專利名稱：用于防治松材線蟲病的菌株Smal-007及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種細菌菌株，具體涉及一種防治松材線蟲病的菌株。
背景技術：
松材線蟲病是世界上最嚴重的林木病害。該病在日本、韓國、美國、加拿大、墨西哥等國都有發生，日本是松材線蟲病危害最嚴重的國家，幾乎造成了赤松林和黑松林的覆沒。我國自1982年在江蘇省首次發現松材線蟲病以來，疫區已擴大至14個省、(自治區、直轄市)192個縣級行政區，累計致死松樹5億多株，毀滅松林500多萬畝，造成經濟損失數千億元。我國對于松材線蟲病的研究盡管已經持續了幾十年，但到目前為止仍然沒有找到能應用與生產，切實有效控制病害發展的防治方法。目前世界上對 松材線蟲病的防治還沒有有效的方法。目前使用的防治方法主要有①冬季砍除病死株，以減少初侵染來源。該方法缺點是砍伐不徹底，年年砍年年有發生，②樹干注射殺線蟲劑，以保護珍貴松樹。該方法的缺點是使用繁瑣，對樹木傷害較大。③用寄生昆蟲寄生傳媒昆蟲天牛，該方法的缺點是寄生昆蟲的飼養繁瑣，效果也一般。④利用天牛引誘劑引誘天牛，該方法效果一般。總的來說，這些方法雖然有一定效果，但都不能徹底解決松材線蟲病問題。
發明內容
本發明的目的在于解決上述現有技術的不足，提供一種用于防治松材線蟲病的菌株，只要把菌株Smal-007噴灑到松林內，所述菌株就可快速替代我國松林內松材線蟲體表的強致病細菌，使松材線蟲失去致病能力，從而達到控制松材線蟲病流行的目的，本發明方法簡單易行，效果穩定。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案:—種用于防治松材線蟲病的菌株Smal-007,所述菌株的分類命名為:嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),保藏編號為CGMCC N0.6990,保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏單位地址為:北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，保藏日期為2012年12月13日。所述菌株為革蘭氏染色陰性細菌，經16rDNA序列測定，菌株Smal-007為嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),菌株的 16s rDNA喊基序列如 SEQ ID No:l 所示所述菌株能附著在松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)體表,能替代松材線蟲體表的其他強致病細菌。所述菌株產生的毒素對馬尾松，黑松，濕地松等毒性較小，不能導致大多數松樹死亡；對紫外線有一定的抵抗能力，可在松林內長期生存。經安全性測定，所述菌株對環境和其他生物沒有任何影響。菌株可用液體深層發酵培養，發酵通氣量15L/m,攪拌轉速200r/min，發酵溫度為30°C，發酵時間36h，初始pH值7.0。最適的發酵培養基配方(g/ml)葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏復合物3%。發酵完成后培養液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體劑型。本發明的優點是:菌株Smal-007是用于防治松材線蟲病(Pine wild disease)的生防細菌。松材線蟲病是世界林木頭號病害，可引起松林成片枯萎死亡，但目前還沒有很好的防治方法。如果把菌株Smal-007噴灑到松林內，就可在松林內長期生存，并逐漸替代松材線蟲體表致病細菌,使松材線蟲失去致病性,從而能以微生物之間的“競爭”達到徹底防治松材線蟲病的目的菌株Smal-007 的 16s rDNA 序列如 SEQ ID No:1 所示。
具體實施方式
:實施例1:1.配制培養基:葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨酵母膏復合物3% (g/ml)。2.發酵培養:將菌株Smal-007加入培養基中，液體深層發酵培養，發酵通氣量15L/m,攪拌轉速200r/min，初始pH值7.0，發酵溫度為30°C，發酵時間36h，菌液OD值14。3.菌劑分裝運輸:菌劑用塑料包裝桶或包裝瓶分裝，運輸中菌劑溫度不應超過35。。。4.菌劑林間噴灑:(1)飛機噴灑:原菌液噴霧，每畝噴霧400克。每架次載藥量200千克，噴灑500畝。(2)機動噴霧器噴霧:原菌液噴霧，每畝噴霧500-1000克。重點噴灑枯死木松樹樹干及枯死木附近松樹樹干及梢頭。
權利要求
1.一種用于防治松材線蟲病的細菌菌株，其特征在于，所述菌株的保藏編號為CGMCCN0.6990。
2.如權利要求1所述的菌株在防治松材線蟲病中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，包括以下具體步驟:(1)配制培養基:葡萄糖2%(g/ml)，蔗糖2% (g/ml)，蛋白胨酵母膏復合物3% (g/ml), (2)液體深層發酵培養:將所述菌株加入所述培養基中，發酵通氣量15L/m，攪拌轉速200r/min,初始pH值7.0，發酵溫度為30°C，發酵時間36h，測得菌液OD值為14， (3)將發酵后的菌液噴灑于林間。
4.如權利要求3所述的應用，其中，所述噴灑方法為:飛機噴灑和機動噴霧器噴霧。
5.如權利要求4所述的應用，其中噴灑的地方為:枯死木松樹樹干、枯死木附近松樹樹干和梢頭。
6.如權利要求4所述的應用，其中所述飛機噴灑的方法具體為:采用菌液噴霧，每畝噴 霧400克。
7.如權利要求4所述的應用，其中所述機動噴霧器噴霧的方法具體為:采用菌液噴霧，每畝噴霧500-1000克。
全文摘要
本發明涉及一種用于防治松材線蟲病的細菌菌株Smal-007及其應用，所述菌株為嗜麥芽寡養單胞菌，保藏編號為CGMCC No.6990。菌株的16s rDNA堿基序列如SEQ ID No1所示。本發明還涉及該菌株的發酵培養和林間應用，具體步驟包括(1)發酵培養基配方；(2)發酵方法(包括發酵參數和技術)；(3)菌劑分裝和運輸技術；(4)菌劑林間噴灑技術(林間防治技術)。
文檔編號A01N63/02GK103205385SQ20131013904
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月22日 優先權日2013年4月22日
發明者韓正敏, 曾腓力, 賁愛玲, 劉侃誠, 孫京天, 糜文琪 申請人:南京林業大學