專利名稱：一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及大蒜組織培養技術，屬于農業技術領域，具體地說是一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基。
背景技術：
大蒜，多年生草本植物，百合科蔥屬。地下鱗莖分瓣，按皮色不同分為紫皮種和白皮種。辛辣，有刺激性氣味，可食用或供調味，亦可入藥。大蒜營養豐富:每100克含水分69.8克，蛋白質4.4克，脂肪0.2克，碳水化合物23.6克，鈣5毫克，磷44毫克，鐵0.4毫克，維生素C3毫克。此外，還含有硫胺素、核黃素、尼克酸、蒜素、檸檬醛以及硒和鍺等微量元素。含揮發油約0.2%，油中主要成分為大蒜辣素，具有殺菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解廣生。尚含多種稀丙基、丙基和甲基組成的硫釀化合物等。蒜中含有“蒜胺”，這種物質對大腦的益處比維生素B，還強許多倍。植物受創傷后，在傷面新生的組織稱為愈傷組織。植物組織培養中誘導外植體細胞分裂形成的愈傷組織，大都不是損傷的結果，而是利用外源的植物激素類物質誘導細胞開始分裂形成的，常用的有生長素類物質如2，4-=氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和細胞分裂素如6芐基嘌呤等。生長素和細胞分裂素按一定濃度和比例配合使用，易于誘導出愈傷組織。目前，通過組織和器官培養技術，僅在少數幾種蔥屬植物上建立起了離體再生體系。大蒜屬無性繁殖作物，絕大多數蒜種表現出很強的不結實性。生產上均采用傳統的地方品種和自然變異的大蒜品種培植，很難獲得或創造可育的大蒜材料進行有性雜交育種。但隨著新的育種技術發展，人工誘變、原生質體的分離和融合以及組織培養等新的手段相繼涌現，使大蒜的育種工 作取得了很大的進展。
發明內容
本發明的目的在于提供一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，克服大蒜鱗莖尖組織誘導率低的問題，本發明方法利用高效誘導的培養基，用于大蒜的科研和生產。為實現上述目的，本發明所述一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其特征在于:該大蒜愈傷組織誘導的培養基是將氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養基MS中而成的，其各組份的用量為:以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲
1.0 2.0mg、復硝酹鈉0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、鹿糖20g、瓊脂6g。本發明所述一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其實現方式如下:
一、供試植物材料采用市場購買的破除休眠期的普通白皮大蒜，該實驗多用氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白均為北京索萊寶科技有限公司產品，實驗所用其他試劑均為國產分析純；
二、去白皮大蒜將蒜瓣剝開后置于直徑12cm的培養皿中，下墊5層紗布，用水浸濕，將剝好的蒜瓣放置于紗布上，25°C水培法生根，每天早晚各換水I次；三、去生長健壯的新鮮根尖3 5mm用大量清水沖洗，之后用75%酒精浸泡10 15s，再放入0.1%氯化汞7 8min，之后用大量無菌水沖洗8 10次以除去殘留消毒液；
四、將消毒后的上述外植體接于含有氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS的培養基上，所述培養基為以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲1.0 2.0mg、復硝酚鈉0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、瓊脂6g ;pH值調整為5.8 6.0。所述原料中，MS為基本培養基，提供培養組織生長發育所需的無機營養和部分有機營養元素:氯吡脲和復硝酚鈉是植物生長調節劑，具有促進培養組織形成胚性愈傷組織的作用；水解酪蛋白提供有機多肽類營養元素；蔗糖提供培養組織生長發育所的碳素營養:瓊脂主要作用是固化培養基，起支撐作用。所述培養基的制作方法是將氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS，攪拌均勻，PH值調整為5.8 6.0之間即可。所述氯吡脲是一種高活性的苯基脲類衍生物，具有細胞分裂素活性。有促進細胞分裂和擴大、器官形成和蛋白質的合成、提高光合作用效率、增強抗逆性、延緩衰老、在瓜果植物上可促進花芽分化，保花保果，提高坐果率、促進果實膨大等作用。所述復硝酚鈉是一種強力細胞賦活劑，與植物接觸后能迅速滲透到植物體內，促進細胞的原生質流動，提高細胞活力。本發明所述一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其有益效果在于:本發明培養基具有促進細胞分裂和擴大、器官形成和蛋白質的合成、提高光合作用效率、增強抗逆性、延緩衰老、在瓜果植物上可促進花芽分化，保花保果，提高坐果率、促進果實膨大等作用；復合植物生長調節劑的使用使得培養基與植物接觸`后能迅速滲透到植物體內，促進細胞的原生質流動，提高細胞活力，利用本培養基大蒜莖尖組織培養中愈傷組織的誘導率均大于34%，并可達到82%左右。
具體實施例方式以下實施例為本發明作進一步出闡述。實施例1
一、供試植物材料采用市場購買的破除休眠期的普通白皮大蒜。該實驗多用氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白均為北京索萊寶科技有限公司產品，實驗所用其他試劑均為國產分析純；
二、去白皮大蒜將蒜瓣剝開后置于直徑12cm的培養皿中，下墊5層紗布，用水浸濕，將剝好的蒜瓣放置于紗布上，25°C水培法生根，每天早晚各換水I次；
三、去生長健壯的新鮮根尖3mm用大量清水沖洗，之后用75%酒精浸泡10s，再放入
0.1%氯化汞7min，之后用大量無菌水沖洗8次以除去殘留消毒液；
四、將消毒后的上述外植體接于含有氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS的培養基上，所述培養基為以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲1.0mg、復硝酚鈉0.05mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、瓊脂6g pH值調整為5.8。實施例2
一、供試植物材料采用市場購買的破除休眠期的普通白皮大蒜。該實驗多用氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白均為北京索萊寶科技有限公司產品，實驗所用其他試劑均為國產分析純；
二、去白皮大蒜將蒜瓣剝開后置于直徑12cm的培養皿中，下墊5層紗布，用水浸濕，將剝好的蒜瓣放置于紗布上，25°C水培法生根，每天早晚各換水I次；
三、去生長健壯的新鮮根尖4mm用大量清水沖洗，之后用75%酒精浸泡12s，再放入
0.1%氯化汞7min，之后用大量無菌水沖洗9次以除去殘留消毒液；
四、將消毒后的上述外植體接于含有氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS的培養基上，所述培養基為以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲1.5mg、復硝酚鈉0.3mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、瓊脂6g pH值調整為5.9。 實施例3
一、供試植物材料采用市場購買的破除休眠期的普通白皮大蒜。該實驗多用氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白均為北京索萊寶科技有限公司產品，實驗所用其他試劑均為國產分析純；
二、去白皮大蒜將蒜瓣剝開后置于直徑12cm的培養皿中，下墊5層紗布，用水浸濕，將剝好的蒜瓣放置于紗布上，25°C水培法生根，每天早晚各換水I次；
三、去生長健壯的新鮮根尖5mm用大量清水沖洗，之后用75%酒精浸泡15s，再放入
0.1%氯化汞8min，之后用大量無菌水沖洗10次以除去殘留消毒液；
四、將消毒后的上述外植體接于含有氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS的培養基上，所述培養基為 以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲2.0mg、復硝酚鈉0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、瓊脂6g pH值調整為6.0。
權利要求
1.一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其特征在于:該大蒜胚性愈傷組織誘導的培養基是將氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養基MS中而成的，其各組份的用量為:以IL基本培養基MS加入量計:MS 1L、氯吡脲1.0 2.0mg、復硝酚鈉0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、鹿糖20g、瓊脂6g。
2.如權利要求1所述一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其特征在于:所述培養基的制作方法是將氯吡脲、復硝酚鈉、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂溶解于MS，攪拌均勻，pH值調整為5.8 6.0之間即可。
3.如權利要求1所述一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，其特征在于:使用方法如下: Φ去白皮大蒜將蒜瓣剝開后置于直徑12cm的培養皿中，下墊5層紗布，用水浸濕，將剝好的蒜瓣放置于紗布上，25°C水培法生根，每天早晚各換水I次； Q去生長健壯的新鮮根尖3 5mm用大量清水沖洗，之后用75%酒精浸泡10 15s，再放入0.1%氯化汞7 8min，之后用大量無菌水沖洗8 10次以除去殘留消毒液； O將消毒后的上述外植 體接于所述培養基上。
全文摘要
本發明公開一種大蒜愈傷組織高效誘導的培養基，涉及大蒜組織培養技術，屬于農業技術領域。其特征在于其各組份的用量為以1L基本培養基MS加入量計MS1L、氯吡脲1.0～2.0mg、復硝酚鈉0.05～0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、瓊脂6g。其有益效果在于本發明培養基具有促進細胞分裂和擴大、器官形成和蛋白質的合成、提高光合作用效率、增強抗逆性、延緩衰老、在瓜果植物上可促進花芽分化，保花保果，提高坐果率、促進果實膨大等作用；復合植物生長調節劑的使用使得培養基與植物接觸后能迅速滲透到植物體內。
文檔編號A01H4/00GK103141385SQ201310062350
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月28日 優先權日2013年2月28日
發明者王茜 申請人:王茜