專利名稱：一種堿處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法
技術領域：
本發明屬于生物制藥領域
背景技術：
血竭(Dragon,s blood或Resina Draconis)是傳統名貴中藥，有活血化 瘀、鎮痛止血、消炎抗菌等功效，在我國有悠久的用藥歷史，但歷來依靠進口。 在自然狀態下，龍血樹樹干木質部在受到損傷或微生物侵染后，植物會產生防 御反應而形成防御性物質來抵抗微生物侵染，這種物質提取后就是藥用的血竭。 1972年我國醫藥工作者在云南、廣西等地發現了能產生血竭的劍葉龍血樹 coc力/"c力/'/7e/7".i1 (Lour.) S. C. Chen]。 1999年國家藥品監督管 理局頒布的國家標準中(WS3-082 (Z-016)-99(Z))，血竭以一類新藥材收載。隨 著需求的增長，野生龍血樹資源遭到了嚴重破壞。龍血樹生長極為緩慢，幾十 年樹齡的樹干才有可能用于血竭生產，而且血竭產量很低。依靠人工繁殖龍血 樹，在樹干上誘導血竭形成來解決血竭的藥源問題困難很大。
在龍血樹資源研究方面，李宗恒等人申請了專利《劍葉龍血樹種苗培育 方法(CN101116397A)》、《劍葉龍血樹栽培方法(CN101116398A)》，刀祥生等人 申請了《一種劍葉龍血樹的扦插繁殖方法(200510010881.6)》的專利。龍血樹 樹干木質部形成傷口后，龍血樹會產生防御反應而形成血竭，劉寶等人據此原 理申請了《一種快速獲得龍血竭原料的方法(CN101138305A)》的專利；在龍血 樹的傷口上施用植物激素，可以增加血竭的產量，楊本鵬等人據此原理申請了 《一種人工栽培龍血樹誘導生產血竭的方法(CN101032207A)》的專利。在傷口
上接種微生物，也可以刺激龍血樹產生較多的血竭，王興紅等人發表了相關的 研究論文(王興紅，江東福，馬萍等，真菌與龍血樹血竭形成關系的初步研究， 中國青年科學技術論文精選，中國科學技術出版社，1994， 11， 500 — 503;江東福，馬萍，王興紅等，龍血樹真菌群及其對血竭形成的影響，1995，云南植 物研究，17 ( 1 ): 79—82。)；宋啟示等據此原理申請了《一種田間人工誘導生 產龍血竭的方法(CN1817105A)》、《一種龍血竭人工誘導劑及其制備方法 (CN1821387A)》、《一種龍血竭的人工培育方法(CN1821388A)》的專利；楊本 鵬等人還提出了利用組織培養方法生產血竭的專利申請《運用龍血樹組織培養 生產血竭的方法(CN1316876C)》。
這些方法雖然在一定程度上有望緩解龍血樹的資源問題和血竭形成問題， 除組織培養外，這些專利方法都必須利用活體龍血樹的樹干木質部，而樹干的 生長又是極其緩慢的，而且對樹干的利用也只能是一次性的；組織培養也存在 培養時間長、成本高等問題，無法較快地滿足現實生產的緊迫需要。
自然狀態下龍血樹的樹葉生長較快，而且每年都會衰老枯死一批，還可以 通過快速培養龍血樹苗迅速得到大量的龍血樹葉片，所以利用龍血樹活葉片誘 導生產血竭，可以重復利用珍貴的龍血樹。目前，尚未發現有誘導龍血樹活葉 片生產血竭的專利申請或方法報道。人工誘導龍血樹葉片生產血竭有望解決血 竭生產原料嚴重短缺的局面，滿足人民群眾的用藥需求，又有助于保護自然資 源。
發明內容
本發明使用堿處理龍血樹葉片，龍血樹葉片受到刺激后會產生防御反應， 形成的反應產物就是血竭。
本發明所述的堿處理龍血樹活葉片形成血竭的方法由以下步驟組成
一、 配制一定濃度的堿性液體，或者堿性固體粉末。
二、 將配制后的堿性物質用以下三種方法中的一種或幾種處理生長健壯的 龍血樹葉片。2. 1將堿性液體或堿性粉末施于幼嫩的龍血樹葉片上。
2. 2將堿性液體或堿性粉末施于龍血樹葉片的基部或頂端的樹芯部位。
2.3采用刀片、釘子、或針狀物人為損傷葉片，在損傷處施用堿性液體或
堿性粉末。
三、 堿處理龍血樹葉片一段時間以后，用潔凈的水淋洗葉片去掉堿性物質， 以免葉片損傷過度并保持葉面清潔。
四、 堿處理后的龍血樹按正常栽培條件管理，1-3周內即可在葉片受損處 產生紅色的血竭。
五、 將產生血竭的葉片收獲后，采下葉片上的紅色部位，干燥后用甲醇或 乙醇浸泡含脂葉片，然后蒸發掉溶劑，提取物經干燥后即可得到紅色血竭。
本發明所述的龍血樹，包括整個龍血樹屬(""cse朋)可以產生血竭的所 有植物，如劍葉龍血樹coc力^由./ 譜i^ (Lour.) S. C. Chen]， 索禾斗牛寺拉龍血lt ["racse/ a c/"/7a6ar/Balf. f.]，龍血|^ ["racse/Ls dracoL.]， 阿拉伯龍血樹["racae朋sc力/zai^力a]，小花龍血樹或海南龍血樹["rscae朋 ca勵ot/Za朋Pierre ex Gagnep]，巖棕/oure/r/]等植物。
本發明所述的葉片，是指生長在活體龍血樹上有生命力的葉片，只有葉片 在生活狀態時，才會形成血竭，即血竭的形成是一個活細胞對損傷的反應，該 反應的啟動需要有一個時間過程，從幾個小時至幾天時間不等。已死亡的葉片 或即將死亡的葉片是不會形成血竭的。正常野生的龍血樹葉片很少會自動產生 血竭。
本發明所述的堿，可以是純化的氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(K0H)、碳 酸鈣(CaC03)、生石灰(Ca0)、石灰水(Ca(0H)2)等堿性化合物，也可以是含 有一種或幾種堿性物質的混合物。這些堿性物質可以混于液態溶劑中制成堿性液體使用；也可以將這些堿性物質混入其它非堿性或堿性的固態載體中，制成 堿性固體粉末。
本發明所述的樹芯或葉片的基部，是龍血樹葉片分生組織存在的部位，它 具有形成和延長葉片的功能。損傷這些分生組織后，利用分生組織延長葉片的 自然特性，可以保持較長時間的誘導效果，葉片上能形成血竭的面積也較大。
本發明所述的人為損傷，是因為一般情況下特別是老的龍血樹葉片對堿性 物質的腐蝕有較強的抵抗力，使用人為損傷的辦法，可以增加堿處理的效果， 也可以利用此方法控制血竭在葉片上形成的位置和密度。
本發明所述的堿處理時間和堿液濃度，可根據葉片的生長時間、季節、樹 葉的老嫩程度、樹的活力狀態和堿性物質的性質不同而適當作一些調整。 一般 情況下，處理嫩葉時堿濃度可低一些，處理較老的葉片時，堿液濃度可高一些； 生長旺盛的樹葉，堿處理時間可長一些，生長狀態較差的樹葉，堿處理時間可 以短一些。堿性物質的使用濃度范圍在0. 5%-100%之間，依據堿性物質的堿性強 弱可以有濃度上的變化，如氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(KOH)的堿性較強，使 用比例可以在0. 5%-10°/。之間，而生石灰(Ca0)和其溶于水后形成的石灰水 [Ca(0H)2]堿性弱，生石灰(Ca0)作為固體粉末使用時可以用純的生石灰，石灰 水可以使用其飽和溶液。堿性強時，堿處理時間可短一些；反之亦然。以氫氧 化鈉(NaOH)為例，由于其堿性較強，濃度為1%-5% (W/V)的氫氧化鈉水溶液 處理時間為12-72小時即可。若用碳酸鈣(CaC03)處理，由于其堿性較弱，100% 含量的碳酸鈣處理時間可能需要長達1-2個月。評價堿處理效果的唯一標準是: 不可讓葉片大面積死亡，只能讓葉片呈點狀損傷。
本發明所述的堿性液體，其溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇或其它有 機溶劑；也可以是液體溶劑中含有固體成分的漿狀物，甚至可以在液體中加入 一定含量的粘結劑，增強堿性物質在葉片中的附著性能。堿性固體粉末，可以是堿性物質本身，如生石灰粉，或者是將堿性物質混在賦形劑中，如將氫氧化
鈉(NaOH)按一定比例配入硅藻土中等。
本發明所述的用清潔的水淋洗葉片，是指一般的生活用水即可，通過淋洗， 可以控制葉片堿處理的程度，并保持葉面清潔，也有利于提高所提取的血竭質 量。特別是在堿處理葉片過度時，適時淋洗是矯正的措施之一。在生產時需要
注意的是在人工淋洗堿處理葉片之前，要防止雨水淋濕葉片而降低堿處理的效果。
本發明要解決的技術問題是利用堿的腐蝕性使龍血樹葉片受傷后，堿性物 質又進一步刺激龍血樹葉片產生防御反應形成血竭，并利用龍血樹葉的生長快 速且可反復生長的特性，解決血竭資源短缺的問題。
該技術由以下的特征組成將堿性物質配制成堿性液體或堿性固體粉末； 噴涂堿性物質于龍血樹活葉片上；堿處理一段時間后用水淋洗去掉堿性物質， 以免葉片損傷過度并保持葉面潔凈；葉片損傷后，必須滿足龍血樹的正常生長 條件；傷口形成1-2周后即開始出現血竭。繼續培養1-2月后，即可收獲含有 紅色血竭的葉片，干燥后用乙醇或甲醇提取含脂葉片，提取物經干燥后即可作 為藥用。
有益效果是利用龍血樹葉片的快速生長特性，通過堿處理葉片快速形成 血竭，持續利用珍貴的龍血樹資源，解決龍血樹生長速度過慢、血竭資源緊張 的問題。
為了更好的理解本發明，下面用實驗數據進行說明
配制2%的氫氧化鈉水溶液，將堿液噴或涂于人工損傷后的葉片上，增加堿 處理的效果，3天后淋洗葉片，繼續培養葉片2個月，紅色血竭出現在傷口部位， 割取產脂葉片，去掉葉片的綠色部分，含脂葉片干燥后，用甲醇提取，經旋轉 蒸發干燥后即得紅色血竭。具體實施例1、 配制2%氫氧化鈉甲醇溶液，將氫氧化鈉甲醇溶液噴于葉片的基部24小
時后，用IO倍堿液量的清水淋洗堿處理部位，待2-3個月后，葉片伸長生長并 形成血竭后，繼續培養龍血樹2-3個月，割取含脂葉片，去掉葉片未產生血竭 的綠色部分，保留紅色含脂部分，干燥后用95%的乙醇提取，提取物經千燥后即 得血竭。
2、 配制6%氫氧化鉀水溶液，將氫氧化鉀溶液呈霧狀直接噴于幼嫩的龍血樹 葉片上，48小時后，用2G倍量的清水淋洗堿處理過的葉片，龍血樹按正常生長 條件管理，3個月后，收獲產脂葉片，去掉葉片綠色部位，保留紅色含脂部位， 含脂葉片干燥后用乙醇提取，蒸發掉乙醇，提取物經干燥即得紅色血竭。
3、 將碳酸鈣粉碎成過200目篩的粉末，加入碳酸鈣5倍重量的水和0.5% 的膠水，攪拌均勻。用刀片劃傷較老的葉片，將碳酸鈣漿狀物涂抹于傷口處， 繼續培養葉片6個月，傷口處出現紅色血竭，再繼續培養一段時間后，去掉葉 面上碳酸鈣塊狀物，收獲葉片，含脂葉片干燥后用甲醇提取，再蒸發掉甲醇溶 劑，即得紅色血竭，粉碎后即可藥用。
4、 將生石灰粉碎成150目左右的粉末，直接噴撒于龍血樹嫩葉上，每IOO 平方厘米葉面約撒20克，15-30天后，葉面出現點狀損傷，用清水淋洗葉面， 保持龍血樹的正常生長狀態，3個月后收獲含脂葉片，葉片干燥后提取血竭即可。
權利要求
1、一種堿處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法，其特征在于該方法由將堿性物質施于龍血樹活葉片上，損傷并誘導龍血樹葉片產生血竭，收獲含有血竭的葉片，含脂葉片干燥后，用乙醇或甲醇提取血竭、血竭提取物干燥等步驟組成。
2、 根據權利要求l所述的堿，是指PH大于7的所有堿性物質，可以是液體狀 態，也可以是固體粉末狀，所謂的液體狀態，可以是溶解狀態，也可以是不溶 解的漿狀物，溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇等有機溶劑。
3、 根據權利要求1或2所述的誘導龍血樹葉產生血竭的方法，其特征在于誘導 的部位是龍血樹的活葉片，而不是樹干木質部，也不是已經死亡的葉片。
4、 根據權利要求1或2或3所述的誘導龍血樹葉產生血竭的方法，其特征在于 所述的堿處理龍血樹葉片時，堿性物質的濃度根據堿性的強弱、葉片的老嫩、 樹體的活力狀態等條件的不同，誘導所需的時間會有相應的變化,堿處理程度 的標準是即要讓葉片呈現較多而小的斑點，而又不能讓葉片死亡。
全文摘要
本發明涉及一種堿處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法。本發明所述的方法由以下步驟組成一、將堿性物質配入液體或固體粉末；二、將配制后的堿性物質施于龍血樹葉片上或產生葉片的分生組織處；三、堿性物質處理龍血樹葉片一段時間后，用水洗或用其它方法去掉堿性物質；四、堿處理龍血樹活葉片一段時間以后，血竭才可以形成；五、收獲產生血竭的含脂葉片，干燥后用乙醇或甲醇提取，提取物經干燥后即得血竭。本發明要解決的技術問題是利用龍血樹葉更新速度快的特性，將堿性物質作為誘導龍血樹葉片損傷和血竭形成的誘導劑，解決龍血樹資源的可持續利用的問題。
文檔編號A01G7/06GK101406144SQ200810233619
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月21日 優先權日2008年11月21日
發明者王興紅 申請人:云南大學