一種非洲菊種質資源的保存方法
【專利摘要】本發明公開一種非洲菊種質資源的保存方法，該方法包括選擇舌狀花剛開放至管狀花已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm～6cm，經處理后的外植體通過誘導培養，兩個不同配方的繼代培養基連續繼代培養，大棚內生根培養后，育苗袋培養及棚內栽種1年。一個保存周期可保存非洲菊種質資源達3～4年，種質資源材料的田間成活率達90％以上。該方法通過兩種不同的繼代培養基的依次繼代培養和棚內復壯兩個環節保存非洲菊種源，降低了激素因素、栽培環境等原因造成的種苗變異和品質退化問題，穩定地保存了非洲菊品質資源的優良性狀，是一種新的、有效的非洲菊種質資源保存方法。
【專利說明】一種非洲菊種質資源的保存方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種非洲菊種質資源的保存方法，屬于生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 非洲菊（Gerbera jamesonil Bolus)又名扶郎花，菊科大丁草屬多年生宿根常綠 草本花卉。因其花朵碩大，花色豐富，姿態各異，裝飾性強，耐長途運輸，深受廣大消費 者青睞。在適宜條件下可周年生產，周年開花，全年可為市場供應鮮切花，為世界五大切花 之一。我國自上世紀90年代以來曾大量從荷蘭引種栽培，經多年試驗，由于氣候條件、栽 培技術的限制，普遍出現品質退化現象，優良種性嚴重退化甚至喪失，失去了栽培利用價 值，不得不從生產中逐步淘汰。非洲菊品種退化通常表現為花朵變小、過渡色多、花型紊 舌U雙桿現象、株高參差不齊、生活力下降、抗性和產量降低等。
[0003] 造成非洲菊品種退化的原因主要是：栽培環境如光照、水分、溫度、營養不適宜非 洲菊生長發育，土壤板結和鹽漬化、連作土地的病原菌大量積累并復合浸染等，導致品種失 去原有的典型性；在非洲菊組織培養過程中，培養溫度、增殖芽的繼代代數以及激素濃度 等因素造成非洲菊種苗發生無性變異。所謂種質，是指決定生物體遺傳性狀并將遺傳信息 從親代傳給后代的遺傳物質，種質資源的調查、收集、保存和評價是科學開發利用植物的基 礎，對最大限度地發揮種質資源利用潛力具有決定性的作用。
[0004] 目前，非洲菊種質資源的保存大多以室內組培和田間栽培保存，組培方法主要以 幼蕾花托作為非洲菊組織培養的外植體，但幼蕾花托作為外植體存在表面消毒較難，消耗 試材量大，且花蕾的大小要求嚴格，過小容易死亡，過大易染率，材料選擇受時間限制，在田 間同一時間取材，達到要求的花蕾較少的問題；目前非洲菊組織培養保存的不足表現在繼 代培養周期較短，保種花費相對較大；棚內栽培保存的不足表現在占地面積多，光、溫、水及 病蟲害控制較難，多年栽培形成土壤板結、鹽漬化、病原菌大量積累，連作障礙導致品種失 去原有的典型性。因此一種適宜的非洲菊種質資源保存方法對非洲菊的產業發展具有重要 意義。
【發明內容】
[0005] 針對目前非洲菊種質資源的保存方面存在的缺陷或不足，本發明的提供一種非洲 菊種質資源保存方法，目的在于使其外植體取材方便、繼代周期加長、保存成本降低、變異 降低，能較好地穩定品種種性，滿足科學開發利用非洲菊種質資源的需要。
[0006] 本發明所提供的一種非洲菊種質資源的保存方法，其特征在于步驟如下：
[0007] (1)外植體材料的選擇和預處理
[0008] ①選擇無病蟲危害、種質與親本一致的非洲菊健壯植株，摘取舌狀花剛開放至管 狀花已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm?6cm，插入裝有5?15mg/L 6-BA水溶液中，放入 4°C的冰箱中低溫處理3?7天；
[0009] ②將步驟（1)①處理的材料先用洗衣粉水清洗，再用清水沖洗干凈后，在超凈 環境下，用刀片切除花梗與舌狀花邊緣，先放入質量百分濃度為0. 1 %的氯化汞溶液消毒 15min，再放入在質量百分濃度為2 %的次氯酸鈉溶液中加2滴吐溫20的混合液中消毒 lOmin，之后用無菌水沖洗3?4次，再用鑷子拔去花托上的所有舌狀花，用解剖刀切除花萼 邊緣及花托底部〇. 2?0. 3cm的厚度即為所需的非洲菊外植體；
[0010] ⑵誘導培養
[0011] 將（1)②所述的非洲菊外植體放入下列培養基中：
[0012] MS基本培養液
[0013]
【權利要求】
1. 一種非洲菊種質資源的保存方法，其特征在于步驟如下： (1) 外植體材料的選擇和預處理 ① 選擇無病蟲危害、種質與親本一致的非洲菊健壯植株，摘取舌狀花剛開放至管狀花 已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm?6cm，插入裝有5?15mg/L 6-BA水溶液中，放入4°C 的冰箱中低溫處理3?7天； ② 將步驟（1)①處理的材料先用洗衣粉水清洗，再用清水沖洗干凈后，在超凈環境下， 用刀片切除花梗與舌狀花邊緣，先放入質量百分濃度為〇. 1 %的氯化汞溶液消毒15min，再 放入在質量百分濃度為2%的次氯酸鈉溶液中加2滴吐溫20的混合液中消毒lOmin，之后 用無菌水沖洗3?4次，再用鑷子拔去花托上的所有舌狀花，用解剖刀切除花萼邊緣及花托 底部0. 2?0. 3cm的厚度即為所需的非洲菊外植體； (2) 誘導培養 將⑴②所述的非洲菊外植體放入下列培養基中： MS基本培養液
在光照強度為1500?20001x，溫度為25±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下，誘 導培養25?35d至外植體萌發分化出1?2cm高的幼芽，切下幼芽； (3) 第一次繼代培養 將步驟（2)切下的幼芽切成單株轉接到下列繼代培養基I中： MS改良培養液
所述MS改良培養液是：常規MS培養液中大量元素的濃度減半，鹽酸硫胺素濃度為 2mg/L，鹽酸吡哆醇濃度為lmg/L的培養液； 在光照強度為1500?20001x，溫度為18±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下培養 45 ?55d ; (4) 第二次繼代培養 將步驟（3)第一次繼代培養的幼芽切成單株轉接到下列繼代培養基II中： MS改良培養液
所述MS改良培養液與步驟（3)第一次繼代培養繼代培養基I中的MS改良培養液相 同； 在光照強度為1500?20001x，溫度為18±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下培養 60 ?70d ; (5) 將步驟（4)第二次繼代培養的幼芽切成單株再重復依次用（3)第一次繼代培養和 步驟（4)第二次繼代培養至2?3年； (6) 將步驟（5)的叢生芽2cm以上的健壯植株切成單株接種到下列生根培養基中進行 生根培養： 1/2MS基本培養液
所述的1/2MS基本培養液是：常規MS培養液中全量元素的濃度減半的培養液； 在組培瓶的瓶口包裹封口膜，移至蓋有遮光率為70 %遮陽網的大棚苗床上培養至植株 基部長出3?5條根，大棚的溫度控制為18°C -28°C ; (7) 將步驟￠)的生根植株取出，按常規洗凈苗上的培養基，放入質量百分濃度為 0. 1 %的多菌靈溶液中消毒1?2min后，移栽至裝有混合基質的育苗袋中，按常規進行澆 水、施肥管理，生長45d后，即得非洲菊移栽苗；所述混合基質為按腐植土：紅土：珍珠巖 的體積比為2 : 1 : 0.5配制而成； (8) 將步驟（7)獲得的移栽苗在棚內栽種1年。
【文檔編號】A01H4/00GK104145818SQ201410372883
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】單芹麗, 楊春梅, 李紳崇, 王繼華, 吳麗芳, 汪國鮮, 黎霞, 趙培飛, 吳旻 申請人:玉溪云星生物科技有限公司, 云南省農業科學院花卉研究所