專利名稱：一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法
技術領域：
本發明農業生物技術領域，具體涉及一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法。
背景技術：
裸花紫珠(Callicarpa nudifIora)是一種重要的藥用植物,根和葉藥用，有止血止痛、散瘀消腫、驅風祛濕之功能，可治創傷出血、嘔血、咳血、消化道出血、拔牙出血、跌打損傷、風濕痹痛等癥。裸花紫珠的種籽結實率較低，出苗率更低，分株繁育苗的系數又很小，無法滿足生產的需要。
發明內容
本發明的目的是提供了一種簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠 外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規模化生產提供了可靠的技術途徑的組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法。為了實現上述目的，本發明的技術方案為提供一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法，包括以下步驟(I)、選擇外植體利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體；(2)、接種培養切取消毒后的裸花紫珠I 2 Cm長的單節莖段，將其放置在促進莖段側芽萌發和生長的接種培養基上，該接種培養基為WPM基本培養基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O. 5mg/L 的 IBA ；(3)、擴繁培養當側芽長到I Cm以上時，切下側芽轉移到擴繁培養基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養基為MS基本培養基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節莖段擴繁；(4)、生根培養選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養基中，該生根培養基為1/2MS基本培養基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度；(5)、煉苗移栽取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養基質，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風排氣，保持培基質濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。本發明對外植體的采集、消毒方法、分化、增殖和生根培養基的篩選、移栽基質的選擇及培養過程中環境條件等方面進行了控制。采用選擇外植體、接種培養、擴繁培養、生根培養、煉苗移栽方法，建立了一套完整的裸花紫珠的組培快繁技術體系，使分化率達到100%，月增殖系數達到4. 95，生根率達到93. 7%，移栽成活率達到90%以上。本發明方法簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規模化生產提供了可靠的技術途徑。
具體實施例方式本發明一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法，包括以下步驟(I)、選擇外植體 利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體；(2)、接種培養切取消毒后的裸花紫珠I 2 Cm長的單節莖段，將其放置在促進莖段側芽萌發和生長的接種培養基上，該接種培養基為WPM基本培養基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O. 5mg/L 的 IBA ；(3)、擴繁培養當側芽長到I Cm以上時，切下側芽轉移到擴繁培養基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養基為MS基本培養基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節莖段擴繁；(4)、生根培養選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養基中，該生根培養基為1/2MS基本培養基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度；(5)、煉苗移栽取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養基質，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風排氣，保持培基質濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。表I外置體芽誘導實驗數據統計
外置體數(個)分化出側芽的外置體數(個) 分化率(％)
ΤδΟΤδΟ100
表2側芽實驗數據統計
權利要求
1.一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)、選擇外植體 利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體； (2)、接種培養 切取消毒后的裸花紫珠I 2 cm長的單節莖段，將其放置在促進莖段側芽萌發和生長的接種培養基上，該接種培養基為WPM基本培養基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O.5mg/L 的 IBA ； (3)、擴繁培養 當側芽長到I cm以上時，切下側芽轉移到擴繁培養基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養基為MS基本培養基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節莖段擴繁； (4)、生根培養 選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養基中，該生根培養基為1/2MS基本培養基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度； (5)、煉苗移栽 取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養基質，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風排氣，保持培基質濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。
全文摘要
本發明公開了一種組織培養快速繁殖裸花紫珠的方法。本發明對外植體的采集、消毒方法、分化、增殖和生根培養基的篩選、移栽基質的選擇及培養過程中環境條件等方面進行了控制。采用選擇外植體、接種培養、擴繁培養、生根培養、煉苗移栽方法，建立了一套完整的裸花紫珠的組培快繁技術體系，使分化率達到100％，月增殖系數達到4.95，生根率達到93.7％，移栽成活率達到90％以上。本發明方法簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規模化生產提供了可靠的技術途徑。
文檔編號A01H4/00GK102870678SQ20121039253
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月16日 優先權日2012年10月16日
發明者王效寧, 朱紅林, 陳健曉, 孟衛東, 齊蘭 申請人:海南省農業科學院糧食作物研究所