本發明屬于飼養業的工藝技術領域，具體涉及到一種酵母提取制備的豬精液稀釋液的制備方法。
背景技術：
豬精液冷凍技術雖已成功，但是程序復雜，設備昂貴、成本高，并且受胎率偏低，目前尚未廣泛推廣應用。豬精液的常溫保存溫度為15~25℃。但是豬精子在長期的存放過程中會因為活動減弱而出現沉淀聚集，造成精子缺氧環境，引起精子窒息死亡，近年來，懸浮劑如聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇在精液的保存中應用較多，同時取得了相當好的效果。
羧甲基纖維素鈉又名纖維素膠，具有獨特的懸浮、穩定、增稠特性，且其來源豐富，價格便宜。具有是溶液形成均一、穩定分散系的作用，根據cmc的性質，在豬精液中加入一定量的cmc有可能減緩精子沉降的速度，延長沉時間，減少搖勻次數，提高保存質量。
糖類在精液稀釋保存液中有多種作用。首先，糖類是精液稀釋保存液中重要的滲透壓保護劑，能夠在親水組織中替代水分子，防止精子膜結構因滲透壓變化而造成損傷，有利于精子膜結構的完整，從而提高精子活力；糖類可為精子補充能量，維持細胞基本代謝，減少精子自身能量消耗，延長精子在體外的存活時間，提高精子受精能力是采用凍精進行人工授精，但受胎率較低，在60％左右且不穩定，而用常規液態保存的精液進行人工授精后效果比凍精好，且費用低操作程序簡單，但是鮮精稀釋保存液大多數保存時間短，給生產帶來很多不便。目前，精液的保存方法主要是通過稀釋后置于15~25℃中進行常溫保存，由于稀釋液提供的弱堿性環境，使得精子的運動能力和代謝效率受到一定的抑制，因此常溫保存只能在一定的時間范圍內延長精子的存活時間和保持受精能力，稀釋好的精液置于22~25℃下1~2h后，平放入17℃恒溫箱內閉光保存，保存的莖葉每隔4~8h搖動一次，防止底層的精子被壓死。
技術實現要素：
一種酵母提取制備的豬精液稀釋液的制備方法，
本發明的主要是通過培育酵母菌細胞，然后利用現代儀器對酵母細胞進行破碎處理，釋放細胞內容物，添加適量的其它活性成分配比而成的，具體是通過以下的方法實現的：
先配置濃度10~15%左右的葡萄糖水溶液500~1000ml，然后按20:1的質量比例接種活性干酵母粉，與恒溫水浴鍋中30~35℃活化60~80min，并每隔15~25min輕輕搖晃一次，完成后將活化液按1:100~150的比例轉接到ypd液態培養基中，調整轉速200r/min，28~35℃培養30~40h，得到酵母擴大培養液，富含豐富的酵母菌。
發明加入了一定量的絮凝劑羧甲基纖維素鈉至其濃度為15~20g/l，并調節ph為7~9的堿性環境，于恒溫水浴中保溫20min，在酸性條件下酵母細胞幾乎不發生絮凝現象，酵母細胞絮凝后，彼此吸附沉降有利于濃縮酵母細胞，細胞的沉降率經檢測可達到驚人的70%以上，絮凝率則達到90%以上。而且根據背景技術所說，適量的加入羧甲基纖維素鈉可以增加溶液一定的粘稠度，可以提高稀釋液對精子的保護作用，有利于精子活率、活力的維持，同時明顯提高精子脂膜完成率和頂體完整率，原理是粘稠的稀釋液可以降低精子的運動能力，減少不必要的能量消耗。這里cmc的濃度至關重要，一定要滿足精子的需求，達到最好稀釋液保護精子的濃度，而酵母沉降的只是次要的，只要適當起到沉降的效果即可，畢竟最終稀釋液是要用于豬精稀釋液的配置。
沉降過后去除酵母培養液上層1/3以上的清液，將下層增稠的沉降液進行細胞的破碎及細胞活性成分的萃取，將剩余培養液置于微波功率為600~800w的電磁作用環境下2~5min，微波是通過波場中介質的擺動摩擦作用產生能量，具有很好的選擇性、瞬時性和高效性，細胞內不同位置的物質，對于微波的吸收能力存在差異，從而導致為波場中的細胞局部受熱，細胞在一定的強度下出現缺口而破碎，起到充分裂解酵母細胞的功能。
微波不僅可以快速使酵母細胞裂解，同時微波局部加熱的方式還可以迅速的是酵母細胞中的海藻糖酶失活，導致海藻糖酶并不會酶解海藻糖，同時此加入一定量事先配置的乙醇，調制溶液的乙醇濃度為5~10%，乙醇對有機物具有溶解性，提高細胞內容物的溶出速率，畢竟最后需要對剩余的殘渣進行過濾，殘渣不利于豬精子的活動，尤其是頂體的完整性，乙醇的加入也可以提高海藻糖的產率，其它溶出的物質還包括：蛋白質、低分子肽、氨基酸、核酸降解物、微量元素和b族維生素等各種活性成分，只要適量的控制濃度，基本模擬了酵母細胞的內環境，屬于天然的細胞存活內環境，特別適于精子的存活。
通過減壓蒸餾回收乙醇并濃縮酵母提取液，真空度0.08mpa的條件下，升溫至60~70℃沸騰回流回收乙醇并濃縮提取液至60~80%，采用抽濾純化提取液。
由于精子的運動需要耗能，而酵母裂解液中糖類及其它必要物質含量不足，需要添加一些輔料10~16%，其它的輔料包括葡萄糖30~55%、edta5~15%、檸檬酸檸檬酸三鈉5~10%、氯化鉀15~25、碳酸氫鈉3~6%、tris-半管氨酸14~17%。
本發明的有益效果：采用酵母細胞培養液的精華提取液，適量配比添加成分用于豬精液的稀釋液，對于豬精子的保存起到非常好的效果，成本低，延長豬精液的保存期50%以上，同時可以利用啤酒釀酒酵母來制備，更加節省成本，同時保護環境。
具體實施方式
實施例1：
（1）先配置濃度10%左右的葡萄糖水溶液1000ml，然后按20:1的質量比例接種活性干酵母粉，與恒溫水浴鍋中32℃活化60min，并每隔20min輕輕搖晃一次，完成后將活化液按1:120的比例轉接到ypd液態培養基中，調整轉速200r/min，30℃培養38h，得到酵母擴大培養液，富含豐富的酵母菌。
（2）加入了一定量的絮凝劑羧甲基纖維素鈉至其濃度為15g/l，并調節ph為8的堿性環境，于恒溫水浴中保溫20min，沉降過后去除酵母培養液上層1/3以上的清液。
（3）將下層增稠的沉降液進行細胞的破碎及細胞活性成分的萃取，將剩余培養液置于微波功率為650w的電磁作用環境下3min，同時此加入一定量事先配置的乙醇，調制溶液的乙醇濃度為8%。
（4）通過減壓蒸餾回收乙醇并濃縮酵母提取液，真空度0.08mpa的條件下，升溫至60℃沸騰回流回收乙醇，采用抽濾純化提取液。
（5）加入提取液10%的輔料，包括葡萄糖40%、edta10%、檸檬酸檸檬酸三鈉10%、氯化鉀20%、碳酸氫鈉5%、tris-半管氨酸15%。