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羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害方法與系統與流程

文檔序號:11464856閱讀:854來源:國知局
羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害方法與系統與流程
本發明涉及等離子體化學、水產養殖技術及海洋環境工程等領域,尤其是涉及羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害方法與系統。
背景技術
:刺激隱核蟲是一種遍身纖毛的單細胞原生動物,主要分布于熱帶、亞熱帶海域,其生活史可分為“滋養體”、“包囊前體”、“包囊”和“幼蟲”4個階段,它能感染大部分海水硬骨魚類,對魚的種類和生長階段均無嚴格選擇性,分布廣,且易導致大量死亡,對海水養殖業的危害極其嚴重(但學明.刺激隱核蟲(cryptocaryonirritans)的傳代、保存及刺激隱核蟲病的防治研究[d].暨南大學,2006)。目前養殖行業常常采用生產上也采用一些物理防治方法和化學藥物防治刺激隱核蟲。物理浸泡包括淡水浸泡、輪換養殖、使用紫外線和臭氧處理養殖水體等(蔡澤平,李沫.紫紅笛鯛白點病的防治試驗[j].海洋科學,2001,25(8):10-11),效果并不明顯,而且操作過程繁瑣或對魚應激特別大,不適合在大規模養殖廠中應用。化學藥劑如硫酸銅、亞甲基藍、孔雀石綠、鹽酸奎寧、苯氧乙醇等(pironetfn,jonesjb.treatmentsforectoparasitesanddiseasesincaptivewesternaustraliandhufish[j].aquacultureinternational,2000,8(4):349-361),雖然對刺激隱核蟲病有一定抑制作用,但是長期過量用藥會造成藥物殘留、環境污染等后果,而且孔雀石綠、亞甲基藍等殺蟲藥物已被列為水產禁藥不得使用。國內海水養殖中極為嚴重的濫用藥物,已經引起了諸多不良后果,如產生抗藥性;益生物菌落結構遭到破壞;長自身免疫力的下降,甚至誘發更嚴重的疾病。所以在選擇治療方法不僅要考慮療效好而副作用小,還要考慮對水體環境的保護,即應選擇毒性小、殘留短、對水體污染小或無污染的藥物,同時兼顧成本低廉、使用方便等特點。基于大氣壓強電離放電高效生成羥基自由基(·oh)是綠色強氧化劑,反應速率常數極高,能在數秒內完成整個生化反應過程,能使組成細胞基本結構的物質和功能物質發生如dna結構斷裂、蛋白質氧化分解、脂質過氧化等不可逆反應,從而破壞細胞基本結構和功能,從而導致細胞和生物體死亡,己被有效地應用于赤潮防治,飲用水處理等方面,所以羥基自由基可以有效的防治由寄生蟲引起的水產養殖動物疾病。技術實現要素:本發明的目的在于提供一種羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的系統。本發明的另一目的在于提供一種羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的方法。所述羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的系統設有羥基自由基產生裝置、tro在線檢測器、文丘里射流器、液液混溶罐、氣液分離器、養殖池、流量計、液體泵、弧形篩、蛋白分離器、生物濾池、緩沖池、水質檢測器。所述羥基自由基產生裝置的進氣口外接氧氣源;所述養殖池出水口和液體流量計的進水口連接,液體流量計的出水口和液體泵的進水口連接,液體泵的出水口和弧形篩的進水口連接,弧形篩的出水口和蛋白分離器的進水口連接,蛋白分離器的出水口和生物濾池的進水口連接,生物濾池的出水口和緩沖池的進水口連接,緩沖池的出水口和水質檢測器的進水口連接,水質檢測器的出水口分為兩路,一路沿液體主管路和文丘里射流器的主進水口連接,另一路沿液體支管路和液體流量計的進水口連接,所述液體流量計的出水口和羥基自由基產生裝置的進水口連接,羥基自由基產生裝置出水口與文丘里射流器的側進水口連接,丘里射流器的出水口和液液混溶罐進水口連接,液液混溶罐的出水口和氣液分離器的進水口連接,氣液分離器的出氣經熱分解后排放,液液混溶罐的出水口和水質檢測器的進水口連接,水質檢測器的出水經過tro在線檢測器后通入養殖池內。所述氧氣源與羥基自由基產生裝置之間可設置氣體閥門和氣體流量計;所述羥基自由基產生裝置的出水管路可設置檢測tro在線檢測器;所述文丘里射流器和液液混溶罐的進水口之間可設置進水液體閥門;所述液體支管路上可設置進水液體閥門;所述液液混溶罐和養殖池的進水口之間可設置進水液體閥門;所述液體主管路上可設置進水液體閥門;所述文丘里射流器進水管路可設置進水液體閥門;所述主管路液體泵前可設有補水液體閥門;所述羥基自由基產生裝置出水管路上可設置取樣閥門;所述文丘里射流器和液液混溶罐之間可設置取樣閥門;所述液液混溶罐出水管路上可設有取樣閥門;所述養殖池出水管路上可設有取樣閥門;所述弧形篩前可設有取樣閥門,所述弧形篩和蛋白分離器之間可設有取樣閥門;所述外排處理支路上文丘里射流器進水和出水管路上可設有取樣閥門;所述緩沖池出水管路可設有取樣閥門。當養殖水需要外排時,所述蛋白分離器出水管路分為兩路,一路進入循環水系統中,另一路為外排支管路,所述液液混溶罐出水管路分出一條支管路接入外排支管路上的文丘里射流器中,對外排養殖水進行處理。所述羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的方法包括以下步驟:1)養殖魚類出現刺激隱核蟲病時,關閉病魚養殖池進水管閥門,打開循環系統排水閥門,養殖水通過液體泵經底部水管將養殖池內污水導入弧形篩過濾,除去大顆粒殘餌、糞便等,再通過蛋白質分離器使水中小顆粒有機物在未分解前分離出去,經過管路進入生物濾池進一步去除水體中氨氮和亞硝氮,生物濾池出水進入緩沖池,緩沖池出水分為兩條支路,其中一條支路沿液體主管路和文丘里射流器的主進水口連接,另一條支路沿液體支管路和液體流量計的進水口連接,該液體流量計的出水口和羥基產生系統的進水口連接,羥基產生系統的出水口和文丘里射流器的側進水口連接;2)氧氣通入羥基產生系統,開啟高頻高壓電源,對氧氣進行解離、電離,生成氣態氧活性粒子;生成的氣態氧活性粒子與進入的少量養殖水混合產生高濃度羥基自由基溶液;3)高濃度羥基自由基溶液進入養殖池進水管路上的文丘里射流器側進液口;主進液口的預處理養殖水和側進液口的羥基自由基溶液充分混溶,然后一同進入液液混溶罐進一步混溶,養殖池中水位降至最低水位后,打開養殖池進水閥門,主管路中含有tro劑量的養殖水進入病魚養殖池,病魚浸泡1~6h后,觀察魚體表白點95%以上已經脫落。所述羥基自由防治刺激隱核蟲病害系統其核心是基于大氣壓強電離放電高效生成羥基自由基(·oh)殺滅激隱核蟲幼蟲、包囊、及病原微生物,促進魚體表面滋養體脫落。將氧氣通入到具有極窄放電間隙0.1mm、亞微米al2o3冶貼成薄電介質層的小型化非平衡等離子體源中,實現了大氣壓強電離放電生成高濃度氧活性粒子;采用模塊化陣列式等離子體集成源并任意組合,獲得可調控、大產生量的氧活性粒子,協同水射流空化氣液混溶技術,獲得高濃度羥基自由基溶液,總氧化劑tro濃度在2~30mg/l,防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的處理量在10~200t/h。所述弧形篩主要由進水口、集水槽、布水板、篩網、集污槽、排污口、出水口及支架組成,選用304不銹鋼,篩網尺寸為780mm×400mm,利用篩縫排列垂直于進水水流方向的圓弧形固定篩面實現水體固液分離,篩縫孔徑為0.25mm,可有效去除約80%的粒徑大于70μm的大顆粒物;所述蛋白分離器采用氣浮原理,使得空氣與水之間形成的接觸面具有一定的表面張力,吸附匯集纖維素、蛋白質和食物殘渣等有機雜質;射流形成的大量微細氣泡溶進水里,通過氣泡擴散盤將水中的蛋白質等污染物收集于表層氣泡中,然后通過表層的污物收集槽將污染物排出系統外,達到快速脫除水中有害的有機顆粒,防止水質惡化的作用。使用蛋白分離器處理后,氨氮小于0.8mg/l,亞硝氮小于0.3mg/l。所述生物濾池主要是由濾料、布水系統、曝氣系統、出水系統以及反沖洗系統組成。通過在濾池內填裝一定量比表面積大、生化性質穩定的顆粒狀濾料,經馴化培養使濾料掛膜,濾料生物膜由外而內的區域形成了好氧、缺氧及厭氧環境,可實現同步硝化反硝化脫氮過程,對養殖廢水中的氨氮、亞硝氮加以處理,將氮元素完全從水中脫除,從而達到凈化水質的最終目的。生物濾池運行一段時間后,需對生物濾池進行反沖洗以清除濾層內截留的懸浮物與過量的生物膜,從而恢復濾池的納污能力和處理效率。使用生物濾池,養殖水水質有明顯改善,氨氮、亞硝氮較處理前降低了40%~50%和5%~15%。在步驟2)中,所述氧氣采用工業純氧,氧氣進氣量為1.0~10.0l/min;所述氧氣通入到具有極窄放電間隙0.1mm、亞微米al2o3冶貼成薄電介質層的小型化非平衡等離子體源中,實現了大氣壓強電離放電生成高濃度氧活性粒子;采用模塊化陣列式等離子體集成源并任意組合,獲得可調控、大產生量的氧活性粒子,協同水射流空化氣液混溶技術,獲得高濃度羥基自由基溶液,所述羥基自由基系統產生羥基自由基濃度可達2~30mg/l。所述羥基自由基溶液是以·oh為主,包括h2o2,ho2-,o2·-,o3·-,ho3·,o2+h2o以及hobr/obr-和溴胺(nh2br,nhbr2,nbr3)的總氧化劑tro,能夠快速殺滅刺激隱核蟲幼蟲、滋養體及包囊。在由文丘里射流器、液液混溶罐(r=0.5m,h=1m)組成液液混溶單元中,高濃度氧自由基溶液與待處理養殖水快速高效混溶、均布、激勵過程中,殺滅刺激隱核蟲幼蟲、包囊、及病原微生物,根據養殖水處理量確定羥基自由基溶液對養殖水的最佳混溶模式如混溶體積比、時間等;在壓載水在液液溶解罐停留時間為20~200s。所述氣液分離器可采用紅外快速加熱方法分解消除在氣液混溶器中未溶于水中的氧活性粒子氣體,防止殘余氧活性離子對人和環境危害。所述進入羥基產生系統支管路和主管路中液體的體積比可為1︰(10~20);所述主管路中液體和支管路中羥基自由基溶液在文丘里射流器后再進入液液混溶罐中充分混溶反應,進入養殖池前液體中總活性氧濃度可達1~6mg/l,所述支管路和主管路均采用聚四氟乙烯材質。·oh溶液殺滅水體中刺激隱核蟲幼蟲、包囊后由各個養殖池進水管排入養殖池中,殘余氧化劑tro與養殖水混溶擴散過程中持續殺滅刺激隱核蟲幼、脫落并殺滅魚體表滋養體,浸浴處理后養殖水中幼蟲完全殺滅,體表滋養體數量脫落95%以上,避免了刺激隱核蟲病害爆發。·oh處理養殖水主要水質指標符合漁業水質標準(gb11607-89)要求,nh3-n(氨氮)≤0.5mg/l,no2-n(亞硝氮)≤0.2mg/l,do(溶氧)≥8mg/l。本發明的核心在于利用大氣壓強電離放電方法,采用模塊化陣列式等離子體集成源并任意組合,獲得可調控、大產生量的氧活性粒子,協同水射流空化氣液混溶技術,可制備高濃度的羥基自由基溶液,總氧化劑tro濃度在2~30mg/l,防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的處理量在10~200t/h。利用·oh高效快速殺滅海洋微小生物的特性,實現高濃度·oh溶液結合工廠化循環養殖系統高效防治刺激隱核蟲病害。·oh溶液能在文丘里射流器、液液混溶罐中快速高效殺滅刺激隱核蟲幼蟲、滋養體、包囊,解決了一般物理化學方法無法有效防止刺激隱核蟲病害反復爆發的難點;此外,羥基自由基能夠改善水產動物養殖的水環境的效果,氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧符合漁業水質標準(gb11607-89)要求,促進病魚完全康復。所述羥基自由基殺滅刺激隱核蟲幼蟲的過程主要發生在文丘里射流器、液液混溶罐中;含有刺激隱核蟲幼蟲養殖水經過文丘里射流器和液液混溶罐后,羥基自由基可快速分解破壞刺激隱核蟲幼蟲外膜,并能降解氧化胞內蛋白和核酸等生物大分子,從而實現對幼蟲的完全殺滅,由于羥基自由基極高的反應速率常數,上述反應在數秒內即可完成,因而其可在停留時間內完全反應。所述羥基自由基促使刺激隱核蟲滋養體脫落通過水產養殖動物在羥基自由基溶液tro=0.5~3mg/l中浸浴1~6h,羥基自由基可以氧化降解魚類體表黏液中蛋白質和多糖類物質,促進病魚體表黏液的脫落,而這些黏液中有大量的寄生蟲滋養體,同時羥基自由基可以破壞滋養體膜結構,阻止其發育成包囊,從而實現對滋養體的殺滅。所述羥基自由基殺滅刺激隱核蟲包囊通過由包囊外殼孵化孔洞進入包囊內,破壞內部分裂幼體,氧化破壞幼體蛋白和核酸,使其喪失分裂孵化幼蟲能力,使其無法完成生活史,防止病害反復爆發。所述養殖水tro值根據養殖水的溫度、ph、濁度、總有機碳濃度,刺激隱核蟲感染程度等進行調控,以有效驅除魚體表面滋養體作為判斷依據。本發明的技術效果和優點是:1)將氧氣通入到具有極窄放電間隙0.1mm、亞微米al2o3冶貼成薄電介質層的小型化非平衡等離子體源中,實現了大氣壓強電離放電生成高濃度氧活性粒子;采用模塊化陣列式等離子體集成源并任意組合,獲得可調控、大產生量的氧活性粒子,協同水射流空化氣液混溶技術,獲得高濃度羥基自由基溶液,總氧化劑tro濃度在2~30mg/l,防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的處理量在10~200t/h。2)水產養殖動物在羥基自由基溶液tro=0.5~3mg/l中浸浴1~6h,可殺滅養殖水體中幼蟲,促進體表或鰓上滋養體脫落,抑制其發育成具有多層外壁結構的包囊,顯著提高患病水產養殖動物的存活率。3)羥基自由基可以快速分解破壞刺激隱核蟲幼蟲外膜,并能降解氧化胞內蛋白和核酸等生物大分子,從而實現對幼蟲的完全殺滅。4)羥基自由基可以氧化降解魚類體表黏液中蛋白質和多糖類,促進病魚體表含有大量的刺激隱核蟲滋養體的黏液脫落,同時羥基自由基可以破壞滋養體外膜結構,抑制其發育成包囊,從而實現對滋養體的殺滅。5)羥基自由基可以由包囊外殼孵化孔洞進入包囊內,破壞內部分裂幼體,使其喪失分裂孵化幼蟲能力,使其無法完成生活史,防止病害反復爆發。6)羥基自由基殺蟲滅菌劑量與其比表面積成反比,殺滅寄生蟲所用的羥基自由基劑量對養殖魚類幾乎無影響。7)羥基自由基不僅具有防治刺激隱核蟲病害的作用,還有改善水產動物養殖的水環境的效果,主要水質指標符合漁業水質標準(gb11607-89)要求:nh3-n(氨氮)≤0.5mg/l,no2-n(亞硝氮)≤0.2mg/l,do(溶氧)≥8mg/l。8)本發明所述羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的系統操作簡單,運營成本低,適用于各類水產養殖動物寄生蟲和細菌病害防治,為工廠化循環養殖業病害爆發提供了新的治理手段。附圖說明圖1為羥基自由基防治刺激隱核蟲病害的裝置流程圖。圖2為羥基自由基處理前后刺激隱核蟲幼蟲的形態圖。在圖2中,a為處理前刺激隱核蟲幼蟲明場照片,b、c為處理后刺激隱核蟲幼蟲明場照片。圖3為羥基自由基處理前后刺激隱核蟲滋養體的形態圖。在圖3中,a為處理前刺激隱核蟲滋養體明場照片,b、c為處理后刺激隱核蟲滋養體明場照片。圖4為羥基自由基處理前后刺激隱核蟲包囊的形態圖和he染色圖。在圖4中,a、b為刺激隱核蟲殺滅前后明場照片,c、d為刺激隱核蟲殺滅前后he染色照片。具體實施方式以下實施例將結合附圖對本發明作進一步說明。如圖1所示,所述羥基自由基防治刺激隱核蟲病害的裝置;設有羥基自由基產生裝置1、tro在線檢測器21~22、文丘里射流器31~32、閥門41~417、流量計51~54、液液混溶罐7、氣液分離器8、水質檢測器91~93、養殖池101~102、液體泵111~112、弧形篩12、蛋白分離器13、生物濾池14、緩沖池15。所述養殖池共有2個,標記為101和102,所述流量計共有4個,分別為養殖池出水管路液體流量計51、支管路液體流量計52、53及氣體流量計54;所述水質檢測器共有3個,分別為養殖池進水水質檢測器91,緩沖池出水水質檢測器92及外排水質檢測器93;所述氣體流量計54的進氣口外接氧氣,氣體流量計54的出氣口和羥基產生系統1的進氣口連接;所述待處理養殖池101、102出水口和液體流量計51的進水口連接,液體流量計51的出水口和循環主管路18的液體泵111的進水口連接,循環主管路18的液體泵111的出水口和弧形篩12的進水口連接,弧形篩12的出水口和蛋白分離器13的進水口連接,蛋白分離器13的出水口和生物濾池14的進水口連接,生物濾池14的出水口和緩沖池15的進水口連接,緩沖池15的出水口和水質檢測器92的進水口連接,水質檢測器92的出水口經閥門414和液體泵112后分為兩路,一路沿液體主管路151進入文丘里射流器31的主進水口,另一路沿液體支管路20進入支管路液體流量計52的進水口,支管路液體流量計52的出水口和羥基自由基產生裝置1的進水口連接,羥基自由基產生裝置1的出水口和文丘里射流器31的側進水口連接,文丘里射流器31的出水口和液液混溶罐7的進水口連接,液液混溶罐7中未溶解的氣體進入氣液分離器8,經熱分解后排空,液液混溶罐7的出水沿養殖池進水管路17依次經過出水水質檢測器91和tro在線檢測器22后進入養殖池101、102;液液混溶罐7的底部出口接閥門43。所述氧氣與羥基自由基產生裝置1之間可設置氣體閥門41和氣體流量計54;所述羥基自由基產生裝置1的出水管路可設置檢測tro在線檢測器21;所述文丘里射流器31和液液混溶罐7的進水口之間可設置進水液體閥門42;所述液體支管路16上可設置進水液體閥門44;所述液液混溶罐7和養殖池101、102的進水口之間可設置進水液體閥門45、46;所述液體主管路18上可設置進水液體閥門411;所述外排處理支路19上可設置進水液體閥門412;所述文丘里射流器31進水管路可設置進水液體閥門415,所述液體支管路20上可設置進水液體閥門416;所述液體泵111前可設有補水液體閥門417;所述羥基自由基產生裝置1出水管路上可設置取樣閥門61,所述文丘里射流器31和液液混溶罐7之間可設置取樣閥門62,所述水質檢測器91和tro在線檢測器22之間可設有取樣閥門63,所述養殖池101、102出水管路上可設有出水閥門49與410和取樣閥門65;所述弧形篩12前可設有取樣閥門66,所述弧形篩12和蛋白分離器13之間可設有取樣閥門67,所述緩沖池15出水管路可設有取樣閥門610。所述蛋白分離器13出水管路可設有外排支路管路19,所述外排處理支路19上可設置進水液體閥門412,所述外排處理支路19上可設有文丘里射流器32,所述液液混溶罐7出水管路可設有支路16連接文丘里射流器32側進水口,所述外排處理支路19上文丘里射流器32進水和出水管路上可設有取樣閥門68、69。以下給出羥基自由基防治水產養殖動物刺激隱核蟲病害的方法:1)打開羥基產生系統1,根據待處理的水量確定氧氣進氣量,進氣量可為1.0~10.0l/min;將氧氣通入到具有極窄放電間隙0.1mm、亞微米al2o3冶貼成薄電介質層的小型化非平衡等離子體源中,實現了大氣壓強電離放電生成高濃度氧活性粒子。2)關閉病魚養殖池101、102進水管閥門47、48,根據待處理水總量及處理時間確定水流量,可為10~200t/h;待處理養殖水通過液體泵111經循環系統管路18將養殖池內養殖水導入弧形篩12過濾,除去大顆粒殘餌、糞便等,再通過蛋白質分離器13使水中小顆粒有機物在未分解前分離出去,養殖水經過管路進入生物濾池14進一步去除水體中氨氮和亞硝氮,進入緩沖池15,緩沖池出水經水質檢測器92后分為兩部分,一路沿液體支管路20,經過支管路液體流量計54后進入羥基產生系統1,并和氣態氧活性粒子充分混合、反應,高效制備羥基自由基溶液,羥基自由基濃度最高可達200μmol/l,另一路經液體主管路151進入文丘里射流器31,在文丘里射流器31的作用下,液體主管路151中待處理養殖水溶液和羥基自由基溶液混合碰撞,生成以·oh為主,包括h2o2、ho2-、o2·等的總活性氧,水中總活性氧tro濃度可為2~30mg/l,文丘里射流器31出水進入液液混溶罐7進一步促進羥基自由基與養殖水中刺激隱核蟲幼蟲以及包囊、病原菌等的充分接觸,確保殺滅養殖水體中刺激隱核蟲包囊;液液混溶罐7中未溶解的氣態氧活性碎片經過氣液分離器8后經熱分解后安全排放,而液液混溶罐7的出水進入養殖池進水管道17,依次通過出水質檢測器91和tro在線檢測器22后進入養殖池內,使得養殖池101、102中養殖水總活性氧tro濃度可為0.5~3mg/l,并維持1~6h,鏡檢觀察魚體表白點是否脫落,養殖池進水管道上設有取樣閥門64。當需要外排養殖水時,打開支路管路19閥門412,關閉生物濾池14進水閥門413,此時需外排的養殖水經支路管路19進入文丘里射流器32與液液混溶罐7出水管路16中羥基藥液繼續混合、反應,以滿足外排水水質的要求;當不需要處理外排水時,經蛋白分離器13處理后養殖水進入生物濾池14,關閉外排支路閥412,打開生物濾池進水閥門413,此時養殖水可進行循環使用。羥基產生系統出水管路和液液混溶罐出水管路,上可設有tro在線檢測器和取樣口,用于檢測管道中tro濃度以及取樣檢測水質;養殖池內配有水質檢測探頭,用于檢測養殖池內水質變化情況以及tro濃度;緩沖池出水管路上設有水質監測設備以及取樣口,用于檢測預處理后養殖水水質情況;養殖池出水管道上可設有取樣口,用于檢測出水水質情況;弧形篩前設有補水閥門,連接養殖場源水池,用于補充海水。以下給出羥基自由基殺滅刺激隱核蟲各發育階段蟲體的作用機理:1)刺激隱核蟲幼蟲殺滅機理羥基自由基氧化破壞刺激隱核蟲幼蟲外膜結構,外膜結構主要有蛋白和脂質組成,其極易受到羥基自由基強氧化作用,使得幼蟲細胞結構瓦解,導致幼蟲死亡。2)刺激隱核蟲滋養體殺滅機理刺激隱核蟲幼蟲入侵魚體后,分別定居在皮膚、鰓黏液中形成滋養體,魚類黏液成分主要為蛋白質和多糖,羥基自由基可以快速氧化分解蛋白質,改變黏液黏性,促進病魚體表黏液的脫落,而這些黏液中有大量的寄生蟲滋養體,同時羥基自由基可以破壞滋養體外膜結構,瓦解細胞內食物泡和脂肪體,可抑制其發育成包囊,從而實現對滋養體的殺滅。3)刺激隱核蟲包囊殺滅機理刺激隱核蟲包囊壁是多層復雜結構,但囊壁有孔洞供幼蟲孵化后逐個鉆出,羥基自由基可以經囊壁孔洞進入包囊內部。在包囊內部,羥基自由基首先氧化降解內部分裂幼體生物膜多不飽和脂肪酸成分,破壞分裂幼體細胞結構。侵入包囊內部,直接作用與分裂幼體,破壞幼體的細胞器和dna、rna,使幼體的新陳代謝遭到破壞,導致幼體死亡,還可以作用于幼體外膜的脂蛋白和內部的脂多糖,使幼體產生通透性畸變而溶解死亡。此外,羥基自由基使其喪失分裂孵化幼蟲能力,使其無法完成生活史,防止病害反復爆發。以下給出具體實施例。實施例110月中旬,養殖池水溫22-25℃,鹽度23ppt,ph7.36,氨氮0.037mg/l,亞硝酸鹽0.287mg/l、溶解氧8.37mg/l,在養殖池中真鯛魚苗發現魚出現攝食減少,離群,喜歡張嘴停留在進出水口,時常用身體摩擦池壁或者池底,呼吸頻率加快情況,體表看上去有許多白點。通過鏡檢發現體表皮膚、鰓和鰭分泌黏液包裹蟲體,顏色黑色,形狀呈圓形或核形,可確診為刺激隱核蟲感染。其中養殖池(對照組)不做處理,2天后開始出現大量死亡,5天后死亡率90%以上,另外三個養殖池分別注入含有tro劑量的海水,劑量分別為0.5mg/l、1.0mg/l、1.5mg/l,浸浴時間為6h。5天后各養殖池魚苗死亡率分別為49.4%、14.3%、20.6%,可以看出維持tro劑量為1.0mg/l真鯛魚苗成活率明顯升高,體表白點數量顯著減少,魚苗逐漸恢復健康,治療效果顯著。實施例2對不同·oh劑量下刺激隱核蟲幼蟲以及滋養體殺滅情況進行表征。首先,利用顯微鏡對·oh殺滅前后刺激隱核蟲幼蟲和滋養體的形態變化進行觀察,結果如圖2和3所示(在圖2中,a為處理前刺激隱核蟲幼蟲明場照片,b、c為處理后刺激隱核蟲幼蟲明場照片;在圖3中,a為處理前刺激隱核蟲滋養體明場照片,b、c為處理后刺激隱核蟲滋養體明場照片)。從圖2可以看出,·oh處理后幼蟲先是游動速度變慢,之后停留在小范圍內慢速運動,隨后,蟲體出現明顯抖動,并繞自身長軸旋轉,纖毛擺動雜亂無序,細胞內部出現數個空泡,凸出表面。最終蟲體停止所有運動,細胞解體,細胞內容物流出直至死亡。這表明經·oh可以快速瓦解刺激隱核蟲幼蟲細胞,沒有再度感染的能力,從而可以防止魚被刺激隱核蟲感染。圖3顯示了低濃度下·oh對刺激隱核蟲滋養體的快速致死效果。針對滋養體·oh濃度的范圍表現出明顯的劑量關系。在最低濃度(0.30mg/l),滋養體游動受到抑制,并有一定的形態變化與少量的細胞質泄漏或者細胞破裂。滋養體暴露在中等劑量·oh溶液(0.66mg/l)中時,滋養體細胞質有明顯的泄露。進一步提高·oh溶液劑量至0.87mg/l,滋養體質膜瞬間完全溶解,找不到完整滋養體。這表明經·oh處理后,可以防止脫落的滋養體進一步形成包囊,無法孵化出大量具有感染力的幼蟲,使其無法完成生活史,防止刺激隱核蟲反復爆發。從圖4可以看出,·oh處理前后(a、b為刺激隱核蟲殺滅前后明場照片,c、d為刺激隱核蟲殺滅前后he染色照片),未處理包囊結構完整可以看到明顯分裂相,處理后包囊顏色偏淺,大部分無明顯分裂相;結合he染色觀察內部結構變化,可以看出未處理包囊內部有明顯的分裂相,結構完整,核區清晰;處理后包囊外部結構基本完整,內部結構已經瓦解,沒有顯藍色的核酸物質,可以看出,·oh進入包囊體內后,能夠破壞分裂幼體質膜結構,破壞dna,從而導致無法分裂出刺激隱核蟲幼體并最終導致死亡,避免了刺激隱核蟲病反復爆發的風險。表1tro(mg/l)00.51.01.5死亡率(%)92.349.414.320.6體表滋養體個數(個)1525±200620±5023±1010±3氨氮(mg/l)0.0370.0340.0110.005亞硝氮(mg/l)0.2780.0060.0010.001do(mg/l)8.3712.9814.6716.16ph7.367.227.387.41表2羥基自由基治療刺激隱核蟲病的效果以及水質變化情況參見表1,羥基自由基對刺激隱核蟲幼蟲、滋養體以及微生物殺滅效果參見表2。當前第1頁12
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