快速測定煙草種子生活力的方法
【專利摘要】快速測定煙草種子生活力的方法，該方法是將固定數量的煙草種子固定在食用面粉制成的面塊平面上，采用冷凍切片機成批將種子切開，用水洗出切開后的種子后，置于0.01%~0.1%碘硝基四唑紫溶液中，在黑暗環境中染色2~5小時后，在體視顯微鏡下觀察鑒定，胚和胚乳全部染成紅色的種子占檢測種子總數的百分率即為煙草種子生活力。本發明將煙草種子生活力的測定時間由68~70小時大幅縮短至2.2~5.2小時，檢測速度快、結果準確可靠，并且剖切種子的方法勞動強度低，工作效率高，大大縮短工作時間。本發明應用前景良好。
【專利說明】快速測定煙草種子生活力的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于農作物的種子檢測【技術領域】，涉及一種快速測定煙草種子生活力的方法。
【背景技術】
[0002]種子生活力是指種子潛在的發芽能力或是種胚所具有的生命力，是預期具有長成正常幼苗的潛在能力，通常用一批種子中具有生命力的種子數占種子總數的百分率表示。種子生活力測定在作物育種、種子生產、種子加工、種子收購、種子貯藏、種子調運等工作中具有重要意義。
[0003]常用的種子生活力檢測方法是TTC法，TTC為2，3，5_三苯基氯化四氮唑的英文縮寫。2003年，國際種子檢驗協會詳細制定了種子活力TTC測定標準方法，該方法是采用TTC對種子內部活組織進行染色，通過鑒定染色情況判斷種子生活力，該方法一般包括種子預濕處理、種子縱切、種子染色及鑒定4個步驟。目前，該方法是《國際種子檢驗規程》中用于測定發芽緩慢或休眠種子的生活力、快速判斷種子潛在發芽能力的一種有效方法，具有經濟、準確等特點，應用范圍廣泛。
[0004]采用TTC法測定煙草種子生活力有以下兩個方面的限制因素:一方面，采用TTC對煙草種子染色全過程約需70小時，難以滿足煙草種子生活力快速測定的需要；另一方面，由于煙草種子極小，千粒僅重7(T80 mg,染色前需在體視顯微鏡下將種子逐粒切開，勞動強度大、工作時間長，且極易造成視覺疲勞和誤操作。
[0005]碘硝基四唑紫，化學名:2_ (4-碘苯基)-3_ (4-硝基苯基)-5_苯基氯化四唑，英文縮寫INT，分子式=C19H13N5O2ICL是一種新型的人工受氫體，被廣泛用于土壤活性分析、水體微生物活性分析、乳酸脫氫酶活性分析、脯氨酸脫氫酶分析等領域。
【發明內容】
[0006]針對現有技術中，采用TTC法檢測煙草種子的生活力，存在染色時間慢長、煙草種子切開難度大的問題，本發明提供一種快速測定煙草種子生活力的方法，該方法采用碘硝基四唑紫對切開的煙草種子染色，具體做法是:隨機取同一批次固定數量的煙草種子，將種子切開，每粒種子取其中的一半放入濃度為0.01%-0.1%的碘硝基四唑紫溶液中，在黑暗條件下浸泡染色2飛小時，取出后，在體視顯微鏡下進行觀察鑒定，胚和胚乳全部染成紅色的種子為有生活力的種子，染色異常或不染色的為無生活力的種子，有生活力的種子占檢測種子總數的百分率即為該批次煙草種子生活力。
[0007]上述方法中，將種子切開的方法是將煙草種子單層、均勻固定在食用面粉制成的面塊平面上進行平行剖切，將種子成批切開，具體包括以下步驟:
(I)將5 g可溶性淀粉與5 g普通面粉混合均勻，加入少許水攪拌成均勻團狀，將面團在桌面用平板壓成厚度為0.3cm的塊狀，用刀片將面塊切成與冷凍切片機冷臺支架表面大小一致的面塊；(2)隨機選取同一批次固定數量煙草種子，單層、均勻鋪撒于面塊表面上，用平板把種子完全壓入面塊；
(3)將面塊底面貼在冷凍切片機冷臺的支架上，將冷臺溫度設置為_15°C進行冷凍，當種子表面出現白霜后，操作冷凍切片機，從與面塊平面平行方向將面塊上的種子整體切開，清除從面塊上切落的部分，保留粘在面塊上的半粒種子，關閉冷卻裝置； (4)待面塊解凍后從冷臺上取下，放入盛有IOOml水的燒杯中，輕輕攪拌使面塊充分溶解，用紗布過濾，得到切開后的種子，這些種子在染色工作中備用。
[0008]上述采用碘硝基四唑紫對切開的煙草種子染色并檢測煙草種子生活力的新方法，我們稱之為INT法。
[0009]相對于現有技術本發明具有如下優點:
(I)TTC法測定煙草種子生活力，種子預濕處理一般需24 h，染色時間一般42~44 h。本發明采用INT對煙草種子進行染色，反應速度快，可省略種子預濕處理，染色時間縮短至2^5 h，大大縮短了種子生活力測定時間。
[0010](2)將待測種子固定在面塊平面上，可實現一次性成批切開，切開時間由2 h大幅減少至0.2 h，大大降低了勞動強度。
[0011](3)本發明簡化了種子生活力測定程序，檢測結果準確可靠，具有良好的應用前
旦
-5^ O
【具體實施方式】
[0012]實施例1
將5 g可溶性淀粉與5 g普通面粉混合均勻，加入少許水攪拌成均勻團狀；將面團放在桌面上，用平板壓成厚度為0.3cm的塊狀，然后用刀片切成與冷凍切片機冷臺支架表面大小一致的面塊；隨機選取同批次的500粒煙草種子，單層、均勻鋪撒于面塊表面上，用平板把種子完全壓入面塊；將面塊底面貼在冷凍切片機冷臺的支架上，將冷臺溫度設置為_15°C進行冷凍；當種子表面出現白霜后，操作冷凍切片機，從平行面塊平面的方向將面塊上的種子整體切開，清除從面塊上切落的部分，保留粘在面塊上的半粒種子，關閉冷卻裝置；待面塊解凍后從冷臺上取下，放入盛有IOOml水的燒杯中，輕輕攪拌使面塊充分溶解，用紗布過濾得到切開后的種子。
[0013]每次從切開的種子中數出100粒進行實驗，將100粒切開的種子放入盛有濃度為
0.1%的INT溶液的小燒杯中，在黑暗條件下染色2 h ;將種子取出在體視顯微鏡下進行觀察鑒定，胚和胚乳全部染成紅色的種子為有生命力的種子，胚或胚乳染色異常或不染色的種子為無生命力種子。
[0014]以100粒切開的種子為固定數，重復上述染色實驗4次，檢測每一次種子的生活力，統計4次重復試驗的平均值，求得該批次煙草種子生活力。
[0015]實施例2
重復實施例1，有以下不同:將碘硝基四唑紫，簡稱INT，濃度設為0.03%，染色時間為4
h0
[0016]實施例3
重復實施例1，有以下不同:將碘硝基四唑紫，簡稱INT，濃度設為0.01%，染色時間為5h0
[0017]應用實施例1
以MS云煙87種子為試驗材料，按照實施例1進行測定。
[0018]應用實施例2
以MS云煙87種子為試驗材料，按照實施例2進行測定。
[0019]應用實施例3
以MS云煙87種子為試驗材料，按照實施例3進行測定。
[0020]應用實施例4
以云煙97種子為試驗材料，按照實施例1進行測定。
[0021]應用實施例5
以云煙97種子為試驗材料，按照實施例2進行測定。
[0022]應用實施例6
以云煙97種子為試驗材料，按照實施例3進行測定。
[0023]為進一步驗證本發明的技術效果，設置如下2個對照: 對照I
按國際種子檢驗協會描述的四唑測定法，簡稱TTC法，將400粒MS云煙87種子預濕(浸種)24 h后，在顯微鏡下用解剖刀將種子從中間逐粒縱切。然后將切開后種子置于含有
0.1% TTC溶液的小燒杯中于黑暗條件下進行，染色后每隔Ih觀察一次，凡是胚和胚乳全部染成紅色的種子為有生命力種子，凡是胚或胚乳染色異常或完全不染色的種子為無生命力種子，具有生命力的種子數占種子總數的百分率即為種子的生活力。
[0024]4次重復，每重復隨機取100粒種子計算生活力。
[0025]對照2
重復對照1，有以下不同:試驗材料為云煙97種子。
[0026]
應用實施例廣6、對照廣2的試驗結果見表1、表2。
[0027]表1 MS云煙87種子不同生活力測定方法的染色時間及效果比較
【權利要求】
1.快速測定煙草種子生活力的方法，其特征在于:該方法采用碘硝基四唑紫對切開的煙草種子染色；具體方法是:隨機取同一批次固定數量的煙草種子，將種子切開，每粒種子取其中的一半放入濃度為0.01%~0.1%碘硝基四唑紫溶液中，在黑暗條件下浸泡染色2飛小時，取出后，在體視顯微鏡下進行觀察鑒定，胚和胚乳全部染成紅色的種子為有生活力的種子，染色異常或不染色的為無生活力種子，有生活力的種子占檢測種子總數的百分率即為該批次煙草種子生活力。
2.根據權利要求1所述的快速測定煙草種子生活力的方法，其特征還在于:將種子切開的方法是將煙草種子固定在食用面粉制成的面塊平面上進行平行剖切，將種子成批切開，具體包括以下步驟: (1)將5g可溶性淀粉與5 g普通面粉混合均勻，加入少許水攪拌成均勻團狀，將面團在桌面用平板壓成厚度為0.3cm的塊狀，用刀片將面塊切成與冷凍切片機冷臺支架表面大小一致的面塊； (2)隨機選取同一批次固定數量煙草種子，單層、均勻鋪撒于面塊表面上，用平板把種子完全壓入面塊； (3)將面塊底面貼在冷凍切片機冷臺的支架上，將冷臺溫度設置為_15°C進行冷凍，當種子表面出現白霜后，操作冷凍切片機，從與面塊平面平行方向將面塊上的種子整體切開，清除從面塊上切落的部分，保留粘在面塊上的半粒種子，關閉冷卻裝置； (4)待面塊解凍后從冷臺上取下，放入盛有IOOml水的燒杯中，輕輕攪拌使面塊充分溶解，用紗布過濾得到切開后的種子，這些種子在染色工作中備用。
【文檔編號】A01C1/02GK103460852SQ201310431636
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月22日 優先權日:2013年9月22日
【發明者】崔華威, 牛永志, 馬文廣, 陳云松, 陳連紅 申請人:玉溪中煙種子有限責任公司, 云南省煙草農業科學研究院