專利名稱：黃金小神童的組培快繁育苗方法
技術領域：
本發明涉及一種建蘭雜交新品種黃金小神童的組培快繁育苗方法。
背景技術：
黃金小神童iPolden Elf iSundust')是我國臺灣省10多年前用四季蘭和虎頭蘭雜交而得，開花物候及性狀更接近于建蘭的生長特性，因此目前一般將其歸為建蘭品種。 其具有花色金黃素雅、花香醇正，葉姿灑脫等特點，入市以來因其“物美價廉” 一直深受消費者的青睞，市場走勢極好，現2劍/盆開花植株價格在160元/盆左右，目前對‘黃金小神童’的研究較少，組培育苗技術方面研究尚未見報道。建蘭UJymbidium ensifolium)幽香襲人，花色素雅，栽培歷史悠久，品種繁多，主要分布在我國西部及東南諸省，尤以福建分布和栽培最廣，是我國出口最早的國蘭之一。我國建蘭組培育苗技術研究起步較早，已有三十多年的歷史，但是由于建蘭遺傳性狀較復雜， 傳統觀賞以奇花、異葉為主，因而生產中主要以種子雜交育苗和分株繁殖為主，由于繁殖系數低，新品種在初上市階段往往天價炒作，爾后又快速下跌，對建蘭規模化繁殖技術研究、 生產帶來不良的影響。隨著建蘭雜交育種技術的進步和消費理念的轉變，彩葉、香花、多花等多性狀組合的建蘭品種已逐步成為市場的新寵，如黃金小神童、線藝建蘭、彩心建蘭等， 要使這些品種走入尋常百姓家，只有組培育苗技術才是保證其優良性狀的唯一途徑，但目前有關建蘭的組培研究也報道甚少。
發明內容
本發明的目的是提供一種能實施大規模工廠化培養的黃金小神童的組織培養方法。本發明的黃金小神童的組培快繁育苗方法，包括外植物體消毒抗褐化處理、初誘導培養、繼代增殖培養、生根培養和試管苗移栽，包括以下步驟
(1)外植體消毒抗褐化處理取黃金小神童側芽莖尖為初代培養材料，采集后修剪掉較老的組織，在自來水下沖洗干凈，用0. 1%多菌靈+0. 2%洗潔凈水溶液浸泡30分鐘，沖洗干凈，然后用抗褐化劑維生素C蒸餾水溶液(洲)浸泡30分鐘，用0. 1%升汞常規消毒10分鐘， 最后在超凈工作臺上剝離出側芽莖尖；
(2)初誘導培養條件為l/2MS+20-30g/L蔗糖+8-10g/L 瓊脂+3. Omg/L TDZ +0. 2mg/L NAA為培養基；培養基pH 5.8;光照培養14 hr/d ；光照強度1500-2000 Lux ；培養溫度為 25士2°C ；
(3)繼代增殖培養條件為l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L 蔗糖+l-7mg/L TDZ +0. 05-0. 4mg/ L NAA為培養基；培養基pH 5.8;光照培養14hr/d ；光照強度1500-2000LuX ；培養溫度為 25士2°C ；
(4)生根培養條件為l/2MS+10g/L瓊脂+35g/L蔗糖+lg/L活性炭+lg/L亞硫酸鈉+ 0. 1-0. 9mg/L 6-BA +0. 4-2. Omg/L NAA 為培養基，培養基 pH 5.8;光照培養 14hr/d ；光照強度1500-2000LUX ；培養溫度為25士2°C ；
(5)試管苗移栽條件為生根培養60天后，再煉苗20天；用0. 05%高錳酸鉀水溶液消毒處理幼苗后移栽；室溫控制在15-30°C，空氣濕度在80%-90%，遮陰60 70%。本發明所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法繼代增殖培養基中TDZ為 3-3. 5mg/L, NAA 為 0. 1-0. 2mg/L。本發明所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于生根培養基中的 6-BA 為 0. 3-0. 5mg/L，NAA 為 0. 8-1. 2mg/L。本發明所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于初誘導培養基和繼代增殖培養基中可加入lg/L活性炭和lg/L亞硫酸鈉。本發明所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于試管苗移栽的基質為蛭石或樹皮。本發明達到的有益效果
(1)側芽莖尖在消毒前用1維生素C水溶液浸泡30分鐘后再用0.1%升汞常規消毒， 能有效延緩外植體褐化時間和保持外植體活力；
(2)在1/2MS培養基中同時添加抗褐化劑lg/L活性炭和lg/L亞硫酸鈉后，可降低組培過程中外植體、原球莖和叢生芽產生褐化，目前已達到外植體初誘導、原球莖繼代增殖褐化率控制在15%以下，叢生芽生根誘導褐化率低于5%以下；
(3)濃度為3.0-3. 5mg/L的TDZ與濃度為0. 1-0. 2mg/L的NAA組合有利于外植體初誘導和原球莖增殖；隨著TDZ濃度的增加，有利于原球莖分化叢生芽，反之則有利于原球莖分化原球莖，增殖系數達到7. 33，可連續繼代增殖培養4-5代；濃度為0. 3-0. 5 mg/L的6-BA 與濃度為0. 8-1. 2 mg/L的NAA組合，最有利于叢生芽生根誘導，誘導率達到100. 0% ；
(4)試管苗移栽條件為生根培養60天后，再煉苗20天；用0.05%高錳酸鉀水溶液消毒處理幼苗后移栽；室溫控制在15-30°C，空氣濕度在80%-90%，遮陰70%移栽，采用蛭石或樹皮為移栽基質，成活率達95%以上；
(5)本發明初代培養基和繼代增殖培養基差異較小，比較容易工廠化組培育苗。
具體實施例方式
取黃金小神童0. 4cm側芽莖尖為初代培養外植體。將上述材料采集后修剪掉較老的組織，在自來水下沖洗干凈，用0. 1%多菌靈+0. 2%洗潔凈水溶液浸泡30分鐘，沖洗干凈；然后用抗褐化劑維生素C蒸餾水溶液(2%)浸泡30分鐘，用0. 1%升汞常規消毒10分鐘，最后在超凈工作臺上剝離出側芽莖尖；將剝離消毒后的側芽莖尖接種在初誘導培養基上，初誘導培養基配方l/2MS+30g/L蔗糖+10g/L瓊脂+lg/L活性炭+lg/L亞硫酸鈉+ 3. 5mg/L TDZ +0. 2mg/L NAA ；光照時間14hr/d ；光照強度18001ux ；培養溫度(25士2°C )；初代培養60天左右，側芽莖尖誘導分化出2-3個直徑0. 2cm原球莖，將其切割分離、接種；以l/2MS+10g/L 瓊脂+30g/L蔗糖為基本培養基，添加lg/L活性炭和添加lg/L活性炭+lg/L亞硫酸鈉；繼代增殖培養60天后，原球莖同時分化出叢生芽和原球莖，將叢生芽切割成基部帶2個原球莖單芽后接種；以l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+lg/L亞硫酸鈉+3mg/L TDZ +0. 2mg/L NAA為繼代增殖培養基，增殖系數達到7. 33，可連續繼代增殖培養4_5代；將原球莖誘導出的1-1. 5cm高叢生芽分割成無根單芽后接種；生根誘導培養基l/2MS+8g/L瓊脂+25g/L蔗糖+lg/L活性炭+0. 5mg/L 6-BA+l. 2mg/L NAA，誘導生根60天后，100%誘導生根，生根2-3條，根長0. 5-3. 5cm ；生根培養60天后，再煉苗20天；用蛭石或為移栽基質，用 0. 05%高錳酸鉀水溶液消毒處理幼苗后移栽，室溫控制在25-30°C，空氣濕度在80%-90%，遮陰70%，移栽成活率達96%。
權利要求
1.黃金小神童的組培快繁育苗方法，包括外植體消毒抗褐化處理、初誘導培養、繼代增殖培養、生根培養和試管苗移栽，其特征在于(1)外植體消毒抗褐化處理取黃金小神童側芽莖尖為初代培養材料，采集后修剪掉較老的組織，在自來水下沖洗干凈，用0. 1%多菌靈+0.洲洗潔凈水溶液浸泡30分鐘，沖洗干凈，然后用抗褐化劑維生素C蒸餾水溶液(洲)浸泡30分鐘，用0. 1%升汞常規消毒10分鐘， 最后在超凈工作臺上剝離出側芽莖尖；(2)初誘導培養，培養基為:l/2MS+20-30g/L蔗糖 +8-lOg/L 瓊脂 +3. 0-3. 5mg/L TDZ +0. 1-0. 2mg/L NAA, pH 5. 8，光照培養 14 hr/d，光照強度 1500-2000 Lux，培養溫度為 25士2°C ；(3)繼代增殖培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖+l_7mg/LTDZ +0. 05-0. 4mg/L NAA,培養基pH 5. 8，光照培養14hr/d，光照強度1500_2000Lux，培養溫度為 25士2°C ；(4)生根培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+35g/L蔗糖+lg/L活性炭+lg/L亞硫酸鈉 + 0. 1-0. 9mg/L 6-BA +0. 4-2. Omg/L NAA, pH 5. 8，光照培養 14hr/d，光照強度 1500-2000Lux，培養溫度為 25士2°C ；(5)試管苗移栽條件為生根培養60天后，再煉苗20天，用0. 05%高錳酸鉀水溶液消毒處理幼苗后移栽，室溫15-30°C，空氣濕度80%-90%，遮陰60 70%。
2.根據權利要求1所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于繼代增殖培養基中 TDZ 為 3-3. 5mg/L, NAA 為 0. 1-0. 2mg/L。
3.根據權利要求1所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于生根培養基中的 6-BA 為 0. 3-0. 5mg/L，NAA 為 0. 8-1. 2mg/L。
4.根據權利要求1所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于初誘導和繼代增殖培養基中可加入lg/L活性炭和lg/L亞硫酸鈉。
5.根據權利要求1所述的黃金小神童的組培快繁育苗方法，其特征在于試管苗移栽的基質為蛭石或樹皮。
全文摘要
本發明的黃金小神童的組培快繁育苗方法，取黃金小神童側芽莖尖為初代培養材料，用多菌靈溶液浸泡；然后用維生素C蒸餾水溶液浸泡，用0.1%升汞常規消毒，初誘導培養條件為1/2MS+蔗糖+瓊脂+活性炭+亞硫酸鈉+TDZ+NAA，繼代增殖培養條件為1/2MS+瓊脂+蔗糖+活性炭+亞硫酸鈉+TDZ+NAA，生根培養條件為1/2MS+瓊脂+蔗糖+活性炭+亞硫酸鈉+6-BA+NAA；試管苗移栽條件為用高錳酸鉀水溶液消毒處理幼苗后移栽。本發明提供了一條能實施大規模工廠化培養的黃金小神童的組織培養方法。
文檔編號A01H1/00GK102349438SQ201110257548
公開日2012年2月15日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者劉燕, 向立榮, 王濟紅, 祁翔 申請人:貴州省生物研究所