專利名稱：番木瓜組織培養培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及組織培養基，尤其涉及ー種番木瓜組織培養培養基。
背景技術：
番木瓜(Carica papaya L.)是著名的熱帶、亞熱帶水果之一,是ー種廣泛分布于世界熱帶、亞熱帶地區的多年生常綠果樹作物，其因生長快速、結果早、產量高，成為我國南部及世界熱帶地區最普遍栽培的果樹種之一，在我國廣東、廣西、福建、臺灣等地廣泛種植。它具有重要的食用和エ業價值，是當前發展熱帶高效農業的重要推廣項目和熱帶農業產業結構調整項目之一。番木瓜的營養價值高，含可溶性固形物12%，每IOOg果肉含有維生素A，B1，B2，C和G 60-122mg。未熟青果的乳汁中，含有大量的“木瓜酵素(papain)”，作為肉類軟嫩劑可助消化。用途廣，除成熟的果實作為果品供鮮食，青果作為蔬菜 食用外，還可加工腌潰或制成蜜餞、果脯、果醬和果汁等。成熟的果實還可制造胃藥，未熟的果實含有豐富的木瓜蛋白酶，可用來軟化肉類、幫助消化；在醫藥上可用作制造蛋白脈；在飲料エ業上可作澄清劑；在化妝エ業上可用來制造面膏、洗發水等。未成熟的果實和肉質根也可作為飼料，可見本發明不僅能促進番木瓜的生產，而且將極大刺激食品加工、醫藥衛生、美容保健和養殖業等相關產業的發展，具有重要的經濟意義。番木瓜株性復雜，有雄性、雌性和兩性株3種株型，生產中作為水果須種植兩性株，而作為木瓜酶生產以雌株為好。番木瓜以種子繁育的植株性別表現較遲，目前還沒有快速、簡便和有效的早期鑒定方法，用種子繁育實生苗很大程度影響了生產。另外，優質番木瓜的種子價格十分昂貴，且不耐貯藏，易感染病蟲害，采用扦插、嫁接等常規的無性繁殖技術成活率又低，不適合番木瓜的快速繁殖。因此，通過組培技術快速繁殖番木瓜株性一致的優良種苗倍受關注。大量研究表明，番木瓜利用組培快繁技術育苗是非常理想的途徑，具有保持優良品種的遺傳穩定性；生產無病種苗的優點；種苗繁殖迅速等特點。目前，國內已有許多番木瓜組培技術研究報道，在生產應用上也初具規模。但是，番木瓜品種繁多，不同的品種對培養基的要求不同，一般エ廠化生產同時生產幾個品種，如果ー個品種使用一種培養基，生產操作難度大，成本高，不利于規模化生產。目前繼代培養基重點是芽分化，但能用于生根誘導的芽(即有效芽)卻很少，且芽的質量也不好，細弱、矮、黃葉；生根培養基配方很多，但是出根不整齊，不穩定，根系愈傷化，數量少等，由于存在以上問題，番木瓜組培育苗成本高，エ廠化生產比較困難。在培養基的選擇上一般采用基本培養基(MS)和生長調節劑的結合，基本培養基一般設I / 2MS、MS、3 / 2MS等3種，生長調節齊IJ選用IBA(吲哚丁酸)和NAA(萘こ酸)兩種，但是繼代培養基和生根培養基的側重點不一祥，如不區分，得到的苗生根率低，根膨化，愈傷組織多，且葉片黃花等，存在很多不足。
發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足，提供ー種番木瓜組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一歩生根培養基和第二步生根培養基，其中
每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸ニ氫鉀 325mg/L、氯化鈣 500mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ；(3)有機物甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇O. 5mg/L、煙酸O. 5mg/L、肌醇 100. Omg/L ；(4)植物生長調節劑6_芐基腺嘌呤O. 35-0. 45mg/L、萘こ酸O. 15-0. 25mg/L ；余量為蒸餾水。
每升(L)第一歩生根培養基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸ニ氫鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ；(3)有機物甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ；(4)植物生長調節劑萘こ酸0. 1-0. 2mg/L、吲哚丁酸I. 0-2. 0mg/L ；(5)其他添加物活性炭2. 0-3. 0mg/L ；余量為蒸餾水。每升(L)第二步生根培養基的組分及各組分的含量如下(I)大量元素硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸ニ氫鉀 lllmg/L、氯化I丐 245mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、ニ水鑰酸鈉0. 025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀 0. 83mg/L ；(3)有機物甘氨酸2. 0mg/L、鹽酸硫胺素10. 0mg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ；(4)植物生長調節劑卩引哚丁酸0. 1-0. 2mg/L ；(5)其他添加物活性炭3. 0-4. 0mg/L ；余量為蒸餾水。本發明番木瓜培養基中的繼代培養基的配制方法為(I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產調節劑母液；(2)根據培養基配制量依次量取各種母液，即混合母液；(3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖30g/L，瓊脂3. 0g/L ；(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；(6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5. 8 ；
(7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；(8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121. 6°C,O. IMPa下滅菌20分鐘；(9)滅菌后的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。本發明番木瓜組織培養培養基中的第一步生根培養基的配制方法為((I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產調節劑母液、活性炭;(2)根據培養基配制量依次量取各種母液，即混合母液；(3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖15g/L，瓊脂3.2g/L;(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解； (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；(6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5. 8 ；(7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；(8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121. 6°C,O. IMPa下滅菌20分鐘；(9)滅菌后的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。本發明番木瓜組織培養培養基中的第二步生根培養基的配制方法為(I)配制大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、活性炭；(2)根據培養基配制量依次量取各種母液，即混合母液；(3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖15g/L,瓊脂3. 4g/L ;(4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；(6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5. 8 ；(7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養袋，用三角架固定，夾緊；(8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121. 6°C,O. IMPa下滅菌17分鐘；(9)滅菌后的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。本發明番木瓜組織培養培養基中繼代培養的方法為(I)先弱光培養7至8天，繼代苗切ロ愈合，頂芽上挺，分化出側芽，苗木恢復長勢；(2)然后強光培養8至12天，頂芽側芽高3厘米以上，葉片舒展，莖干半木質化。此時的芽即可用于生根培養。培養溫度保持在25-30°C。本發明番木瓜培養基第一步生根培養的方法為(I)暗培養5至7天，生根苗基部膨脹，形成根原基。溫度要求比較粗放，不低于15°C即可，最佳溫度25-30°C。(2)此時的生根苗轉入第二步生根培養基繼續培養。本發明番木瓜培養基第二步生根培養的方法為(I)強光培養10至15天，室溫培養即可。(2)此時生根苗高4-5厘米，根系5條以上，葉片舒展，苗莖木質化，即可出圃移植。與目前現有技術的番木瓜組織培養基相比，本發明的優點是
權利要求
1.一種番木瓜組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一步生根培養基和第二步生根培養基，其特征在于 每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸二氫鉀325mg/L、氯化I丐 500mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅 8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉O.025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ； (3)有機物甘氨酸2.Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇O. 5mg/L、煙酸O. 5mg/L、肌醇 100. Omg/L ；(4)植物生長調節劑6_芐基腺嘌呤O.35-0. 45mg/L、萘乙酸O. 15-0. 25mg/L ； 余量為蒸餾水。
2.根據權利要求I所述的番木瓜組織培養培養基，其特征在于 每升(L)第一步生根培養基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫鉀222mg/L、氯化I丐 490mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉O.025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ； (3)有機物甘氨酸2.Omg/L、鹽酸硫胺素10. Omg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ； (4)植物生長調節劑萘乙酸O.1-0. 2mg/L、吲哚丁酸I. 0-2. 0mg/L ； (5)其他添加物活性炭2.0-3. 0mg/L ； 余量為蒸餾水。
3.根據權利要求I所述的番木瓜組織培養培養基，其特征在于 每升(L)第二步生根培養基的組分及各組分的含量如下 Cl)大量元素硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸二氫鉀lllmg/L、氯化I丐 245mg/L ；(2)微量元素一水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鑰酸鈉·0.025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸亞鐵·27. 8mg/L、碘化鉀 O. 83mg/L ； (3)有機物甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10. 0mg/L、鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L、煙酸0. 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ； (4)植物生長調節劑噴哚丁酸0.1-0. 2mg/L ； (5)其他添加物活性炭3.0-4. 0mg/L ； 余量為蒸餾水。
全文摘要
本發明公開了一種番木瓜組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一步生根培養基和第二步生根培養基。在培養基的選擇上一般采用基本培養基(MS)和生長調節劑的結合，側重點不一樣，具有縮短了繼代周期，芽的質量好，得到的苗生根率高，出根能力強，愈傷組織少，葉片深綠色等優點。
文檔編號A01H4/00GK102835315SQ201210363438
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者時群, 李清香, 黃永欽, 陳麗文, 何克欽, 勞贊新, 賴崇健, 陳艷, 黃彥妮, 李芳菲, 梁乃光 申請人:欽州市林業科學研究所