專利名稱：一種文心蘭組培育苗的方法
技術領域：
本發明涉及一種文心蘭組培育苗的方法。
背景技術：
文心蘭(Oncidium)又名舞女蘭、金蝶蘭，系蘭科文心蘭屬植物，屬熱帶復莖性陸生蘭，全世界原生種多達750種以上，原產南美洲熱帶地區，種類分布最多的有巴西、美國及秘魯等，是世界五大切花品種之一。文心蘭一年僅繁殖2-3個芽，繁殖系數低，速度慢，難以滿足市場的需求，組培育苗是文心蘭主要擴繁增殖手段。文心蘭組培育苗一般以花梗、莖尖等為外植體先誘導再生芽，再生芽通過叢生芽和原球莖兩種途徑進行增殖；叢生芽途徑具有變異率低，有利于保持母本性狀的優點，但繁殖系數低；原球莖途徑具有繁殖系數高，有利于工廠化大規模生產的優點，但種苗變異率高；現有大部分的文心蘭組培的各階段的培養基交較復雜，差異性較大，不利于工廠化生產。
發明內容
本發明要解決的技術問題是克服現有的文心蘭組培技術的不足，提供一條繁殖系數高和變異率低的文心蘭的組培岳廟方法。本發明的一種文心蘭的組培育苗方法，包括外植物體消毒、初誘導培養、繼代培養和生根培養，具體步驟如下
(1)外植物體消毒，選用花梗腋芽，用質量分數為0.1%多菌靈溶液浸泡，沖洗干凈，然后用抗褐化劑浸泡，再用質量分數為0. 1%升汞常規消毒；
(2)初誘導培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+25g/L蔗糖+lg/L活性炭+2. 5-3. Omg/ L TDZ+ 0.2-0.4 mg/L NAA，pH 值 5. 8，光照時間為 14 hr/d，光照強度 1500 2000 Lux，溫度為 25士2°C ；
(3)將叢生芽分化繼代培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亞硫酸鈉+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA, pH值5. 8，光照時間為14 hr/d，光照強度 1500 2000 Lux，溫度為 25士2°C ；
(4)生根培養，培養基為l/2MS+0.2 0. 4mg/L 6-BA+0. 8 1. 6mg/L NAA+lg/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 8/1瓊脂，？!1值5.8，光照時間為14 hr/d，光照強度1500 2000 Lux，溫度為 25 士 2°C。本發明所述的一種文心蘭的組培育苗方法，抗褐化劑為質量分數為0. 2%的維生素C蒸餾水溶液。本發明所述的一種文心蘭的組培育苗方法，叢生芽分化繼代增殖培養可采用固體培養方式進行培養。本發明所述的一種文心蘭的組培育苗方法，生根培養基中6-BA濃度為0. 3mg/L ，NAA 濃度為 l.ang/L。
本發明達到的有益效果
(1)外植物體用洲維生素C水溶液浸泡30分鐘后再用0.1%升汞常規消毒，可使外植體產生褐化時間從30分鐘延緩到180分鐘；
(2)初誘導培養中添加抗褐化物質活性炭或亞硫酸鈉后，能顯著降低外植體褐化率，從而顯著提高外植體接種成活率和分化率；
(3)l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖(PH值5.8)為基本培養基，同時添加lg/L活性炭和亞硫酸鈉后，采用固體培養方式進行叢生芽增殖效果較好，叢生芽誘導分化率高，為90. 0%， 增殖系數可達6. 0-7. 4，經5-6代繼代增殖培養后，叢生芽變異率僅為0. 1%，；
(4)梗初誘導、叢生芽繼代增殖配方均相同的1/2MS培養基進行無根叢生芽的生根誘導研究取得較好的效果，單獨使用生長素NAA進行生根誘導，芽苗粗壯、矮小，平均每株發根1-2條，根系粗壯，但是培養40天左右黃化嚴重。使用細胞分裂素6-BA與生長素NAA進行組合后，文心蘭叢生芽生根率隨生長素濃度增加而逐漸提高，高濃度的細胞分裂素抑制芽苗的生長而促進側芽及類原球莖的萌蘗，影響芽苗的質量。通過多次重復試驗，在1/2MS 培養基中添加0. 3mg/L 6-BA和l.aiig/L NAA為文心蘭叢生芽生根誘導培養基的效果好，接種60天后生根率可達100. 0%，芽苗生長整齊，平均高度在3. 0左右，每株長根3-4條，根長 1. 5-3. 5cm,根粗0. 5mm, 60%產生假鱗莖；
(4)初代培養、繼代培養和生根培養各個階段的培養基配方差異較小，初代培養和繼代培養的激素組合相同，僅是濃度有細微差異，有利于工廠化組培育苗。
具體實施例方式
取文心蘭品種‘南茜’ 9-10月初帶腋芽花梗莖段為外植體。修剪掉較老的組織，在自來水下沖洗干凈，用0. 1%多菌靈+0. 2%洗潔凈水溶液浸泡30分鐘，沖洗干凈；然后用抗褐化劑m維生素c蒸餾水溶液浸泡30分鐘，用ο. 1%升汞常規消毒10分鐘，最后在超凈工作臺上剪切外植體。以處理好的帶腋芽花梗莖段為外植體，初誘導培養基配方為l/2MS+10g/ L 瓊脂 +25g/L 蔗糖 +lg/L 活性炭 +3. Omg/L TDZ+0. 4 mg/L NAA, PH 值為 5. 8，光照時間 14 hr/d，光照強度20001UX，培養溫度為25 士 2°C，成活率為86. 3%，分化率可達到53. 5% ；將再生芽在超凈工作臺上用手術刀切割成帶1葉芽段，長1cm，在l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亞硫酸鈉+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA培養基中培養，培養條件為 PH值為5. 8，光照時間14hr/d，光照強度20001ux，培養溫度為25 士 2°C，叢生芽誘導分化率， 為90. 0%，增殖系數為6. 0-7. 4，經5-6代繼代增殖培養后，叢生芽變異率僅為0. 1% ；生根誘導培養基為l/2MS+0. 3mg/L 6-BA+l. 2mg/LNAA+lg/L 活性炭+20 g/L 蔗糖+8 g/L 瓊脂，PH 值為5. 8，光照時間14hr/d，光照強度20001UX，培養溫度為25士 2°C，叢生芽接種60天后生根率達100. 0%，芽苗生長整齊，平均高度在3. 0左右，每株長根3-4條，根長1. 5-3. 5cm,根粗0. 5_，60%產生假鱗莖。
權利要求
1.一種文心蘭的組培育苗方法，包括外植物體消毒、初誘導培養、繼代培養、生根培養， 其特征在于(1)外植物體消毒，選用花梗腋芽，用質量分數為0.1%多菌靈溶液浸泡，沖洗干凈，再用抗褐化劑溶液浸泡，最后用質量分數為0. 1%升汞常規消毒；(2)初誘導培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+25g/L蔗糖+lg/L活性炭+2. 5-3. Omg/ L TDZ+ 0.2-0.4 mg/L NAA，pH 值 5. 8，光照時間為 14 hr/d，光照強度 1500 2000 Lux，溫度為 25士2°C ；(3)將叢生芽分化繼代培養，培養基為l/2MS+10g/L瓊脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亞硫酸鈉+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA, pH值5. 8，光照時間為14 hr/d，光照強度 1500 2000 Lux，溫度為 25士2°C ；(4)生根培養，培養基為l/2MS+0.2 0. 4mg/L 6-BA+0. 8 1. 6mg/L NAA+lg/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 8/1瓊脂，？!1值5.8，光照時間為14 hr/d，光照強度1500 2000 Lux，溫度為 25 士 2°C。
2.根據權利要求1所述的一種文心蘭的組培育苗方法，其特征在于抗褐化劑溶液為質量分數為0. 2%的維生素C蒸餾水溶液。
3.根據權利要求1所述的一種文心蘭的組培育苗方法，其特征在于叢生芽分化繼代增殖培養可采用固體培養方式進行培養。
4.根據權利要求1所述的一種文心蘭的組培育苗方法，其特征在于生根培養基中 6-BA 濃度為 0. 3mg/L，NAA 為濃度 1. 2mg/L。
全文摘要
本發明的一種文心蘭的組培育苗方法，包括外植物體消毒、初誘導培養、繼代培養、生根培養，外植物體選用花梗腋芽，用多菌靈溶液浸泡，用抗褐化劑浸泡，再用汞常規消毒；初誘導培養基為1/2MS+瓊脂+蔗糖+活性炭+TDZ+NAA，繼代培養基為1/2MS+瓊脂+蔗糖+活性炭+亞硫酸鈉+TDZ+NAA，生根誘導培養基為1/2MS+6-BA+NAA+活性炭+蔗糖+瓊脂。本發明的文心蘭的組培育苗方法具有繁殖系數高、變異率低，各階段培養基差異性小，經5-6代繼代增殖培養后，叢生芽變異率僅為0.1%，增殖系數為6.0-7.4。
文檔編號A01H4/00GK102318560SQ201110257550
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者劉燕, 向立榮, 王濟紅, 祁翔 申請人:貴州省生物研究所