專利名稱：一種霍山石斛的組織培養方法
技術領域：
本發明主要涉及一種組織培養方法，尤其涉及一種石斛的組織培養方法。使組培苗提前走出組培室，進入陽光大棚，人工“馴化”。比正常組培苗早6-8個月進入栽培基地。
背景技術：
霍山石斛為蘭科多年生附生草本植物。形曲不直，似蚱蜢髀，是石斛中的極品。為我縣獨有，擁有原產地地理保護標志和瀕臨滅絕的國家級珍惜名貴中藥材，是國家野生中藥材二級保護品種，有“植物大熊貓”之稱。《本草綱目》記載:石斛生于懸崖峭壁之間、性微寒，有養胃生津、滋陰除熱、補腎益精、明目之功效。以之代茶可開胃健脾。霍山石斛具有益精填髓、補五臟內絕不足，平胃氣、長肌肉、益智除煩、清虛熱、輕身延年之功效。清趙學敏、趙學凱《本草綱目拾遺》《百草經》語曰:石斛近時有一種形短祗寸許細如燈芯，色青黃、嚼之味甘，微有滑涎。系出六安穎州府霍山縣是名霍山石斛最佳……經中國科技大學和中山醫科大學研究證明:霍山石斛具有增強T細胞B細胞WK細胞和巨噬細胞的作用。對抑制腫瘤和降血糖有非常好的療效。可促進血液循環，增強心臟功能，促進胃腸蠕動增強消化功能。顯著提高人體的sop (超氧岐化酶)水平。降低LPO (過氧化脂質)，起到顯著的抗衰老作用。藥用石斛有50種之多，品質最佳的是霍山石斛，為石斛中的珍品，野生石斛與黃金等價。 石斛喜陰涼濕潤環境，常附生于陰涼濕潤的樹上和巖石上。喜風，又有“風大貫”之稱。尤其是半陰半陽的地方，附生有苔蘚植被石灰巖石上和樹上最好。其生長條件苛刻，石斛種子細小，不具胚乳(供幼苗生長的物質)，在自然狀態下，發芽率很低，成苗更難。20世紀40年代kundson介紹了簡便萌發蘭花種子的培養基。為石斛種子培育試管苗奠定了基礎。但石斛組織培養試管苗工作大多起步于20世紀70年代末至80年代初。20世紀90年代，國內許多教育科研植物園等單位均開展此項研究工作，發展很快。至90年代末組織培養試管苗移栽大田成活率已達95%以上。本發明人在石斛組織培養中，利用不同生長期用不同的生長物質和特殊試管苗馴化手段使試管苗提前約6個月進入種植基地。既節約了資源又優化了試管苗品質。安徽省霍山縣地處我省西部偏南，大別山北麓。介于北緯33° 03’-31° 33’，東經115° 52’-116° 32’之間。平均海拔500米，屬亞熱帶季風氣候區。四季分明，雨量充沛，年平均氣溫14.2°C -16.1 °C，最冷月平均氣溫2 °C，最熱月平均氣溫27.8 °C。年降水量1100-1600mm,絕對濕度年平均15.6mb,常年相對濕度80%，全年> 80%天數200天左右。無霜期為220-270天，無霜期長。自然環境優美，是霍山石斛品質形成的重要條件。野外栽培的石斛培產量低，受自然因素控制，收成受氣候影響大，病蟲害嚴重且難以防治；大棚種植的石斛品質又得不到保證，因此先對石斛進行組織培養，然后再在自然環境下種植生長，可以提高石斛的產量和品質
發明內容
本發明目的就是為了提供一種霍山石斛的組織培養方法。本發明是通過以下技術方案實現的:
一種霍山石斛的組織培養方法，包括以下步驟:
(1)取石斛種子，于4-6°C的低溫條件下保存10-15天；
(2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養基A中進行培養40-50天，期間種子會萌發生芽；
所述的培養基A，每升培養基A中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、瓊脂 7000-9000、硝酸鉀1500-2000、硝酸銨 1500-1800、硝酸鈉 1000-1200、磷酸二氫鉀 150-200、硫酸鎂 300-400、氯化鈣400-500、碘化鉀0.8-1、煙酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸錳20-30、硫酸鋅8_10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉 20-30 ；
(3)將生芽的種子幼苗加入到培養基B中添加微肥進行培養70-80天，期間保持環境溫度為20-30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2-2厘米；
所述的培養基B，每升培養基B中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、瓊脂7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、硫酸鎂10-20、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鑰酸鈉0.01-0.02 ；
(4)將上述長大的幼苗加入到培養基C中添加微肥進行培養95-110天，得到成品苗； 所述的培養基C，每升培養 基C中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脫脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鹽酸硫胺素0.1-0.5、鑰酸鈉 0.01-0.02 ；
(5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養90-100天，即可進行常規種植。本發明的優點是:
本發明提供的石斛組織培養方法，解決了霍山石斛野外栽培產量低，受自然因素控制，靠天收，病蟲害防治難、大棚種植的品質低等缺陷，因為石斛對于生產環境條件要求苛刻，通過組織培養，節約了土地資源，保持了石斛的優良特性，提高了種植成活率。
具體實施例方式實施例1
一種霍山石斛的組織培養方法，包括以下步驟:
(1)取石斛種子，于6°c的低溫條件下保存15天；
(2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養基A中進行培養50天，期間種子會萌發生芽；
所述的培養基A，每升培養基A中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、南瓜粉6000、瓊脂9000、硝酸鉀2000、硝酸銨1800、硝酸鈉1200、磷酸二氫鉀200、硫酸鎂400、氯化鈣500、碘化鉀0.8、煙酸0.5_1、硼酸10、硫酸錳30、硫酸鋅8-10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉30 ；(3)將生芽的種子幼苗加入到培養基B中進行培養80天，期間保持環境溫度為30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2厘米；
所述的培養基B，每升培養基B添加微肥中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、大豆蛋白粉6000、瓊脂9000、硝酸鉀2000、氯化鈣500、硫酸鎂20、肌醇100、硫酸銅0.02、甘氨酸4、活性炭600、鹽酸吡哆醇0.5、硫酸亞鐵30、EDTA 二鈉30、鑰酸鈉0.02 ；
(4) 將上述長大的幼苗加入到培養基C中添加微肥進行培養110天，得到成品苗； 所述的培養基C，每升培養基C中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、脫脂奶粉20000、酵母粉9000、硝酸鉀2000、氯化鈣500、肌醇100、硫酸銅0.02、甘氨酸4、活性炭600、鹽酸吡哆醇0.5、硫酸亞鐵30、EDTA 二鈉30、鹽酸硫胺素0.5、鑰酸鈉0.02 ；
(5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養100天，即可進行常規種植。
權利要求
1.一種霍山石斛的組織培養方法，其特征在于包括以下步驟: (1)取石斛種子，于4-6°C的低溫條件下保存10-15天； (2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養基A中進行培養40-50天，期間種子會萌發生芽； 所述的培養基A，每升培養基A中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、瓊脂 7000-9000、硝酸鉀1500-2000、硝酸銨 1500-1800、硝酸鈉 1000-1200、磷酸二氫鉀 150-200、硫酸鎂 300-400、氯化鈣400-500、碘化鉀0.8-1、煙酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸錳20-30、硫酸鋅8_10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉 20-30 ； (3)將生芽的種子幼苗加入到培養基B中添加微肥培養70-80天，期間保持環境溫度為20-30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2-2厘米； 所述的培養基B，每升培養基B中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、瓊脂7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、硫酸鎂10-20、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鑰酸鈉0.01-0.02 ； (4)將上述長大的幼苗加入到培養基C中添加微肥進行培養95-110天，得到成品苗； 所述的培養基C，每升培養基C中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脫脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣4 00-500、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鹽酸硫胺素0.1-0.5、鑰酸鈉 0.01-0.02 ； (5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養90-100天，即可進行常規種植。
全文摘要
本發明提供的霍山石斛組織培養方法，解決了霍山石斛野外栽培產量低，受自然因素控制，靠天收，病蟲害防治難、大棚種植的品質低等缺陷，因為石斛對于生產環境條件要求苛刻，通過組織培養，提高了種子出苗率，保持了石斛的優良特性，提高了種植成活率。
文檔編號A01H4/00GK103109742SQ20131003800
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月31日 優先權日2013年1月31日
發明者何斌 申請人:安徽霍山縣藥王谷林農科技有限公司