凋 萎病、生菜根腐爛病、巻心菜枯黃病、草莓枯黃病、黃瓜、甜瓜、西瓜等的枯萎病等多方 面，是最重要的病害之一。目前，采用溴甲烷、三氯硝基甲烷這樣的化學農藥進行的土壤 熏蒸是最有效的技術，但是溴甲垸作為導致全球變暖的因子，它的制造，使用受到限制。 又，人們也指出，有關氣體藥劑的使用引起的附近居民的健康的擔憂、殺死土壤中有用微 生物或天敵昆蟲而引起土壤空洞化現象、增大由新侵入的病原菌引起的受害的問題(再猖 獗現象)等。因此，迫切希望有安全的、考慮到環境、效果穩定的微生物農藥出現。
非專利文獻1、 2中記載的Sterile Dark菌(K89株)是小麥根部共生菌，公認具有 對小麥立枯病(頂囊殼屬菌病害)的防除效果。但是，將小麥立枯病和Sterile Dark菌株 同時放入罐中使用的話，雖然立枯病的發病被減輕但是還不算充分。進而，假設實際農田 的情況下，在非專利文獻1所記載的1.5~2.5% (V/V) 土壤混合的實施條件下，需要非常 大量的材料，從成本上講，使作為微生物農藥的實用化困難。又，也沒有對蔬菜類的最重 要土壤傳染性病害鐮刀菌屬菌病害的防除效果進行研究。
又，除Sterile Dark菌之外，人們也進行了大量生物防除法的嘗試，所述生物防除法 是，通過將對非病原性鐮刀菌屬菌(非專利文獻3)、芽孢桿菌屬菌(專利文獻1和2)， 假單胞菌屬菌(專利文獻5、 6)，木霉屬菌(專利文獻3、 4)等病原菌具有防除作用的微 生物(細菌、絲狀菌)接種到土壤或植物中從而除去土壤傳染性病害。但是，存在諸如這 樣的問題，難以讓施用的菌在土壤中穩定地生息、防除效果不穩定，此外，非病原性鐮刀 菌屬菌等植物內生菌的情況下防除效果也只能持續短時間等，還不能達到充分的病害防除
3效果。
專利文獻l:特開平3-128988 (芽孢桿菌屬菌) 專利文獻2:特開平4-117278 (芽孢桿菌屬菌) 專利文獻3:特開平1-102010 (木霉屬菌) 專利文獻4:特開平2-245178 (木霉屬菌) 專利文獻5:特開平2-35075 (假單胞菌屬菌) 專利文獻6:特開平5-916 (假單胞菌屬菌)
非專利文獻l:"有用微生物的有効使用技術"土壤和根圈IV，pl31-136, 1986 非專利文獻2: Ann. Phytopath. Soc. Japan 57:301-305, 1991
非專利文獻3:"非病原性尖孢鐮刀菌引起的紅薯枯萎病的防除和其實用化"今月農業10
月號pl9國22 (2003)

發明內容
本發明的課題在于提供一種不受土壤中微生物群的影響、少量施用就能發揮穩定的 土壤傳染性病害防除效果的材料，此外，提供使用所述材料的植物的土壤傳染性病害防除 方法。
本發明提供新絲狀菌SD-F06菌株，其能夠在各種植物的根部共生、具有防除土壤傳 染性病害的能力。本發明還提供含有絲狀菌SD-F06菌株的菌體或培養物的土壤傳染性病 害防除材料、使用所述材料的植物的土壤傳染性病害防除方法。
艮P，本發明的主要內容如下
(1) 絲狀菌SD-F06菌株(FERM BP-10841)或其變異株，具有在植物的根部感染、 共生的能力，且具有防除在感染、共生的植物中發病的土壤傳染性病害的效果。
(2) —種土壤傳染性病害防除材料，含有(1)所記載的SD-F06菌株或其變異株的 菌體、或者其培養物作為有效成分。
(3) —種土壤傳染性病害防除方法，其特征在于，使用(2)所記載的土壤傳染性 病害防除材料對生長植物的土壤進行處理。
(4) 如(2)所記載的土壤傳染性病害防除材料，所述土壤傳染性病害是由植物病 原性絲狀菌引起的病害。
(5) 如(3)所記載的土壤傳染性病害防除方法，所述土壤傳染性病害是由植物病 原性絲狀菌引起的病害。
4(6) 如(4)所記載的土壤傳染性病害防除材料，所述由植物病原性絲狀菌引起的 病害是由鐮刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝菌屬菌、疫霉屬菌、菌 核屬菌、伏革菌屬菌、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微結節屬菌、核盤菌屬菌中的 任意一種以上引起的病害。
(7) 如(5)所記載的土壤傳染性病害防除方法，所述由植物病原性絲狀菌引起的 病害是由鐮刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝菌屬菌、疫霉屬菌、菌 核屬菌、伏革菌屬菌、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微結節屬菌、核盤菌屬菌中的 任意一種以上引起的病害。
發明效果
(1) 本發明的由北海道的田地土壤中獲得的新植物共生菌SD-F06菌株，可以在各 種植物的根內部共生，具有防除使共生植物患病的土壤傳染性病害的能力。
(2) 本發明的SD-F06菌株共生可能的植物種的范圍廣，可以適用于非常廣范圍的 植物的土壤傳染性病害的防除。
(3) 本發明的SD-F06菌株對于蔬菜類最重要的土壤傳染性病害的鐮刀菌屬病害顯 示出較高的防除效果。
(4) 通過將本發明的SD-F06菌材料混合到植物的育苗用培養土中、作成共生苗， 即使移植到田地中后，也不受土壤中微生物群的影響而發揮穩定的防除效果。又，菌對植 物的共生持續一個月以上。
(5) 混合到育苗用培養土中的本發明的SD-F06菌材料的量為1% (W/V)以下就足夠 了，由于能夠以非常少的施用量獲得高的防除效果，因此能夠提供經濟性高的防除材料。


圖l:顯示根據鄰接法制作的SD-F06菌株的分子系統樹。左下線表示定標線。
具體實施例方式
以下，詳細說明本發明。
本發明的新絲狀菌SD-F06菌株可以在各種植物的根部內共生，具有防除土壤傳染性 病害的能力。
本發明的新絲狀菌SD-F06菌株是通過對來自北海道的小麥連耕田土壤的植物根內部 共生菌進行篩選而得到的。SD-F06菌株的特征是，在馬鈴薯右旋糖瓊脂培養基、麥芽提
5取液瓊脂培養基、麥片瓊脂培養基上的菌落呈褐色、絲絨狀，且培養基上的沒有孢子形成。 因此，形態學分類困難。
通過18S rRNA分析可知，本發明的新絲狀菌SD-F06菌株是屬于子囊菌綱的新菌株， 與根據暗色有隔內生真菌(dark s印tate endophyte) DS16b、 Sterile dark K89菌 (euascomycete sp. K89)的18S rRNA分析的序列具有99.8%的相同性，但是它在子囊 菌綱以下的分類學位置不清楚。SD-F06菌株的進化系統樹如圖l所示。
本發明的新絲狀菌SD-F06菌株于2006年7月26日以保藏號FERM BP-10841保藏在 獨立法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心(亍305 — 8566日本國茨城縣筑波市東 1-1-1，中央第6)。
本發明的菌株或變異株可以在各種植物的根部內感染、共生，是具有防除土壤傳染 性病害能力的SD-F06菌株或其變異株。
本發明的"變異株"中，只要是具有如上所述的在植物根部感染、共生的能力以及 防除植物的土壤傳染性病害效果的菌株，也包括那些從SD-F06菌株衍生的任何變異株。 變異株可以通過采用紫外線照射、X線照射、變異誘發劑(例如，N-甲基-N-硝基-N-亞硝 基胍等)等人工變異手段對SD-F06菌株進行變異誘發，通過選擇具有病害防除效果的株 而獲得。又，只要是具有病害防除效果，也包括SD-F06菌株的自然變異株。
以下說明書記載中的"SD-F06菌株"這個詞也有時候用作為"SD-F06菌株或其變異 株"的意思。
本發明的"具有在植物根部感染、共生能力"是指在生長的植物的根中在適宜的條 件下生長或繁殖，且不會給植物帶來使植物的組織變形，變色等不良影響。
某種菌株是否具有在某種植物的根部感染*共生的能力是通過將該菌株的菌體施用 到該植物體或該植物所栽培的土壤中后，在合適的條件下栽培該植物一個月時，可以通過 確認該菌株的菌體是否在該植物的根內生長或繁殖，且不會給該植物帶來使植物的組織變 形，變色等不良影響來判斷的。某種菌株的菌體是否在植物的根內生長或繁殖可以使用例 如后述的實施例2中記載的方法來確認。又，是否會對給該植物帶來使植物的組織變形' 變色等不良影響可以通過目視等確認。'
"具有在植物根部感染、共生的能力"中的"植物"只要是本發明的新絲狀菌SD-F06 菌株能夠感染、共生的植物則沒有特別限制。本發明的SD-F06菌株能夠共生的植物種類 范圍較廣，僅已確認的植物種就有禾本科植物(小麥、燕麥、玉米、草坪草、牧草)、葫 蘆科植物(西瓜、甜瓜)、茄科植物(西紅柿、茄子、馬鈴薯)、豆科植物(大豆、小豆、
6扁豆)、十字花科植物(白菜)、菊科植物(生菜)、藜科植物(甜菜)、百合科植物(蘆筍、 蔥)、鳶尾科(小蒼蘭)等多種。因此，對于上述各科所屬的植物自不用說，也有可能適 用于其他種類，例如蓼科植物、旋花科植物、錦葵科植物、天南星科植物、傘形科植物、 姜科植物、唇形科植物、薔薇科植物、薯蕷科植物、桔梗科植物、玄參科植物、報春花科 植物、石竹科植物、蘭科植物、龍膽科植物等非常廣范圍的植物的土壤病害防除。
本發明中"具有防除在感染、共生植物中發病的土壤傳染性病害的效果"是指，具 有預防或治療植物病害的效果的菌株。
這里，"具有預防植物病害的效果的菌株"是指除了施用其菌株以外，在同樣合適的 條件下，含有其植物的病害的病原菌的土壤中將能夠感染的植物栽培一個月時，施用了其 菌株的植物的發病度比沒有施用其菌株的植物的發病度(參考后述實施例4)低，又，"具 有治療植物病害的效果的菌株"是指，除了施用菌株以外，在同樣合適的條件下，將感染 植物病害的植物栽培一個月時，施用菌株的植物生病程度比沒有施用菌株的植物的生病程 度降低。
本發明中的"具有防除植物病害的效果的菌株"中，具體而言，例如包括，進行后 述實施例4的實驗時的防除值通常為50%以上，較好的是60%以上，更好的是90%以上的 情況。
本發明中的"植物的病害"只要是本發明的新絲狀菌SD-F06菌株發揮防除效果的植 物病害就沒有特別限制，但是較好的是通過病原菌感染植物引起的植物病害，更好的是土 壤病害。本發明中，防除對象的土壤病害較好的是土壤傳染性病害，更詳細地，是指由鐮 刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝菌屬菌、疫霉屬菌、菌核屬菌、伏 革菌屬菌、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微結節屬菌、核盤菌屬菌中的任意一種以 上引起的病害，但是并不局限于此。
本發明的土壤傳染性病害防除材料是含有SD-F06菌株的菌體或其培養物的材料， SD-F06菌株的菌體或其培養物可以通過在栽培各種植物時的培土中混合等，使SD-F06菌 株在植物的根部感染、共生，進而防除土壤傳染性病害。
本發明的SD-F06菌株的培養可以按照和通常的微生物培養方法同樣的方法進行。例 如，在實驗室中，在馬鈴薯右旋糖瓊脂培養基中23'C下培養10天等的培養法等。大量培 養時，可以是通常的液體培養，或者也可以是麩、燕麥等植物來源的固體成分、采用了含 浸糖、氮源的多孔質體等的固體培養。得到的培養物可以原樣或者根據需要干燥后用作為 本發明的材料。本發明的較好的實施方式中，本發明的土壤傳染性病害防除材料可以使用
7實施例1中記載的方法進行制造。
本發明的材料，可以通過僅將本發明的SD-F06菌株的菌體在水等液體中懸濁而制造，
也可以混合其他成分，作為液劑、粉劑、粒劑、煙霧劑等制劑來制造。其他的混合成分， 可以例舉液體載體、固體載體、表面活性劑(乳化劑、分散劑、消泡劑等)、輔助劑等，
可以混合使用其中的1種或2種以上。
液體載體可以例舉磷酸緩沖液、碳酸緩沖液、生理鹽水等。又，固體載體可以例舉，
高嶺土、粘土、滑石、白堊、石英、綠坡縷石、蒙脫土、硅藻土等天然礦物粉，硅酸、氧 化鋁、硅酸鹽等合成礦物粉，結晶性纖維素、玉米淀粉、明膠、藻酸等高分子天然產物。 又，表面活性劑可以例舉，聚氧乙烯-脂肪酸酯、聚氧乙烯-脂肪醇醚、烷基芳基聚乙二醇 醚、烷基磺酸酯、垸基硫酸酯、芳基磺酸酯等。輔助劑可以例舉，羧甲基纖維素、聚氧乙 炔乙二醇(polyoxyacethyleneglycol)、阿拉伯膠、淀粉、乳糖等。
又，以水系溶劑作為載體制造液體制劑時，為了提高溶劑中的菌體的水和性，可以 添加水溶性高分子。水溶性高分子可以例舉聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯甲基醚、聚乙烯 胺、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺、聚丙烯酰胺等。進而，為了提高SD-F06菌株的植物 根部的附著性和SD-F06菌株在制劑中的穩定性，可以混合木葡聚糖和瓜爾膠等多糖類。
本發明的材料中含有的SD-F06菌株的濃度，只要是不損害本發明的效果則無特別限 制，但是作為制劑是10M()8CFU/g (菌落形成單位)，較好的是10M0kFU/g (菌落形成 單位)。可以根據使用的SD-F06菌株的防除效果等適當地進行改變。
以粒劑或粉劑的形式使用本發明的材料時，可以用水稀釋至變成材料重量的 10 50000倍的重量來使用，較好的是用水稀釋至變成材料重量的100~10000倍的重量來 使用。
又，除上述物質外，只要不妨礙本發明的效果，本發明的材料也可以含有用于材料 等中所含有的SD-F06菌株的培養的培養基等任意物質。
關于本發明的材料的使用方法，沒有特別限制，根據劑型等的使用形態、農作物或 病害適當選擇，可以例舉，地上液劑散布、地上固形散布、空中液劑散布、空中固形散布、 水面施用、設施內施用、土壤混合施用、土壤灌溉施用、表面處理(種子粉衣、涂布處理 等)育苗箱施用法、單花處理、株元處理等方法，較好的可以例舉，將各種劑型的材料涂 布在栽培植物的種子*種塊莖上，對栽培植物的花進行單花處理，對栽培植物的莖葉進行 處理，對栽培植物的傷口部位、修剪部進行涂布處理，土壤灌注、土壤混合等方法。這里， 施用于土壤時，可以將本發明的材料施用到土壤中后再種植栽培植物，又，也可以將栽培植物種植到土壤中后再將本發明的材料施用到其土壤中。
又，將本發明的材料施用到栽培植物中時，可以混合施用殺蟲劑、殺線蟲劑、殺螨 劑、除草劑、殺菌劑、植物生長調節劑、肥料、土壤改良材料(泥炭、腐殖酸材料、聚乙 烯醇系材料等)等，或者可以不混合而同時施用或交替施用。
對本發明的材料的施用量沒有特別限制，可以根據病害的種類、適用植物的種類、 材料的形態等適宜地調節。例如，將液劑材料地上散布時，散布液中的SD-F06菌株的濃 度通常是102~108CFU/g (菌落形成單位)，較好的是104~107CFU/g (菌落形成單位)，施 用量可以是0.5~100L/a。又，粒劑、粉劑等可以不用進行任何稀釋直接以制劑的形式施用。 粒劑、粉劑等地上散布時，較好的是散布為使SD-F06菌株的施用量成為102~109CFU/a 左右。
(實施例)
以下，舉出實施例對本發明進行更詳細的說明，當然，本發明并不局限于這些實施例。
實施例1
含有SD-F06菌株的材料的制作
在市售的燕麥100g中添加50ml水，12rC下滅菌30分鐘，制作固體培養用基材。 在所述基材上，添加一部分的菌體，所述菌體是以SD-F06菌株(FERM BP-10841)作為菌 種在瓊脂平板培養基(馬鈴薯右旋糖培養基)上23'C下增殖2周的菌體，然后，在23'C 培養10天后，通過在室溫下風干得到SD-F06菌株的固體培養物。接著，將風干的培養物 用研磨機粉碎，作為SD-F06菌株材料用于下述實施例2以后的研究。
實施例2
SD-F06菌株對各種植物的感染、共生的確認
制作將實施例1中制作的SD-F06菌株材料在市售園藝用培養土 (與作N-15:全農) 中混合0. 5% (W/V)的物質，填充到32孔網眼槽(cell tray)(苗作〈:〕"亇、乂 (株) 生產)中，灌水后，播種表l所示的各種植物，在18 24'C的溫室下栽培。播種25天后， 取出各種植物的苗，用自來水活水將苗的根部清洗干凈5分鐘，除去培養土后，用次氯酸 鈉(0.5%液體)對根部的表面殺菌。接著，將根部靜置在含有50ppm鏈霉素的馬鈴薯右旋 糖瓊脂培養基中，15。C下2周后，觀察形成的菌落。由于從SD-F06菌株共生的苗的根部 形成黑褐色的SD-F06菌的菌落，所以可以與非共生苗區別開來。結果，判明SD-F06菌株 如表1記載，能夠在非常多種類植物的根部感染、共生。[表l]
表1 SD-F06菌株共生的植物例
分類植物名
葫蘆科西瓜、甜瓜、葫戸
茄科西紅柿、茄子、馬鈴薯
十字花科白菜
豆科大豆、小豆、扁豆
藜科菠菜、甜菜
禾本科小麥、玉米、未本科牧草
百合科蔥、蘆筍
菊科生菜
其他小蒼蘭
實施例3
小麥立枯病防除試驗
將小麥立枯病菌Gaeumannomyces graminis (頂囊殼屬菌株)在大麥培養基培養的固體 培養物混合到市售園藝培養土中使成為0. 5% (W/V)后，進而，將實施例1中制作的材料 (SD-F06菌株)和按照同樣的方法制作的Sterile Dark菌(K89菌株)材料根據表2記 載的比例混合，分別填充在1000ml容積的塑料罐中。接著，在塑料罐中播種小麥(農林 61號)，18 24'C的溫室中栽培。栽培30天后，分5階段評價發病的程度。如表2所示， 已判明，在Sterile Dark菌2. 0% (W/V)混合區防除值為39. 5%，而在新菌株SD-F06菌 株l.O (W/V)混合區防除值是57.將，顯示出以小的量取得高防除值。
〈發病度的評價〉
*發病度0:無發病、1: 10%發病、2: 30%發病、3: 50%發病、4: 80%發病、5: 100%
枯死
表2小麥立枯病的防除效果
發病度(平均)防除值(％)
無處理3.8-
Sterile Dark菌(2. 0%混合區)比較例12.339. 5
SD-F06 (1.0%混合區)實施例31.657.9
實施例4
生菜鐮刀菌屬病害的防除試驗
10在市售園藝培養土中混合實施例1中制作的SD-F06菌材料0. 5。/。(W/V)后，填充800ml 到32孔網眼槽(苗作〈A^ : 〕A亇、乂 (株)生產)中，灌水。在槽中播種生菜(品種 Cisco)種子，在18 24'C的溫室下栽培。播種14天后，將生菜根腐凋萎病菌Fusarium oxysporum (鐮刀菌屬菌)在麩培養基中培養的固體培養物與市售園藝培養土混合使濃度成 為0.125% (W/V)，填充到1000ml容積的塑料罐中。接著，將在網眼槽栽培的生菜苗移植 到制作的鐮刀菌污染罐中，30天后分為地上部分和地下部分(根部)評價生菜的患病情 況。地上部分與健康生菜相比較，將發病度分為3階段目測評價。地下部分用剃刀將主根 部切成2部分之后，以3階段評價導管的褐變程度。如表3所示，已判明，即使施用0. 1%、 0.3% (W/V)也能獲得充分的鐮刀菌屬菌病害的防除效果。又，已判明，僅在苗制作時施 用，移植后也能維持防除效果。
〈發病度的評價〉
*地上部分發病度0:無凋萎、1:略有凋萎、2:相當程度的凋萎、3:枯死 *地下部分發病度0:沒有褐變、1:略有褐變、2:褐變、3:褐變至冠部以上 *發病指數=[5:(不同程度發病株數X發病度)/調査株數X3]X100 [表3]
表3生菜鐮刀菌病害的防除效果
SD-F06菌株施 用濃度(制作孔 苗時)地上部分地下部分發病指數防除值(％)發病指數防除值(％)
0%27-80-
0.1%01004050.0
0.3%01004050.0
1%01003358.3
產業上的可利用性
本發明的新絲狀菌SD-F06菌株能夠在各種植物的根部內感染、共生，具有防除土壤傳 染性病害的能力，產業上是有用的。含有本發明的新絲狀菌SD-F06菌株的菌體或培養物 的土壤傳染性病害防除材料也同樣地在產業上是有用的。
1權利要求
1.絲狀菌SD-F06菌株(FERM BP-10481)或其變異株，具有在植物的根部感染、共生的能力，且具有防除在感染、共生的植物中發病的土壤傳染性病害的效果。
2. —種土壤傳染性病害防除材料，含有權利要求1所記載的SD-F06菌株或其變異株 的菌體、或者其培養物作為有效成分。
3. —種土壤傳染性病害防除方法，其特征在于，使用權利要求2所記載的土壤傳染 性病害防除材料對使植物生長的土壤進行處理。
4. 如權利要求2所記載的土壤傳染性病害防除材料，所述土壤傳染性病害是由植物 病原性絲狀菌引起的病害。
5. 如權利要求3所記載的土壤傳染性病害防除方法，所述土壤傳染性病害是由植物 病原性絲狀菌引起的病害。
6. 如權利要求4所記載的土壤傳染性病害防除材料，所述由植物病原性絲狀菌引起 的病害是由鐮刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝菌屬菌、疫霉屬菌、 菌核屬菌、伏革菌屬菌、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微結節屬菌、核盤菌屬菌中 的任意一種以上引起的病害。
7. 如權利要求5所記載的土壤傳染性病害防除方法，所述由植物病原性絲狀菌引起 的病害是由鐮刀菌屬菌、頂囊殼屬菌、絲核菌屬菌、腐霉屬菌、輪枝菌屬菌、疫霉屬菌、 菌核屬菌、伏革菌屬菌、根腫菌屬菌、根霉屬菌、木霉屬菌、微結節屬菌、核盤菌屬菌中 的任意一種以上引起的病害。
全文摘要
本發明提供新絲狀菌SD-F06菌株，其能夠在各種植物的根部感染、共生，具有防除土壤傳染性病害的能力。本發明還提供含有絲狀菌SD-F06菌株的菌體或培養物的土壤傳染性病害防除材料、使用所述材料的植物的土壤傳染性病害防除方法。
文檔編號A01N63/00GK101517065SQ20078003396
公開日2009年8月26日 申請日期2007年9月11日 優先權日2006年9月15日
發明者安部浩, 川端孝博, 成田保三郎 申請人:出光興產株式會社;國立大學法人東京農工大學