專利名稱：：脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及防霉劑
技術領域：
，更具體地，涉及飼料防霉劑
技術領域：
，特別是指脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應用。
背景技術：
：飼料在儲存、運輸、銷售和使用過程中，由于飼料中水分的變化和環境的影響，極易發生霉變，大量生長和繁殖的霉菌污染祠料，飼料發霉和霉菌毒素中毒癥是世界范圍內畜禽生產中普遍存在的嚴重問題，控制祠料霉變是祠料生產中不可忽視的環節。霉菌的防治主要有輻射滅菌、使用防霉劑、使用防霉包裝、化學消毒和輻射結合防霉、控制真菌遺傳密碼等方法。但目前應用最為廣泛、效果較好而且成本較低的方法是使用防霉劑。目前常用的防霉劑品種有丙酸和丙酸鹽、山梨酸及其鉀鹽、苯甲酸及其鈉鹽和雙乙酸鈉等。這些防霉劑對保護飼料品質、促進畜牧業健康發展有著十分重要的作用，其經濟和社會效益得到了人們的充分肯定。但也存在一定的問題，如丙酸有刺激性氣味以及很強的腐蝕性，受熱損失大，揮發快，使用不太方便；山梨酸及其鉀鹽防霉效果受pH值的影響，pH值大于7.5時，幾乎無抑菌作用，對乳酸菌幾乎無效，在水中易氧化，在塑料容器中其活性會降低，在空氣中不穩定，能被氧化著色，有吸濕性；苯甲酸及其鈉鹽對pH值要求很窄，只能在酸性條件下發揮作用，pH值大于4時防霉作用開始下降，有苦澀等不良味道；當飼料霉變嚴重時或雙乙酸鈉量達不到完全抑菌時，雙乙酸鈉它本身可作為微生物的營養源反而促進了霉菌的生長，相應增加雙乙酸鈉的量可完全抑菌，但又增加了防霉成本。脫氬醋酸鈉的最大特點是抗菌范圍廣，它通過滲透進入微生物的細胞壁，干擾細胞內各種酶體系而產生作用，主要抵抗常易使飼料、食品、飲料中繁殖而引起的腐敗變質的細菌、酵母菌、霉菌等微生物，特別是假單孢子菌、葡萄球菌和大腸桿菌。耐光耐熱性好，受酸堿度影響較小，有效使用濃度較低，且水溶液穩定，不會在加工過程中受熱分解，或隨水蒸氣揮發，但是不清楚不同條件下脫氫醋酸鈉對幾種霉菌的抑制濃度，妨礙了脫氫醋酸鈉在飼料生產中作為防霉劑的應用。
發明內容本發明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種脫氬醋酸鈉在飼料防霉中的應用，該應用提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產中用作防霉劑奠定了基礎。為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下一種脫氬醋酸鈉在飼料防霉中的應用，其特點是，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對混合霉菌的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，所述脫氫醋酸鈉對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最j氐抑菌濃度為80mg/kg。較佳地，經12rC高溫處理30min后，所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg。較佳地，pH=5.5時所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg。較佳地，pH-7.0時所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg。較佳地，pH-7.5時所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。本發明主要以防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌或禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌為對象，提供了脫氫醋酸鈉對幾種不同霉菌的最低抑菌濃度，以及不同pH條件下的最低抑菌濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產中用作防霉劑奠定了基礎。具體實施方式為更好的理解本發明的內容，下面結合具體實施例作進一步說明。測定最低抑制溶度釆用最低抑菌濃度(MIC)法，該方法根據防霉劑能夠抑制霉菌生長的最低抑菌濃度來判斷防霉劑抑菌效果，抑菌濃度愈低，防霉效果愈佳。實施例中所用到的稀釋液0.85%生理鹽水，稱取分析NaC18.5g，定容1000ml，12rC高溫高壓滅菌30min。實施例中還具體用到了下列三種培養基①高鹽察氏培養基硝酸鈉2g、磷酸二氫鉀lg、疏酸鎂(MgS04.7H20)0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、氯化鈉60g、蔗糖30g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml;稀釋液0.85%生理鹽水。②查氏培養基蒸餾水1000ml、硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀lg、硫酸鎂0.5g、氯化鉀0.5g、石克酸亞4失0.01g、蔗糖30g、瓊脂15g。③馬鈴薯瓊脂培養基馬鈴薯去皮切成薄片，每200g馬鈴薯加自來水1000ml，置電爐上80。C溫浸lh，用紗布過濾，稀釋到1000ml，15磅30min滅菌即為20。/。的馬鈴薯浸汁。每100ml馬鈴薯浸汁加葡萄糖2g,加瓊脂1.5-2g,15磅30min滅菌即得固態馬鈴薯瓊脂培養基。這三種培養基的pH值調成4.5。實施例l脫氫醋酸鈉對飼料中霉菌最低抑制溶度(MIC)測定1.1制備霉菌孢子懸液稱取有霉菌的雞飼料25g，該飼料購自南京農業大學動物科技學院飼料加工實驗室，放入含有滅菌的生理鹽水250ml的三角瓶中，置振蕩器上振蕩30min，用10ml移液管吸取10ml的上述帶霉菌的生理鹽水l:10稀釋于25ml試管中，用洗耳球及lml移液管反復吹吸50次，使霉菌孢子分散開。取lml此帶霉菌的稀釋液加入9ml生理鹽水，充分混合得l:IOO帶霉菌的稀釋液。取l:100帶霉菌的稀釋液lml，加到100ml滅菌生理鹽水中，充分混合得l:IOOOO帶有霉菌的稀釋液(此稀釋液每毫升含有霉菌菌落數大致100個)。1.2制備含不同脫氫醋酸鈉溶度的平板分別取防霉劑脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號20071011，規格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250ml滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右3min5min，使防霉劑的有效成分充分溶解，分別加入無菌培養皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養基①19ml，充分混勻待其凝固后，最終溶度為40mg/Kg、50mg/Kg、60mg/Kg、70mg/Kg、80mg/Kg。同時設對照組，每組做兩個平板作重復。1.3接種用移液槍加入步驟l.l制備的lml1:IOOOO帶霉菌的稀釋液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28。C的培養箱中培養72小時后觀察，培養觀察一周。無微生物生長的最低濃度為其最低防霉濃度。1.4結果表l:脫氫醋酸鈉最低抑菌濃度脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白4050607080霉菌生長情況++++++++++--Note:"+，，ispositive,meansmoldcangrow;"-，，isnegative,meansmoldcouldnotgrow.由表l可見，隨著脫氫醋酸鈉濃度的提高，霉菌數目逐漸減少；在脫氫醋酸鈉溶度達到70mg/kg時霉菌就不能生長，所以得出當培養劑的pH值在4.5時，脫氫醋酸鈉對飼料中霉菌最小抑制溶度為70mg/kg。實施例2脫氫醋酸鈉對六種不同霉菌的抑制效果六種標準實驗菌黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌購于中國普通微生物保藏中心。1.1菌株恢復培養用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養基葡萄糖蛋白胨湯，滴入買來的具有相應菌林的安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀；取約0.2ml菌體懸浮液，移植于指定的瓊脂斜面/平板培養基上，培養5d。1.2平板制備分別取脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號20071011，規格25kg/袋)0.1g、0,125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250毫升滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至5(TC左右3min5min，使脫氬醋酸鈉充分溶解分別加入無菌培養皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養基19ml，充分混勻待其凝固后，最終濃度為40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg。其中，黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉使用②培養基，串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌使用③培養基。1.3接種將已活化的菌種分別接入無菌生理鹽水，制成含菌量(孢子量)為100cfu/ml的菌懸液，用移液沖倉加入lml菌懸液涂布均勻后，霉菌于28。C培養72h，細菌于37。C培養24h,酵母于37。C培養72h后，觀察結果。1.4結果表2脫氫醋酸鈉對六種霉菌的抑制實驗<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表2可見，脫氫醋酸鈉對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/Kg,對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/Kg，脫氫醋酸鈉對這六種特定霉菌具有很好的抑制作用。實施例3pH值對脫氫醋酸鈉抑制效果的影響1.1不同pH值的培養基配制用0.1mol/L氫氧化鈉把培養基(種類)的pH分別調成5.5、7.0、7.5。1.2制備平板分別取脫氫醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號20071011，規格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g、0.225g、0.25g、0.275g、0.3g、0.325g、0.35g置于250毫升滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右35min,使脫氳醋酸鈉充分溶解，分別加入無菌培養皿各lml，倒入約45。C滅菌的各pH培養基19ml，充分混勻待其凝固后，最終濃度為40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg。分別設各pH值的對照組，每組做兩個平板作重復。1.3接種用移液槍加入實施例l制備的lml1:10000帶霉菌的稀釋液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28。C的培養箱中培養72小時后觀察，培養觀察一周。1.4結果表3pH-5.5時脫氫醋酸鈉的抑菌實驗脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白405060708090100110霉菌生長情況+++++++++++++__--表4pH-7.0時脫氬醋酸鈉的抑菌實驗脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白608090100110120130140霉菌生長情況++++++++++++++++--表5pH-7.5時脫氬醋酸鈉的抑菌實驗脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白6080卯100110120130140霉菌生長情況+++++++++++++++++-由表3、表4和表5可知，當培養基pf^5.5時，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg;當培養基pH-7.0時，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg;當培養基pl^7.5時，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。當培養基呈弱酸性時，脫氬醋酸鈉的防霉效果最佳；當培養基呈中性或弱堿性時，脫氫醋酸鈉的防霉效果減弱，隨著培養基pH值增大，脫氫醋酸鈉的防霉濃度逐漸升高；pH大于7.5時仍有一定的防霉作用，與常用的化學防霉劑的有效pH值(苯曱酸鈉pH^4,山梨酸鉀pH^7)相比脫氬醋酸鈉的防霉效果更具有實用性。實施4脫氬醋酸鈉抑制效果的熱穩定性測定分別取脫氬醋酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批號20071011，規格25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250ml滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下，置電爐上加溫至50。C左右35min，使脫氫醋酸鈉充分溶解；將所有三角瓶密封，置于高壓滅菌鍋中12rC處理30min,冷卻到室溫。分別加入無菌培養皿各lml，倒入約45。C滅菌的培養基①19ml，充分混勻待其凝固后，冷卻至室溫接種混合菌種(即實施例l制備的l:IOOOO帶霉菌的稀釋液)，每組做兩個平板作重復。將平板倒置于28'C的培養箱中培養72小時后觀察，培養觀察一周。結果如下表6脫氫醋酸鈉抑制效果的熱穩定性脫氫醋酸鈉濃度mg/kg空白4050607080霉菌生長情況++++++++++--脫氫醋酸鈉經過121。C處理后，其最低抑菌濃度為70mg/kg，與未高溫處理過最低抑菌濃度一樣，表明脫氫醋酸鈉的防霉效果不受高溫的影響。生產中，顆粒飼料的生產不會影響其防霉效果。綜上所述，本發明提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產中用作防霉劑奠定了基礎。需要說明的是，在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，以上所述的是本發明的具體實施例及所運用的技術原理，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改而不背離本發明的精神與范圍，這些等價形式同樣落在本發明的范圍內。權利要求1.一種脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應用，其特征在于，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。2.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對混合霉菌的最〗氐抑菌濃度為70mg/kg。3.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg。4.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，所述脫氫醋酸鈉對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/kg。5.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，經121。C高溫處理30min后，所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg。6.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，pl^5.5時所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為80mg/kg。7.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，pH-7.0時所述脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為130mg/kg。8.根據權利要求l所述的應用，其特征在于，pH:7.5時所述脫氬醋酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。全文摘要本發明提供了一種脫氫醋酸鈉在飼料防霉中的應用，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌，脫氫醋酸鈉對混合霉菌的最低抑菌濃度為70mg/kg，對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為70mg/kg，對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為80mg/kg，經121℃高溫處理30min后，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度為70mg/kg，pH＝5.5、7.0、7.5時，脫氫醋酸鈉的最低抑菌濃度分別為80mg/kg、130mg/kg、140mg/kg，本發明提供了不同條件下脫氫醋酸鈉對幾種霉菌的抑制濃度，為脫氫醋酸鈉在飼料生產中用作防霉劑奠定了基礎。文檔編號A23K1/16GK101243826SQ20081002453公開日2008年8月20日申請日期2008年3月26日優先權日2008年3月26日發明者敏陳,陳正榮申請人:江蘇天成獸藥飼料添加劑研發有限公司