專利名稱：天花粉蛋白生物改性工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種天花粉蛋白生物的改性工藝。
背景技術：
天花粉蛋白是一種堿性植物 蛋白，為白色或微黃色鱗片狀結晶，相對分子量24000Da，等電點9. 4，為一不含糖和磷酸基團的簡單蛋白質，天花粉蛋白水溶性不大，有引濕性，對光、熱不穩定，不易被膜蛋白酶酶解，它具有多種生物活性，如引產抗孕、免疫抑制，并能抑制人艾滋病病毒(HIV)的復制和繁殖，引起藥界重視。但是由于天花粉蛋白的強抗原性(即異體排斥反應)，對艾滋病患者的肝臟損傷很大，并引起了患者的高燒、虛弱、炎癥等一系列副作用。因此對天花粉蛋白的改性、修飾、降解的研究引起界內的極大關注。CN200710173408. 9公開了天花粉蛋白衍生肽及其應用，該專利公開了三種天花粉蛋白衍生肽。CN200410074324. 6公開了天花粉蛋白突變體及其編碼基因，天花粉蛋白突變體是天花粉蛋白的自N端的第55位酪氨酸和自N端的第78位天冬氨酸的兩個氨基酸殘基中至少一個突變。CN01103102. 6公開了一種天花粉蛋白突變體及制備方法，產品是從天然天花粉蛋白基因經突變改造后，通過合適的表達系統制備得到的。CN200310112768.X公開了聚乙二醇化天花粉蛋白藥物及其制備方法。本發明由聚乙二醇和天花粉蛋白的N端通過胺鍵連接，且一個TCS分子結合一個聚乙二醇分子所組成。原則上，上述幾種工藝都可以將天花粉蛋白改性，然而，更有效降低天花粉蛋白毒副作用，擴大天花粉蛋白的用途范圍，將對天花粉的發展產生積極影響。
發明內容
本發明的目的是提供一種能夠既能降低天花粉毒性又能提高其藥用范圍的天花粉蛋白生物改性工藝。本發明的目的是通過以下技術方案實現的1、中藥材栝樓根莖破碎與滅菌；2、谷物麩皮與粉末混合生成天花粉蟲卵；3、天花粉幼蟲培殖；4、天花粉蛆蟲培育；5、天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活；6、天花粉蛆蟲干燥；7、天花粉蛆蟲包裝。具體步驟如下
(1)栝樓根莖破碎后進行滅菌處理，備用；
(2)生成天花粉蟲卵取1000-2000g谷物麩皮、200-100g栝樓糊狀物、IO-IOOg蛋白胨、IO-IOOg KH2PO4混合均勻成為天花粉蟲卵培養液，保持溫度25-55°C，時間48_120h，生成蟲卵；
(3)天花粉幼蟲培殖配制天花粉幼蟲培養液，分裝于20-25個三角瓶中，每瓶分別裝入前面培殖的蟲卵，搖床1-10次/min，培育12-48h，生成含幼蛆培養液；(4)天花粉蛆蟲培育配制天花粉蛆蟲培育液，加入含幼蛆培養液進行培育，培育出的天花粉蛆蟲由乳白色變為乳黃色，培育過程完成，培育參數PH=5. 5-8，攪拌速度I-IOr/min，溫度 25-45°C，通氣量 O. 5_20L/min，時間 72_240h ；
(5)天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活將培育液及培育出的天花粉蛆蟲一起放入分離機中蟲液分離，用純凈水漂洗，然后用熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲，天花粉蛆蟲被滅活；
(6)天花粉蛆蟲干燥滅活的天花粉蛆蟲干燥，得到天花粉蛆蟲成品。本發明以栝樓為原料，經過蛆種繁殖、幼蟲培殖和蛆蟲培養,生成天花粉蛆蟲,天花粉蛆蟲蛋白質不僅保留了天花粉蛋白的藥用功效，而且由于相對分子量由24000Da提高到86000Da，因此降低了天花粉蛋白的毒副作用，為天花粉蛋白的應用提供了更廣闊的空間。本工藝過程簡單實用，易于控制，節省能源，適合工業化生產。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的描述
實施例I:
(1)IOOOg新鮮栝樓塊莖用破碎機破碎成小塊，然后用磨漿機磨成糊狀；
(2)將上述栝樓糊狀物與1000-2000g麥麩、10-50gK2HP04、10_20g蛋白胨、10_20mL氨水混合并攪拌均勻，保持溫度25-38°C，時間48-240h，繁殖出蟲卵，用孔徑O. I-2mm篩子分篩出蟲卵；
(3)取IOOg 栝樓干粉、2-10g 葡萄糖、O. 2-1. Og 蛋白胨、O. 2-1. Og KH2PO4,O. 01-0. 05gMgS04,加入 O. 5-1. OL 去離子水，加熱 80-100 °C，時間 10_30min，冷卻至25-30°C，分裝至20-30個三角燒瓶中，每個瓶中裝入O. 1-0. 5g前面繁殖的蟲卵，搖床l-100r/min，培殖12_48h，生成天花粉幼蛆；
(4)取500-1000g 栝樓干粉、20-100g 葡萄糖、10_20g 蛋白胨、10_20g KH2PO4'O. 1-0. 5gNaCl、0. 1-0. 5gZnS04，加入2-5L去離子水，混合均勻，加入含天花粉幼蛆培養液O. 5-1. OL進行培育，培育的天花粉蛆蟲由乳白色變為乳黃色，培育過程完成；
培育參數PH=5. 5-8，攪拌速度l-10r/min，溫度25-45 °C，通氣量10_20L/min，時間120-240h ；
(5)將培養液及培育出的天花粉蛆蟲放入離心機以轉速550-1250r/min分離出天花粉蛆蟲，用10-20L純凈水漂洗2-3次，用80-100°C熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲Ι-lOmin，天花粉蛆蟲被滅活；
(6)滅活的天花粉蛆蟲用真空冷凍干燥機在溫度-3(T30°C、真空度50-200kPa、時間5-24h，干燥至含水分5-8%得到天花粉蛆蟲成品，天花粉蛆蟲含量為90% ；
(7)干燥的天花粉蛆蟲用鋁塑真空包裝袋包裝。實施例2:
(1)IOOOg干燥栝樓莖塊用粉碎機以250-1250r/min粉碎至O. 05-0. 5mm,并用O. 05-0. 2mm孔徑篩子分篩，收集粉末狀物料；
(2)粉末狀物料加入5-20L純凈水攪拌均勻成糊狀物；
(3)糊狀物在80-120°C殺菌10-30min，然后降溫至25_30°C備用；
(4)取IOOg谷糠、20-50g糊狀物、5-10g蛋白胨、5-10gKH2PO4混合均勻，噴灑10_15mL純凈水，保持溫度25-55°C，時間48-120h，生成蟲卵，用孔徑O. 1-2. Omm篩子篩出蟲卵備用；
(5)取200-300g栝樓糊狀物、5-10g酵母抽提粉、2-5gNaCl、l-2mL氨水，加入O.5-1. OL純凈水混合均勻，分裝于20-25個三角瓶中，每瓶分別裝入O. 2-1. Og前面培殖的蟲卵，搖床1-10次/min，培育12-48h，生成含幼蛆培養液；
(6)5-8L去離子水中加入1000-2000g栝樓莖塊粉、20_80g酵母抽提粉、2_5gK2S04、O. 01-0. 05gNaCl、20-100gNa2HP04、0· 01-0. 05gCaCl2，攪拌均勻成培養液，用 10000-15000 高斯磁感強度處理培養液3-5min，處理2次后加入含幼蛆培養液500-1OOOmL進行培育，培育出的天花粉蛆蟲由乳白色變為乳黃色，培育過程完成；
培育參數PH=5. 5-8，攪拌速度l-10r/min。溫度25_35°C，通氣量O. 5_20L/min，時間72-148h ；
(7)將培育液及培育出的天花粉蛆蟲一起放入分離機中以轉速550-1250r/min蟲液分 離，用10-20L純凈水漂洗2-3次，用80-100°C熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲Ι-lOmin，天花粉蛆蟲被滅活；
(8)滅活的天花粉蛆蟲用真空冷凍干燥機在溫度-3(T30°C、時間12-24h、真空度10-100kPa、干燥至含水分5-8%得到天花粉蛆蟲成品，天花粉蛆蟲含量為91% ；
(9)天花粉蛆蟲用鋁塑真空包裝袋真空包裝。
權利要求
1.天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述工藝包括如下步驟 (1)栝樓根莖破碎后進行滅菌處理，備用； (2)生成天花粉蟲卵取1000-2000g谷物麩皮、200-100g栝樓糊狀物、IO-IOOg蛋白胨、IO-IOOg KH2PO4混合均勻成為天花粉蟲卵培養液，保持溫度25-55°C，時間48_120h，生成蟲卵； (3)天花粉幼蟲培殖配制天花粉幼蟲培養液，分裝于三角瓶中，每瓶分別裝入前面培殖的蟲卵，搖床1-10次/min，培育12-48h，生成含幼蛆培養液； (4)天花粉蛆蟲培育配制天花粉蛆蟲培育液，加入含幼蛆培養液進行培育，培育出的天花粉蛆蟲由乳白色變為乳黃色，培育過程完成，培育參數PH=5. 5-8，攪拌速度I-IOr/min，溫度 25-45°C，通氣量 0. 5_20L/min，時間 72_240h ； (5)天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活將培育液及培育出的天花粉蛆蟲一起放入分離機中 蟲液分離，用純凈水漂洗，然后用熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲，天花粉蛆蟲被滅活； (6)天花粉蛆蟲干燥滅活的天花粉蛆蟲干燥，得到天花粉蛆蟲成品。
2.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述谷物麩皮為麥麩或谷糠。
3.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述天花粉幼蟲培養液由 IOOg 括樓干粉、2-10g 葡萄糖、0. 2-1. Og 蛋白胨、0. 2-1. Og KH2P04、0. 01-0. 05gMgS04、0.5-1. OL去離子水混合而成。
4.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述天花粉幼蟲培養液由200-300g栝樓糊狀物、5-10g酵母抽提粉、2-5gNaCl、l-2mL氨水、0. 5-1. OL純凈水混合rfu 。
5.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述天花粉蛆蟲培育液由 500-1000g 栝樓干粉、20-100g 葡萄糖、10-20g 蛋白胨、10-20g KH2P04、0. 1-0. 5gNaCl、0.1-0. 5gZnS04、2-5L去離子水混合而成。
6.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述天花粉蛆蟲培育液由5-8L去離子水中、1000-2000g栝樓莖塊粉、20_80g酵母抽提粉、2_5gK2S04、0.01-0. 05gNaCl、20-100gNa2HP04、0. 01-0. 05gCaCl2 混合而成。
7.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述培育參數為pH=5. 5-8，攪拌速度 l-10r/min，溫度 25_35°C，通氣量 0. 5_20L/min，時間 72_148h。
8.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述培育參數為pH=5. 5-8，攪拌速度 l-10r/min，溫度 25_45°C，通氣量 10_20L/min，時間 120_240h。
9.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述培養液及培育出的天花粉蛆蟲放入離心機以轉速550-1250r/min分離出天花粉蛆蟲，用10-20L純凈水漂洗2-3次，用80-100°C熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲1-lOmin，天花粉蛆蟲被滅活。
10.根據權利要求I所述的天花粉蛋白生物改性工藝，其特征在于所述滅活的天花粉蛆蟲用真空冷凍干燥機在溫度-3(T30°C、時間12-24h、真空度10-100kPa、干燥至含水分5~8%得到天花粉姐蟲成品。
全文摘要
天花粉蛋白生物改性工藝，屬于生物技術領域。本發明的目的是提供一種能夠既能降低天花粉毒性又能提高其藥用范圍的天花粉蛋白生物改性工藝，包括如下步驟(1)栝樓根莖破碎、滅菌；(2)生成天花粉蟲卵；(3)天花粉幼蟲培殖；(4)天花粉蛆蟲培育；(5)天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活；(6)天花粉蛆蟲干燥。本發明以栝樓為原料，經過蛆種繁殖、幼蟲培殖和蛆蟲培養，生成天花粉蛆蟲，天花粉蛆蟲蛋白質不僅保留了天花粉蛋白的藥用功效，而且降低了天花粉蛋白的毒副作用，為天花粉蛋白的應用提供了更廣闊的空間。本工藝過程簡單實用，易于控制，節省能源，適合工業化生產。
文檔編號A01K67/033GK102792923SQ20121031567
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月31日 優先權日2012年8月31日
發明者徐華民, 趙榮華, 趙艷琨, 徐萌 申請人:哈爾濱工業大學