專利名稱：利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法
技術領域：
本發明屬于農業生物技術領域，具體為一種利用試管莖段微扦插 快速繁殖牛大力種苗的方法。
背景技術：
牛大力屬蝶形花科雞血藤屬，始載于《生草藥性備要》，功能為 補虛潤肺，強筋活絡。用于腰肌勞損，風濕性關節炎，治肺熱，肺虛
咳嗽，肺結核，慢性支氣管炎，慢性肝炎，遺精，白帶等。70年代開 始作為壯腰健腎丸、強力健身膠囊等的原料而用于中成藥的生產，在 兩廣地區得到廣泛應用；上世紀末本開始，廣東、香港、澳門等地民 間普遍使用牛大力熬制靚湯，用量己經遠遠超過制藥企業，并有逐年 增長之勢。牛大力以根入藥， 一般在秋季挖取生長4 5年的牛大力的 圓柱狀或紡綞狀塊根供應市場。由于牛大力均來自野生資源，不斷的 濫采濫挖，使野生牛大力資源瀕臨滅絕。
牛大力傳統的繁殖方法為種子繁殖，該方法存在的問題是(1) 種子資源緊缺，批量采集困難；(2)種子壽命短，不能低溫儲存， 因此不能定期播種育苗；(3)種子發芽率低，僅達到45%左右；(4) 種子苗根系以主根為主，塊根形成數量少，產量低。
近幾年來，扦插繁殖和組培繁殖成為牛大力種苗繁殖的研究重 點。扦插繁殖現存的問題是(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死
亡；(2)插條資源緊缺，批量繁殖困難。組培繁殖目前采用愈傷組 織誘導、愈傷組織分化增殖和不定芽生根的方式獲得無菌苗，這種方 式存在的問題是(1)誘導愈傷組織過程時間較長；(2)愈傷組織 分化為不定芽的頻率較低，分化出的不定芽變異率提高；(3)愈傷 組織分化出的不定芽伸長速度慢，達到生根標準的時間長。這些問題 嚴重阻礙了牛大力種苗的規模化生產，因而無法滿足市場對牛大力的 需求。為此，必須建立能大量、快速擴繁牛大力種苗的生產技術體系。
牛大力屬蝶形花科雞血藤屬，始載于《生草藥性備要》，功能為 補虛潤肺，強筋活絡。用于腰肌勞損，風濕性關節炎，治肺熱，肺虛 咳嗽，肺結核，慢性支氣管炎，慢性肝炎，遺精，白帶等。70年代開 始作為壯腰健腎丸、強力健身膠囊等的原料而用于中成藥的生產，在 兩廣地區得到廣泛應用；上世紀末本開始，廣東、香港、澳門等地民 間普遍使用牛大力熬制靚湯，用量已經遠遠超過制藥企業，并有逐年 增長之勢。牛大力以根入藥， 一般在秋季挖取生長4 5年的牛大力的 圓柱狀或紡錘狀塊根供應市場。由于牛大力均來自野生資源，不斷的 濫采濫挖，使野生牛大力資源瀕臨滅絕。
牛大力傳統的繁殖方法為種子繁殖，該方法存在的問題是(1) 種子資源緊缺，批量采集困難；(2)種子壽命短，不能低溫儲存， 因此不能定期播種育苗；(3)種子發芽率低，僅達到45%左右；(4) 種子苗根系以主根為主，塊根形成數量少，產量低。
近幾年來，扦插繁殖和組培繁殖成為牛大力種苗繁殖的研究重 點。扦插繁殖現存的問題是(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死
亡；(2)插條資源緊缺，批量繁殖困難。組培繁殖目前采用愈傷組 織誘導、愈傷組織分化增殖和不定芽生根的方式獲得無菌苗，這種方 式存在的問題是(1)誘導愈傷組織過程時間較長；(2)愈傷組織 分化為不定芽的頻率較低，分化出的不定芽變異率提高；(3)愈傷 組織分化出的不定芽伸長速度慢，達到生根標準的時間長。這些問題 嚴重阻礙了牛大力種苗的規模化生產，因而無法滿足市場對牛大力的 需求。
發明內容
本發明的目的是提供一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗 的方法，是一種利用試管中莖段側芽萌發和伸長速度快的特點，實現 了牛大力種苗大規模擴繁的目的。
本發明利用少量種子獲得無菌苗，以無菌苗莖段為外植體，通過 試管微扦插促進側芽不斷萌發進行快速增殖，實現牛大力種苗大規模
本發明所采用的技術方案 一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力 種苗的方法，包括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過 程。
1、 無菌苗的獲得過程
選取牛大力的莢果經消毒后將種子剝出，將種子接種到發芽培養
基進行培養至長成幼苗，所述發芽培養基是以MS培養基為基本培養 基并附加6-芐基腺嘌呤、a-萘乙酸。
2、 莖段微扦插過程
將步驟1所獲得的幼苗切成莖段，將莖段的基部向下插入微扦插 培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成莖段，然后將其基部向
下插入新鮮的微扦插培養基中進行培養。所述微扦插培養基是以MS 培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤、吲哚乙酸。 3、莖段生根過程
將步驟2所獲得的側芽切成莖段，并將其接種到生根培養基上， 先暗培養再進行光照培養，至莖段生根即可獲得牛大力種苗。所述生 根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基并附加蛋白胨、IAA、 IBA、
生物素。
本發明工藝簡單易行，操作簡單，增殖速度快，解決了利用牛大 力種子繁殖種苗中種子數量少、發芽率低、繁殖速度慢的問題，實現 了牛大力種苗的長期大規模快速增殖，可大量、快速、持續獲得高質 量的牛大力試管苗，實用性強，為牛大力大規模擴繁增殖提供了高效 的方法，為牛大力種苗的規模化、工廠化生產奠定了基礎，為穩定牛 大力市場供應提供了保障，也為保護野生牛大力種質開辟了一條切實 可行的途徑。
具體實施方式
下面對本發明作進一步說明。
本發明所提供的利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，包 括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過程。 1)、無菌苗的獲得過程
選取牛大力的莢果經消毒后將種子剝出，將種子接種到發芽培泰 基進行培養至長成幼苗，培養溫度度為25 28'C，光照強度為15 20 toiol*m-2*s"，光照時間為8h'cT1，培養40-60天；所述發芽培養 基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤0. 5 mg丄"、a -萘乙酸O. lmg丄"。
2) 、莖段微扦插過程
將步驟1所獲得的幼苗切成帶1~2節的莖段，將莖段的基部向下 插入微扦插培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成帶1~2節的 莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養基中進行培養，培養 溫度度為27~29°C，光照強度為30 40jnmo1 m.2 s",光照時間為8 h d";所述微扦插培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6_芐 基腺嘌呤2. 0 mg.L"、吲哚乙酸0. 1 mg丄-1。
3) 、莖段生根過程
將步驟2所獲得的側芽切成帶1~2節的莖段，并將其接種到生根 培養基上，先暗培養8 13天再進行光照培養20 30天，至莖段生根 即可獲得牛大力種苗。所述生根培養基是以1/2 MS培養基為基本培 養基并附加蛋白胨1.0 g.L"、 IM 0.8 mg.L"、 IBA 0.5 mg丄"、生 物素0.5 mg丄-1。
權利要求
1、一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，其特征在于包括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過程；1)、無菌苗的獲得過程選取牛大力的莢果經消毒后將種子剝出，將種子接種到發芽培養基進行培養至長成幼苗，培養溫度度為25～28℃，光照強度為15～20μmol·m-2·s-1，光照時間為8h·d-1，培養40～60天；所述發芽培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤0.5mg·L-1、α-萘乙酸0.1mg·L-1；2)、莖段微扦插過程將步驟1所獲得的幼苗切成帶1～2節的莖段，將莖段的基部向下插入微扦插培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成帶1～2節的莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養基中進行培養，培養溫度度為27～29℃，光照強度為30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為8h·d-1；所述微扦插培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤2.0mg·L-1、吲哚乙酸0.1mg·L-1；3)、莖段生根過程將步驟2所獲得的側芽切成帶1～2節的莖段，并將其接種到生根培養基上，先暗培養8～13天再進行光照培養20～30天，至莖段生根即可獲得牛大力種苗。所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基并附加蛋白胨1.0g·L-1、IAA0.8mg·L-1、IBA0.5mg·L-1、生物素0.5mg·L-1。
全文摘要
本發明公開了一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，是將牛大力的種子接種到發芽培養基進行培養至長成幼苗；將獲得的幼苗切成莖段后插入微扦插培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成莖段后插入新鮮的微扦插培養基中進行培養；將獲得的側芽切成莖段后接種到生根培養基上進行培養至莖段生根即可獲得牛大力種苗。本發明工藝簡單易行，操作簡單，增殖速度快，解決了利用牛大力種子繁殖種苗中種子數量少、發芽率低、繁殖速度慢的問題，實現了牛大力種苗的長期大規模快速增殖，可大量、快速、持續獲得高質量的牛大力試管苗，實用性強。
文檔編號A01H4/00GK101379950SQ20081017285
公開日2009年3月11日 申請日期2008年10月24日 優先權日2008年10月24日
發明者立 徐, 朱文麗, 李克烈, 李志英, 偉 陳, 馬千全, 黃碧蘭 申請人:中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所