一種吳茱萸的組培快速繁殖方法
【專利摘要】本發明公開了一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，包括無菌帶芽莖段的獲得、芽誘導培養、叢生芽增殖培養、生根培養、煉苗等步驟。采用本發明所提供的組培技術方法對吳茱萸進行組培微繁，解決了吳茱萸遺傳穩定性差，繁殖率低等技術難題，達到了增殖系數高，成活率高的要求，可以為吳茱萸的產業化生產提供一種周期短、繁殖率高的人工培育方法。
【專利說明】一種吳茱萸的組培快速繁殖方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，屬于生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 吳茱萸，蕓香科，別名吳萸、茶辣、漆辣子、臭辣子樹等，小 喬木或灌木，產秦嶺以南各地，但海南未見有自然分布，曾引進栽培，均生長不良。生于平地 至海拔1500米山地疏林或灌木叢中，多見于向陽坡地。各地有小或大量栽種。吳茱萸對土 壤要求不嚴，一般山坡地、平原、房前屋后、路旁均可種植。中性，微堿性或微酸性的土壤都 能生長，但作苗床時尤以土層深厚、較肥沃、排水良好的壤土或砂壤土為佳，低洼積水地不 宜種植。是一種藥用植物，治吞酸，蹶陰痰涎頭痛，陰毒腹痛，疝氣，血痢，喉舌口瘡，現代研 究表明對中樞神經系統，消化系統，心血管系統皆有很好的療效。常用的繁殖方式有根插繁 殖，枝插繁殖，分蘗繁殖，但繁殖效果不理想，現代組培技術應用于吳茱萸的繁殖尚無人研 究，利用組培技術可以提高繁殖效率，增加吳茱萸的利用率。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題是提供一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，由該方法所 制備得到的吳茱萸組培幼苗生長周期短，增殖系數高，生根率高，遺傳性狀穩定，病蟲害低， 可以規模化的進行產業化生產。
[0004] 本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的： 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進行芽誘導，誘導出來 的吳茱萸叢生芽轉接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 2mg/L+ABA2mg/L上進行叢生芽增殖培 養，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L營養液的基質中進行生根誘導， 誘導出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長情 況，統計生根率。
[0005] 采用本發明制備的吳茱萸組培幼苗生產周期短、繁殖率高，生根率92%。
[0006] 下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不 局限于下列實施方式。
【具體實施方式】 [0007] 實施例1 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進行芽誘導，誘導出來 的吳茱萸叢生芽轉接于改良DKW+TDZO. 2mg/L+NAA0. lmg/L+ABA2mg/L上進行叢生芽增殖培 養，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 05mg/L營養液的基質中進行生根誘導， 誘導出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長情 況，生根率88%。
[0008] 實施例2 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進行芽誘導，誘導出來 的吳茱萸叢生芽轉接于改良DKW+TDZO. 5mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上進行叢生芽增殖培 養，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. 2mg/L營養液的基質中進行生根誘導， 誘導出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長情 況，生根率89%。
[0009] 實施例3 取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉侵泡3分鐘，流水沖洗1.5小時，使 用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口，獲得的無菌的 帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/L+KT0. 3mg/L+0. 1%活性炭中進行芽誘導，誘導出來 的吳茱萸叢生芽轉接于改良DKW+TDZO. 3mg/L+NAA0. 3mg/L+ABA2mg/L上進行叢生芽增殖培 養，增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAAO. lmg/L營養液的基質中進行生根誘導， 誘導出來的吳茱萸試管苗栽植于沙壤土：珍珠巖=3 :2的基質中，沙壤土和珍珠巖使用高壓 滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添 加農家肥，濕度90%，溫度25°C，遮蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右，45天后觀察生長情 況，生根率90%。
【權利要求】
1. 一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其步驟如下： (1) 無菌帶芽莖段的獲得：采用常規的組織培養方法對吳茱萸帶芽的莖段進行消毒處 理； (2) 芽誘導培養：將步驟（1)獲得的無菌的帶芽莖段接種入改良DKW+IBAO. 15mg/ L+KTO. 3mg/L+0. 1%活性炭中進行芽誘導； (3) 叢生芽增殖培養：步驟（2)中誘導出來的吳茱萸叢生芽轉接于改良 DKW+TDZO. 2-0. 5mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L+ABA2mg/L 上進行叢生芽增殖培養； (4) 生根誘導：將步驟（3)增殖的叢生芽處理后接入含1/3改良DKW+NAA0. 05-0. 2mg/L 營養液的基質中進行生根誘導； (5) 煉苗：將生根后的試管苗栽植于含有基質的苗床上，一個月后統計成活率。
2. 根據權利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：吳茱萸帶芽 莖段的滅菌方法為取吳茱萸帶芽的莖段，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分鐘，流水沖 洗1. 5小時，使用75%酒精處理20s，0. 2%的升汞消毒7min，無菌水沖洗5-7遍，切去切口。
3. 根據權利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：培養基中加 入0. 1%活性炭，可以有效防止褐化現象，且可以促進吳茱萸芽的分化。
4. 根據權利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：增殖培養基 中加入ΑΒΑ，ΑΒΑ有利于促進不定芽的分化。
5. 根據權利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：誘導增殖培 養條件采用20001χ光強下培養，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH值5. 8,溫度25°C，光期12h， 暗期12h，生根培養條件為光照40001x，蔗糖20g/L，瓊脂6. 5g/L，pH值5. 8,溫度27°C，光 期16h，暗期8h。
6. 根據權利要求1所述的一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，其特征在于：煉苗的苗床 基質選用沙壤土：珍珠巖=3 :2,沙壤土和珍珠巖使用高壓滅菌鍋滅菌，苗床使用前用1000 倍的甲基托布津水溶液澆透，栽植后定期澆水，三周后添加農家肥，濕度90%，溫度25°C，遮 蓋兩層薄膜，透光率保持在30%左右。
【文檔編號】A01H4/00GK104186347SQ201410463276
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月12日 優先權日:2014年9月12日
【發明者】楊存 申請人:南京通澤農業科技有限公司