專利名稱：一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法
技術領域：
本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法。
背景技術：
番薯(Ipomoea batatas Lam.)是一種重要的糧食、飼料和工業原料作物，具有產量高、營養豐富、穩產性好等優點。然而，由于番薯病毒病的廣泛存在，以及生產中番薯以薯塊進行無性繁殖，造成病毒病的蔓延，從而造成番薯產量降低、品質下降、種性退化。目前科研上主要通過莖尖離體培養獲得脫毒種苗，但此方法運用于產業化大批量生產，擴繁速度慢，變異率高，生產成本高
發明內容
本發明的目的是提供了一種方法簡單、成本低、變異率低、擴繁速度快、縮短了繁殖周期的高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法。為了實現上述目的，本發明的技術方案為提供一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟(I)材料培養從大田取回待脫毒番薯的20 30 cm長的莖段，扦插在大棚培養基上，讓其生長新枝；過程中，每星期澆一次營養液，每5天用50%多菌靈或百菌清500倍噴葉及周圍環境，每天晚上用75%酒精噴一次周圍環境，以保棚內環境清潔；待新長出的枝長到8 10 cm時，剪下新枝，重新扦插到新的培養基上，用同樣的方法讓它長出新枝；(2)材料消毒待二次扦插苗的新枝長到8 Cm以上時，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸19 20秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗4 5次；(3)外植體芽誘導切取I Cm消毒過的外植體的腋節位接種到外植體芽誘導培養基，接種后進行三天時間的暗培養，溫度設28±2°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上；(4)繼代增值培養外植體培養25天，薯苗長至3 Cm 6 Cm時，取每株生長點2 4_單獨培養于繼代增殖培養基，剩余莖段單節培養于繼代增殖培養基，接種后進行三天暗培養，溫度設28±2°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上；三天后便可生根，下代再取生長點和單節莖段培養，12 15天或20天繼代一次，增殖系數可達4 5倍；(5)病毒檢測增殖第三、四代后便進行病毒檢測，首先采用目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機抽樣采用指示植物法進行鑒定，隨機抽樣脫毒率低于100%，則加大培養代數，直至隨機抽樣脫毒率達100% ；(6)生根培養取每株生長點2 4mm接到生根培養基，增強光照時間和光照強度，或放在自然光下培養生根；(7)煉苗、移栽生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養土，然后再蓋一層拱膜，每天都要讓其通風排氣，保持培養土濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。外殖體芽誘導的培養基配方為MS+6-BA O O. 5mg/L+IBA O O. 5mg/L+糖30g+活性碳3 6g+瓊脂6g ； 繼代增殖培養的培養基配方為改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g ；生根培養的培養基配方為改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳3 6g。本發明根據病毒在植株頂端生長點的數量遠遠少于植株下部的成熟部位的原理，加大取生長點的代數，達到脫毒的目的。本發明采用低激素濃度、改良MS基本培養基和三天的暗培養的方法，大大降低了脫毒組培苗的變異率，加快了組培苗的生長速度，縮短了繁殖周期，擴繁速度高，生產成本低。
具體實施例方式本發明高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟I、材料培養從大田取回待脫毒番薯的20 30 cm長的莖段，扦插在大棚基質上，讓其生長新枝。過程中，每星期澆一次營養液，每5天用50%多菌靈(或百菌清)500倍噴葉及周圍環境，周圍環境最好每天下班前用75%酒精每天晚上噴一次，以保棚內環境清潔。待新枝長到8 10 Cm時，剪下新枝，重新扦插到新的基質，用同樣的方法讓它長出新枝。2、材料消毒待二次扦插苗的新枝長到8 Cm以上時，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封好，拿到工作臺前，用75%酒精浸20秒左右，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗4 5次。3、外植體芽誘導切取I Cm左右的消毒過的外植體的腋節位接種到外植體芽誘導培養基，接種后進行三天時間的暗培養，溫度設(28±2)°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上。4、繼代增殖培養外植體培養25天左右，薯苗長至3 Cm 6 Cm時，取每株生長點2 4mm左右單獨培養于繼代增殖培養基，剩余莖段單節培養于繼代增殖培養基，接種后進行三天暗培養，溫度設(28±2)°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上。三天后便可生根，下代再取生長點和單節莖段培養，一般12 15天或20天繼代一次都可，增殖系數可達4 5倍。5、病毒檢測一般增殖第三、四代后便可進行病毒檢測。首先采用目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機抽樣采用指示植物法進行鑒定。隨機抽樣脫毒率低于100%，則加大培養代數，直至隨機抽樣脫毒率達100%。6、生根培養取每株生長點2 4_左右接到生根培養基，增強光照時間和光照強度，或放在自然光下培養生根。7、煉苗、移栽生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養土。然后再蓋一層拱膜，但每天都要讓其通風排氣，保持培養土濕潤，濕度在80 85%左右，不能過大，否則容易腐爛，待其長到5 8片新葉即可移栽大田。培養基配方外殖體芽誘導MS+6_BAO O. 5mg/L+IBA O 0.5mg/L+糖 30g+活性碳 3 6g+瓊脂6g繼代增殖培養改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g生根培養改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳3 6g。表I.本發明的方法和普通莖尖培養的比較
權利要求
1.一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)材料培養 從大田取回待脫毒番薯的20 30 Cm長的莖段，扦插在大棚培養基上，讓其生長新枝；過程中，每星期澆一次營養液，每5天用50%多菌靈或百菌清500倍噴葉及周圍環境，每天晚上用75%酒精噴一次周圍環境，以保棚內環境清潔；待新長出的枝長到8 10 cm時，剪下新枝，重新扦插到新的培養基上，用同樣的方法讓它長出新枝； (2)材料消毒 待二次扦插苗的新枝長到8 cm以上時，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸19 20秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘， 最后用無菌水沖洗4 5次； (3)外植體芽誘導 切取I cm消毒過的外植體的腋節位接種到外植體芽誘導培養基，接種后進行三天時間的暗培養，溫度設28±2°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上； (4)繼代增值培養 外植體培養25天，薯苗長至3 cm 6 cm時，取每株生長點2 4mm單獨培養于繼代增殖培養基，剩余莖段單節培養于繼代增殖培養基，接種后進行三天暗培養，溫度設28±2°C，在光周期16小時以上，光強2000LX以上；三天后便可生根，下代再取生長點和單節莖段培養，12 15天或20天繼代一次，增殖系數可達4 5倍； (5)病毒檢測 增殖第三、四代后便進行病毒檢測，首先采用目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后隨機抽樣采用指示植物法進行鑒定，隨機抽樣脫毒率低于100%，則加大培養代數，直至隨機抽樣脫毒率達100% ； (6)生根培養 取每株生長點2 4mm接到生根培養基，增強光照時間和光照強度，或放在自然光下培養生根； (7)煉苗、移栽 生根好后的苗在放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，剪去過長的根，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養土，然后再蓋一層拱膜，每天都要讓其通風排氣，保持培養土濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。
2.如權利要求I所述的一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法，其特征在于 外殖體芽誘導的培養基配方為MS+6-BA O O. 5mg/L+IBA O O. 5mg/L+糖30g+活性碳3 6g+瓊脂6g ； 繼代增殖培養的培養基配方為改良MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g ； 生根培養的培養基配方為改良2/3MS+IBA O O. 5mg/L+糖30g+瓊脂6g+活性碳.3 6g0
全文摘要
本發明公開了一種高效產業化生產番薯脫毒組培苗的方法，包括以下步驟(1)材料培養(2)材料消毒(3)外植體芽誘導(4)繼代增值培養(5)病毒檢測(6)生根培養(7)煉苗、移栽。本發明根據病毒在植株頂端生長點的數量遠遠少于植株下部的成熟部位的原理，加大取生長點的代數，達到脫毒的目的。本發明采用低激素濃度、改良MS基本培養基和三天的暗培養的方法，大大降低了脫毒組培苗的變異率，加快了組培苗的生長速度，縮短了繁殖周期，擴繁速度高，生產成本低。
文檔編號A01H4/00GK102860259SQ20121036341
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者朱紅林, 王效寧, 劉迪, 孟衛東, 齊蘭 申請人:海南省農業科學院糧食作物研究所