本發明涉及一種丹參組織培養過程中叢芽壯苗的培養工藝。
背景技術：
丹參(salviamiltiorrhizabunge)，唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，為我國傳統藥材，又名大紅袍，血參根，紫丹參等。春、秋二季采挖，全國大部分地區都有分布。具有活血祛瘀，消炎止痛、擴張冠狀動脈、改善心肌缺血狀況、降低血壓、安神靜心、降血糖和抗菌等功效；對月經不調，經閉痛經，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛等病癥有一定的療效。其活性成分主要有兩大類：脂溶性二萜類化合物和二為水溶性的多聚酚酸類成分。
近年來丹參的市場需求量日益增加，而傳統的種子繁殖和分根繁殖繁殖方式來種植丹參，丹參產量較低，品質退化。因此現有的丹參繁殖方式已遠遠不能滿足人們的要求。而近年來興起的植物組織培養技術，不僅可以批量培育丹參苗，且可以保持母株的優良性狀。丹參植物組織培養技術是指從丹參植物體分離出符合需要的組織、器官、細胞、原生質體等，通過無菌操作，在人工控制條件下誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，最后形成完整植株。
隨著丹參組培技術的深入研究，為達到最好的成苗效果，優化丹參組織培養過程中叢芽壯苗培養條件具有重要意義。
技術實現要素：
針對上述存在的問題，本發明旨在提供丹參組織培養過程中叢芽壯苗的培養工藝，該工藝主要對丹參叢生苗培養過程中的培養基進成分進行優化改進，不僅可使丹參叢芽長成粗壯的丹參苗，長勢良好，生長速度快，而且通常與其他激素配用，才會有利于形成壯苗。
為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下：
丹參組織培養過程中叢芽壯苗的培養工藝，包括以下步驟：
1)培養基的配制
a、激素母液配制：稱取6-ba0.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用純水定容至100ml，即為濃度為1.0mg/ml的6-ba母液；稱取ga30.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用純水定容至100ml，即為濃度為1.0mg/ml的ga3母液；
b、激素抽濾滅菌：將濾膜放進抽濾頭，高壓滅菌，帶進超凈臺，將6-ba、ga3抽濾滅菌，備用；
c、配制培養基基本成分：ms+30g/l蔗糖+5.26g/l瓊脂，ph5.8；高壓滅菌；帶入超凈臺備用；
d、添加激素：在超凈臺上用無菌的移液搶吸取6-ba加入到基本培養基里，使其濃度為1.0mg/l，換取槍頭繼續吸取ga3入到基本培養基里，使其濃度為0.2mg/l，混勻；
e、分裝：將添加好激素的培養基分裝到無菌的組培瓶中，每瓶30～40ml，成分為：ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l瓊脂，ph5.8；
2)叢生芽的選擇；
3)叢生芽的處理：采用無菌處理法進行處理；
4)叢生芽的接種；
5)叢生芽的培養：接種后的叢芽放置于組培室的組培架上進行叢芽的誘導，培養條件：培養溫度27±0.5℃，光照時間12h，光強3000lx，t5植物培養燈管。
作為優選，所述步驟(2)“叢生芽的選擇”是指愈傷置于繼代培養基誘導叢生芽1個月后，選擇無污染，生長良好的的叢生芽帶入超凈臺備用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口處。
作為優選，所述步驟(3)“叢生芽的處理”是用無菌的鑷子將生長良好的叢生芽鑷起，置于無菌的接種盤上，用無菌的剪刀減去底部黑色或褐色的部分，用剪刀和鑷子將叢芽分開，備用。
作為優選，所述步驟(4)“叢生芽的接種”用無菌的鑷子將叢芽鑷起，插入到所述e步驟的固體培養基上。
本發明的有益效果是：本發明添加在一定含量6-ba的基礎上，添加少量的ga3，可使丹參叢芽長成粗壯的丹參苗，長勢良好，生長速度快。ga3作為生長促進劑，通常與其他激素配用，才會有利于形成壯苗，而單用或者用量過大會產生植株細長、瘦弱等副作用。
具體實施方式
為了使本領域的普通技術人員能更好的理解本發明的技術方案，下面結合實施例對本發明的技術方案做進一步的描述。
實施例：丹參組織培養過程中叢芽壯苗的培養工藝，包括以下步驟：
1)培養基的配制
a、激素母液配制：稱取6-ba0.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用純水定容至100ml，即為濃度為1.0mg/ml的6-ba母液；稱取ga30.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用純水定容至100ml，即為濃度為1.0mg/ml的ga3母液；
b、激素抽濾滅菌：將濾膜放進抽濾頭，高壓滅菌，帶進超凈臺，將6-ba、ga3抽濾滅菌，備用；
c、配制培養基基本成分：ms+30g/l蔗糖+5.26g/l瓊脂，ph5.8；高壓滅菌；帶入超凈臺備用；
d、添加激素：在超凈臺上用無菌的移液搶吸取6-ba加入到基本培養基里，使其濃度為1.0mg/l，換取槍頭繼續吸取ga3入到基本培養基里，使其濃度為0.2mg/l，混勻；
e、分裝：將添加好激素的培養基分裝到無菌的組培瓶中，每瓶30～40ml，成分為：ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l瓊脂，ph5.8；
2)叢生芽的選擇：愈傷置于繼代培養基誘導叢生芽1個月后，選擇無污染，生長良好的的叢生芽帶入超凈臺備用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口處；
3)叢生芽的處理：用無菌的鑷子將生長良好的叢生芽鑷起，置于無菌的接種盤上，用無菌的剪刀減去底部黑色或褐色的部分。用剪刀和鑷子將叢芽分開，備用；
4)叢生芽的接種：用無菌的鑷子將叢芽鑷起，插入到ms固體培養基上，培養基成分為ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l瓊脂，ph5.8；
5)叢生芽的培養：接種后的叢芽放置于組培室的組培架上進行叢芽的誘導，培養條件：培養溫度27±0.5℃，光照時間12h，光強3000lx，t5植物培養燈管。
6-ba作為一種使用廣泛的植物生長調節劑，具有多種生理作用，丹參叢芽壯苗是利用其促分化、打破頂端優勢，促進植物側芽生長、促進或抑制葉的伸長生長等作用；而ga3具有加速植物莖的伸長的功能。因此，當單用或者過量使用ga3時，植物側芽還未長出時，莖部已經快速長高，從而產生的植株細長、瘦弱。而當適當濃度的6-ba與ga3配合使用時，6-ba促分化、打破頂端優勢，促進側芽生長的功能可以與ga3加速植物莖部伸長生長的功能相互補，且加入少量的ga3，可以加快植物伸長生長，縮短實驗周期，在短時間內可以達到叢芽壯苗的效果。
在具體實驗中本發明以無菌的丹參叢芽為實驗材料，以ms為基本培養基，首先單獨使用6-ba，30天后比較不同濃度梯度下叢芽生長情況。結果發現低濃度的6-ba叢芽生長速度慢，且部分叢芽從不能形成完整植株，而濃度過高時，部分叢芽出現黃褐色褐色，不能形成整株丹參苗。而濃度在1.0mg/l時，丹參莖部粗壯，葉片為綠色，長勢旺盛。
表1：不同濃度6-ba對丹參叢芽壯苗生長的影響
為達到更好的效果，ms培養基添加1.0mg/l6-ba的基礎上，添加了少量的ga3，并通過實驗來確定ga3的最佳使用濃度。結果表明，低濃度的ga3有利于壯苗，濃度在0.2mg/l時效果最好，丹參成苗率為100％，且生長旺盛，莖部粗壯，濃度較高時，植株長勢纖弱，莖部細長。
表2：不同濃度激素組合對丹參叢芽壯苗生長的影響
表3為本發明丹參叢芽壯苗培養結果
以上顯示和描述了本發明的基本原理、主要特征和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。