培育飛禽冬蟲草的工藝的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于：包括以下步驟；一、培育菌種，（1）采集野生蟲草菌株，經有性繁殖、復壯、馴化、出草，獲得冬蟲草純菌種，儲存備用；（2）培育瓊脂母種；（3）培育液體菌種；二、選擇飛禽卵作為寄主，并對飛禽卵進行消毒處理；三、接種；四、培養，包括（1）染菌期培養；（2）轉色期培養；（3）出草期培養，該過程分為前期培養、中期培養、后期培養三個階段進行。培養結束，完成飛禽冬蟲草一個生長周期的培養時間為100天左右。該培育工藝操作簡單，適于規模化生產，且培育出的冬蟲草有效成分不低于自然生長的冬蟲夏草，口感好，可作為菜肴直接食用。
【專利說明】培育飛禽冬蟲草的工藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及用具有繁殖功能與食用標準的高蛋白飛禽卵培植冬蟲草的工藝，屬于人工用蟲草菌感染飛禽卵培育冬蟲草的生物工程【技術領域】。
【背景技術】
[0002]冬蟲夏草是一種傳統的名貴滋補中藥材，屬于真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬。藥理學現代研究結果中，冬蟲夏草含有蟲草酸約7%，碳水化合物28.9%，脂肪約8.4%，蛋白質約25%，脂肪中82.2%為不飽和脂肪酸，此外，尚含有維生素B12、麥角脂醇、六碳糖醇、生物堿等，有調節免疫系統功能、抗腫瘤、抗疲勞等多種功效。
[0003]冬蟲夏草在過去多為野生，隨著現代社會對冬蟲夏草需求的增多，野生冬蟲夏草已遠遠不能滿足人們的需要，人工培育冬蟲夏草技術孕育而生。
[0004]截止目前，國內外人工培育冬蟲草的技術主要為以下幾種:
[0005]一、采用生物發酵工程培育蟲草菌絲體:
[0006]1.采用深層發酵工程培育蟲草菌絲體；
[0007]2.采用固體發酵工程培育蟲草菌絲體；
[0008]二、米用人工合成的 混合培養基培育蟲草子實體；
[0009]三、采用干燥蠶蛹培育蟲草子實體；
[0010]四、采用活體蟲蛹培育蟲草復合體。該技術尚不成熟，無法實施規模化生
[0011]產，可操作性不強。
[0012]五、采用煮熟的家禽蛋培育蟲草復合體。經實驗得知，用這種技術培育蟲草，需要將煮熟的家禽蛋外殼剝去，再進行接種，工藝流程復雜，技術含量高，無法實施規模化生產，且生產出的冬蟲草口感差，不易作為菜肴直接食用。
[0013]以上幾種技術培育的蟲草菌絲體、蟲草子實體、“蛹” “草”復合體、“蛋” “草”復合體等均存在以下不足之處:
[0014]1.由于口感差，因此只能作為生產加工藥品與保健品的原材料，不能直接作為菜肴食用。
[0015]2.蟲草本身賣相差，商品價值低。
[0016]3.生產成本高，技術含量高(生產蟲草菌絲體、蟲草子實體除外)，有效成分與自然生長的冬蟲夏草相比其含量低。
[0017]因此，培育既能作為生產加工藥品與保健品的上承原料，又能作為上乘菜品直接推上餐桌的特殊蟲草，使人們在追求健康的同時又能享受到美味佳肴，
【發明內容】
[0018]本發明的目的是提供一種培育飛禽冬蟲草的工藝，解決現有技術問題，通過該工藝培育的冬蟲草，不但口感好，可以直接作為菜肴食用，且培育工藝簡單，易操作，方便實施規模化生產，且培育出的冬蟲草有效成分與自然生長的冬蟲夏草有效成分含量相當。[0019]本發明解決問題采用的技術方案是:
[0020]培育飛禽冬蟲草的工藝，包括以下步 驟
[0021]一、培育液體菌種
[0022](I)采集野生蟲草菌株，用有性繁殖技術取孢獲得蟲草母本菌種，再用健壯細胞繁殖技術復壯蟲草母本菌種，然后經過多次馴化繁殖培養，出草實驗，最終獲得冬蟲草母本種，儲存備用。
[0023](2)培育再生母種
[0024]用常規方法將冬蟲草母本種接于瓊脂培養基上，18°C -20°C恒溫培養8-10天，菌絲布滿培養基表面并呈金黃色即成瓊脂母種。
[0025](3)培育液體菌種
[0026]將瓊脂母種接入液體培養基中，180C _20°C恒溫靜止培養72小時，通氧培養48小時，微小顆粒狀菌球充滿液體培養基停止通氧，經檢驗提純后即成生產飛禽冬蟲草液體菌種，儲存備用。
[0027]二、選擇具有繁殖功能、符合使用標準的飛禽卵作為飛禽冬蟲草孢子的寄主；并對飛禽卵進行消毒處理，消毒方法包括紫外線殺菌30分鐘或75%酒精殺菌3分鐘。
[0028]三、接種
[0029]在無菌環境、無菌條件下，將飛禽卵頂端用鈍器擊破，將液體菌種用點接方式接于擊破面上，其中每10克飛禽卵接種液體菌種0.8ml。
[0030]四、培養
[0031](I)染菌期培養
[0032]在暗光條件下，溫度保持在18°C，濕度保持在50%_55%，早晚各通風10分鐘，培養60-62天，接種處布滿由白色轉為金黃色的蟲草菌絲，飛禽卵發生質的變化，形成飛禽冬蟲草菌核；
[0033](2)轉色期培養
[0034]在200勒克斯光線照射下，溫度保持在18°C -19°C，濕度保持在65%_70%，早晚各通風20-25分鐘，培養10-15天，金黃色菌絲轉呈橘紅色，上面出現圓球狀凸起物，轉色期培養管理階段結束。采用200勒克斯光照目的是加快轉色期的培養，若采用自然光照射，轉色期的培養時間為16-20天。
[0035](3)出草期培養
[0036]出草期培養分為前期培養、中期培養、后期培養三個階段進行:
[0037]前期培養
[0038]在自然光照下，溫度保持在18°C -19°C，濕度保持在70%_75%，早晚各通風30分鐘，培養8-12天，子座長到1.5-2cm,前期培養結束；
[0039]中期培養
[0040]在自然光照下，溫度保持在18°C -20°C，濕度保持在75%_80%，早晚各通風35_40分鐘，培養8-12天，子座長到3-4cm，中期培養結束；
[0041]后期培養
[0042]在自然光照下，溫度保持在18°C _20°C，濕度保持在85%，早晚各通風50_60分鐘，培養8-12天，子座長到5cm以上，子座頂端呈橢圓形，表面出現金黃色粉末狀物，表明飛禽冬蟲草成熟,后期培養結束。
[0043]瓊脂培養基各組分的重量份數比為:蔗糖:瓊脂:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:氯化鉀:硫酸鐵:硝酸鈉:天門冬酰胺:蒸餾水=28-30:15-18:1:0.3:0.5:0.01:0.5:1:1000o
[0044]液體培養基中各組分重量份數比為:葡萄糖:黃豆粉:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:谷氨酸鈉:氯化鈉=VB1:水=20:10:3:0.4:0.1:0.3:0.05:1000o
[0045]所述飛禽卵優選鴿子卵、鵪鶉卵。
[0046]飛禽卵頂端被擊破的表面積約I平方毫米。由于擊破面過大會影響飛禽冬蟲草的外觀，過小則不易感染蟲草菌，因此，需要適當控制擊破面，以保證感染率及產品的外觀，經試驗，選擇I平方毫米的擊破面可實現該目標。
[0047]本發明的有益效果:本發明中采用生飛禽卵，且直接將液體菌種用點接方式接于飛禽卵的擊破面上，操作方便，適于規模化生產。同時，培育出的冬蟲草口感好，具有很高的食用價值，可以直接作為菜肴食用，而且有效成分的含量不低于自然生長的冬蟲夏草。
【具體實施方式】
[0048]實施例1
[0049]培育飛禽冬蟲草的工藝，包括以下步驟
[0050]一、培育液體菌種
[0051](I)采集野生蟲草菌株，用有性繁殖技術取孢獲得蟲草母本菌種，再用健壯細胞繁殖技術復壯蟲草母本菌種，然后經過多次馴化繁殖培養，出草實驗，最終獲得冬蟲草母本種，儲存備用。本發明人與·2001年9月前往東北長白山采集野生蟲草菌株，經檢驗，確定此菌株為擬青霉蟲草菌株，制成母本種遺傳至今。
[0052](2)培育再生母種
[0053]瓊脂培養基配方:
[0054]蔗糖30g、瓊脂15g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂0.3g、氯化鉀0.5g、硫酸鐵0.01g、硝酸鈉0.5g、天冬門酰胺lg、蒸餾水1000ml、PH值自然。
[0055]該瓊脂培養基為常規瓊脂培養基，其瓊脂培養基的配方可以根據實際情況進行調整，瓊脂培養基的制備方法為現有技術的常規方法。一般的，瓊脂培養基各組分的重量份數比為:蔗糖:瓊脂:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:氯化鉀:硫酸鐵:硝酸鈉:天門冬酰胺:蒸餾水=28-30:15-18:1:0.3:0.5:0.01:0.5:1:1000o
[0056]按照以上配方將各種組分溶于蒸餾水中，水沸后文火保留10-15分鐘，趁熱裝入試管，然后用棉花封口，滅菌，并趁熱擺斜面，冷卻凝固后接種，置18°C -20°C暗光培養8-10天，當菌絲發滿斜面培養基表面并呈金黃色即成再生母種。
[0057](3)培育液體菌種
[0058]液體培養基配方:
[0059]葡萄糖20g、黃豆粉10g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂0.4g、味精0.lg、食鹽0.3g、VB10.05g、水 1000ml, PH 值自然。
[0060]用常規法制作液體菌種培養液，在無菌環境、無菌條件下接入再生母種，置180C _20°C恒溫靜止培養72小時，通氧培養48小時，當微小顆粒狀菌球充滿液基后停止通氧，經檢驗、分析、提純后即成生產飛禽冬蟲草液體菌種，儲存備用。[0061]二、選擇鴿子卵作為飛禽冬蟲草孢子的寄主，并對鴿子卵進行消毒處理。本實施例中的消毒方法采用紫外線殺菌30分鐘，實際上還可以采用75%酒精殺菌3分鐘。同時，本實施例中的鴿子卵實際上還可以用鵪鶉卵來代替。鴿子卵和鵪鶉卵是實際操作中優選的飛禽卵。
[0062]三、接種
[0063]在無菌環境、無菌條件下，將飛禽卵頂端用鈍器擊破，飛禽卵頂端被擊破的表面積約I平方毫米。將液體菌種用點接方式接于擊破面上，即將液體菌種接于飛禽卵的蛋液上，其中每10克飛禽卵接種液體菌種0.8ml。接種時，用無菌藥棉蘸液體菌種點接于擊破面上即可。
[0064]飛禽卵首選鵪鶉卵或鴿子卵。實際生產中，一枚鵪鶉卵或鴿子卵大約重0.9—Hg,用無菌藥棉蘸液體菌種點接于擊破面上即可,所接液體菌種大約為0.7—0.9ml。
[0065]四、培養
[0066](1)染菌期培養
[0067]在暗光條件下，溫度保持在18°C，濕度保持在50%，早晚各通風10分鐘，培養60天，接種處布滿由白色轉為金黃色的蟲草菌絲，飛禽卵發生質的變化，形成飛禽冬蟲草菌核。
[0068](2)轉色期培養
[0069]在200勒克斯光線照射下，溫度保持在18°C，濕度保持在65%，早晚各通風20分鐘，培養10天，金黃色菌絲轉呈橘紅色，上面出現圓球狀凸起物，轉色期培養管理階段結束。采用200勒克斯光線照射的目的是加快轉色期的培養，如采用自然光進行照射，則轉色期培養需要16-20天。
[0070](3)出草期培養
[0071]出草期培養分為前期培養、中期培養、后期培養三個階段進行:
[0072]前期培養
[0073]在自然光照下，溫度保持在18°C，濕度保持在75%，早晚各通風30分鐘，培養12天，子座長到2cm，前期培養結束。
[0074]中期培養
[0075]在自然光照下，溫度保持在20°C，濕度保持在75%_80%，早晚各通風35_40分鐘，培養12天，子座長到3.5cm,中期培養結束。
[0076]后期培養
[0077]在自然光照下，溫度保持在19°C，濕度保持在85%，早晚各通風50分鐘，培養10天，子座長到5cm以上，子座頂端呈橢圓形，表面出現金黃色粉末狀物，表明飛禽冬蟲草成熟，后期培養結束。
[0078]完成飛禽冬蟲草一個生長周期的培養時間為100天左右。
[0079]在實施飛禽冬蟲草栽培實驗中， 申請人:每次都選擇10組具有繁殖功能、符合食用標準的飛禽卵作為飛禽冬蟲草蟲草菌的寄主，每組10個，共100個，其中5組為鵪鶉卵50個，5組為鴿子卵50個。接種后60天左右形成菌核，10天左右完成轉色期培養，轉色期后再培養30天左右成熟，成功率為95%以上。
[0080]下述各實施例除步驟四培養過程中具體環境條件有所不同，其他培養過程與實施例I中相同。[0081]實施例2
[0082](I)染菌期培養
[0083]暗光條件，溫度18°C，濕度55%，早晚各通風10分鐘，培養62天。
[0084](2)轉色期培養
[0085]200勒克斯光線照射，溫度19°C，濕度70%，早晚各通風25分鐘，培養15天。
[0086](3)出草期培養
[0087]前期培養
[0088]自然光照，溫度19°C，濕度75%，早晚各通風30分鐘，培養8天，子座長到2cm，前期培養結束。
[0089]中期培養
[0090]自然光照，溫度20°C，濕度80%，早晚各通風40分鐘，培養10天，子座長到4cm，中期培養結束。
[0091]后期培養
[0092]自然光照，溫度20°C，濕度85%，早晚各通風60分鐘，培養9天，子座長到5cm以上。
[0093]實施例3
[0094](I)染菌期培養
[0095]暗光條件，溫度19°C，濕度53%，早晚各通風10分鐘，培養62天。
[0096](2)轉色期培養
[0097]200勒克斯光線照射，溫度19°C，濕度67%，早晚各通風20分鐘，培養13天。
[0098](3)出草期培養
[0099]前期培養
[0100]自然光照，溫度18°C，濕度73%，早晚各通風30分鐘，培養9天，子座長到1.5cm,前期培養結束。
[0101]中期培養
[0102]自然光照，溫度18°C，濕度78%，早晚各通風28分鐘，培養10天，子座長到3cm，中期培養結束。
[0103]后期培養
[0104]自然光照，溫度20°C，濕度85%，早晚各通風55分鐘，培養12天，子座長到5cm以上。
[0105]與采用煮熟的家禽蛋培育蟲草復合體的現有技術相比，本發明創造方法具有以下特點:
[0106]1.用煮熟的家禽蛋培育冬蟲草的技術其用于感染蟲草菌的寄主為已失去繁殖功能的，經過破殼煮熟、高溫滅菌的禽蛋，其操作過程復雜，不能進行規模化生產。而本發明人的技術用于感染蟲草菌的寄主為具有繁殖功能的、沒有經過高溫滅菌的飛禽卵，操作上更加方便，可以進行規模化生產。
[0107]2.用煮熟的家禽蛋培育出的蟲草，口感差，無法用于餐飲界作為菜品推上餐桌，即便是推上餐桌實屬牽強。本發明技術培育的“卵” “草”復合體在酒店做實驗，很快便得到了廣大消費者的普遍認可，確實是人類餐桌上一道絕無僅有的美味佳肴。[0108]3.用煮熟的家禽蛋所培育的蟲草，其各種有效成分的含量與天然蟲草相差甚遠，采用本發明技術培育的“卵” “草”復合體，醫用價值、保健價值與天然蟲草相同，各種有效成分的含量可與天然蟲草匹敵。
[0109]利用本發明技術培育出的飛禽冬蟲草，子座色澤金黃鮮亮，菌核形態保持原飛禽卵的形狀和色澤，感觀極佳。經檢測，所含各種有效成分可以與天然冬蟲夏草匹敵，更高于其他人工培養的蟲草菌絲體、蟲草子實體及蟲草復合體。這種蟲草不但是生產加工藥品、保健品的上乘原料和人類 餐桌上的一道美味佳肴，更是禮品市場上大的一款絕無僅有的精
品ο
【權利要求】
1.培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于:包括以下步驟 一、培育液體菌種 (1)采集野生蟲草菌株，用有性繁殖技術取孢獲得蟲草母本菌種，再用健壯細胞繁殖技術復壯蟲草母本菌種，然后經過多次馴化繁殖培養，出草實驗，最終獲得冬蟲草母本種，儲存備用； (2)培育再生母種 用常規方法將冬蟲草母本種接于瓊脂培養基上，18°C -20°C恒溫培養8-10天，菌絲布滿培養基表面并呈金黃色即成再生母種； (3)培育液體菌種 將再生母種接入液體培養基中，18°C _20°C恒溫靜止培養72小時，通氧培養48小時，微小顆粒狀菌球充滿液體培養基停止通氧，經檢驗提純后即成生產液體菌種，儲存備用； 二、選擇具有繁殖功能、符合使用標準的飛禽卵作為飛禽冬蟲草孢子的寄主；并對飛禽卵進行消毒處理，消毒方法包括紫外線殺菌30分鐘或75%酒精殺菌3分鐘； 三、接種 在無菌環境、無菌條件下，將飛禽卵頂端用鈍器擊破，將液體菌種用點接方式接于擊破面上，其中每10克飛禽卵接種液體菌種0.8ml ； 四、培養 (1)染菌期培養· 在暗光條件下，溫度保持在18°C，濕度保持在50%-55%，早晚各通風10分鐘，培養60-62天，接種處布滿由白色轉為金黃色的蟲草菌絲，飛禽卵發生質的變化，形成飛禽冬蟲草菌核； (2)轉色期培養 在200勒克斯光線照射下，溫度保持在18°C _19°C，濕度保持在65%-70%，早晚各通風20-25分鐘，培養10-15天，金黃色菌絲轉呈橘紅色，上面出現圓球狀凸起物，轉色期培養管理階段結束； (3)出草期培養 出草期培養分為前期培養、中期培養、后期培養三個階段進行: 前期培養 在自然光照下，溫度保持在18°C -19°C，濕度保持在70%-75%，早晚各通風30分鐘，培養8-12天，子座長到1.5-2cm,前期培養結束； 中期培養 在自然光照下，溫度保持在18°C -20°C，濕度保持在75%-80%，早晚各通風35-40分鐘，培養8-12天，子座長到3-4cm，中期培養結束； 后期培養 在自然光照下，溫度保持在18°C -20°C，濕度保持在85%，早晚各通風50-60分鐘，培養8-12天，子座長到5cm以上，子座頂端呈橢圓形，表面出現金黃色粉末狀物，表明飛禽冬蟲草成熟，后期培養結束。
2.如權利要求1中所述的培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于:瓊脂培養基各組分的重量份數比為:蔗糖:瓊脂:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:氯化鉀:硫酸鐵:硝酸鈉:天門冬酰胺:蒸懼水=28-30:15-18:1:0.3:0.5:0.01:0.5:1:1000o
3.如權利要求1中所述的培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于:液體培養基中各組分重量份數比為:葡萄糖:黃豆粉:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:谷氨酸鈉:氯化鈉:VB1:水=20:10:3:0.4:0.1:0.3:0.05 =10000
4.如權利要求1中所述的培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于:所述飛禽卵優選鴿子卵、鵪鶉卵。
5.如權利要求1中所述的培育飛禽冬蟲草的工藝，其特征在于:飛禽卵頂端被擊破的表面積約I平方毫米。
【文檔編號】A01G1/04GK103563650SQ201310489023
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年10月17日 優先權日:2013年10月17日
【發明者】李金剛, 張群喜, 李春生 申請人:煙臺金剛生源生物科技有限公司