本發明涉及一種不定芽誘導方法，尤指一種以文冠果成熟胚為外植體的不定芽誘導方法。
背景技術：
文冠果無患子科、文冠果屬落葉灌木或小喬木，高可達5米；小枝褐紅色粗壯，葉連柄長可達30厘米；小葉對生，兩側稍不對稱，頂端漸尖，基部楔形，邊緣有銳利鋸齒，兩性花的花序頂生，雄花序腋生，直立，總花梗短，花瓣白色，基部紫紅色或黃色，花盤的角狀附屬體橙黃色，花絲無毛；蒴果長達6厘米；種子黑色而有光澤。春季開花，秋初結果。
分布中國北部和東北部，西至寧夏、甘肅，東北至遼寧，北至內蒙古，南至河南。野生于丘陵山坡等處，各地也常栽培。
文冠果耐干旱、貧瘠、抗風沙，在石質山地、黃土丘陵、石灰性沖積土壤、固定或半固定的沙區均能成長，是中國特有的一種食用油料樹種。
文冠果具有較高的工業價值和營養價值，油脂成份在種子和種仁中含量極高。研究結果證明：種仁中含油量達66.39％，優良品種的種仁中含油量達72％，超過一般的油料植物，其油脂的基本組成如下：硬脂酸、油酸38.9％(般食用油的主要成份之一)亞油酸40.2％(和豆油、核桃油相近，也是營養價值最高的部分，山崳酸7.2％、亞麻酸及甘碳烯酸各為0.3％。文冠果是我國特有的經濟木本油料樹種，油黃色而透明，食用味美，油中所含亞油酸是中藥益壽寧的主要成份，具有極好降血壓作用，食用文冠果油可有效預防高血壓、高血脂、血管硬化等病癥。此外，文冠果種仁除可加工食用油外，還可制作高級潤滑油、高級油漆、增塑劑、化妝品等工業原料。由文冠果籽油制備的生物柴油相關烴脂類成分含量高，內含18c的烴類占93.4％，而且無s、無n等污染環境因子，符合理想生物柴油指標。文冠果的柴油提取已獲成功，陜西、河南、甘肅、北京等國內地區已在積極籌建文冠果油大中型加工廠，日本、韓國、加拿大等國也紛紛建造文冠果園林基地及加工廠。
技術實現要素：
本發明一種以文冠果成熟胚為外植體的不定芽誘導方法的目的是提供一種提高文冠果成熟胚分化率的方法。
本發明一種以文冠果成熟胚為外植體的不定芽誘導方法所采用的技術手段是：首先配制誘導培養基，所述誘導培養基的配方為ms+6-ba1.0mg/l+tdz0.05mg/l+naa0.01mg/l；之后將文冠果成熟胚作為外植體進行處理與消毒；第三步將消毒后的種胚在超凈工作臺上進行無菌操作，將大子葉的先端用消毒手術刀切除，將大子葉背面朝下接種在事先配制好的不定芽誘導培養基中進行誘導；接種完成后，暗培7天后，轉至光照時間為13h，光照強度為2000-3000lux，溫度為25±2℃，空氣濕度為30-40％的條件下培養。
對文冠果成熟胚作為外植體進行處理與消毒的步驟為：首先將文冠果種子用中性洗滌劑飽和液浸泡10min，同方向攪拌，然后用清水沖洗干凈，再用清水浸泡15h；然后用0.5％濃度高錳酸鉀溶液消毒10min，不斷攪拌，用清水沖洗干凈，再用75％酒精浸泡30s，用清水沖洗3-5遍；再次用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和燒杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀輕輕剝去種皮，剝完后，將完整的種胚放入消毒后的燒杯中，用流水沖洗1h；最后接種前，要在超凈工作臺上，再用70％酒精浸泡種子10s，用無菌水沖洗3遍；然后用0.1％濃度升汞溶液(hgcl)進行消毒，消毒時間為5min，同方向搖晃，用無菌水沖洗5遍，每次保持1min。
文冠果種子用中性洗滌劑主要成分是烷基磺酸鈉和脂肪醇醚硫酸鈉。
與現有技術的相比，本發明一種以文冠果成熟胚為外植體的不定芽誘導方法的有益效果是：此方法將文冠果成熟胚為為外植體，在不定芽誘導培養基中進行誘導，通過直接途徑進行不定芽的誘導，避免了通過間接途徑(愈傷組織途徑)產生不定芽的變異可能，同時，還能有效提高文冠果成熟胚不定芽的分化率。
具體實施方式
為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
實施例1
1、外植體的處理與消毒
(1)將文冠果種子用中性洗滌劑，用中性洗滌劑主要成分是烷基磺酸鈉和脂肪醇醚硫酸鈉，飽和液浸泡10min，同方向攪拌，然后用清水沖洗干凈，再用清水浸泡15h；
(2)用0.5％濃度高錳酸鉀溶液消毒10min，不斷攪拌，用清水沖洗干凈，再用75％酒精浸泡30s，用清水沖洗3-5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和燒杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀輕輕剝去種皮，剝完后，將完整的胚放入消毒后的燒杯中，用流水沖洗1h；
(4)接種前，要在超凈工作臺上，再用70％酒精浸泡種胚10s，用無菌水沖洗3遍；然后用0.1％濃度升汞溶液(hgcl)進行消毒，消毒時間為5min，同方向搖晃，用無菌水沖洗5遍，每次保持1min。
消毒完畢后即可接種在事先配制好的不定芽誘導培養基上。
2、誘導培養基
誘導培養基的配方為：ms+6-ba1.0mg/l+tdz0.05mg/l+naa0.01mg/l，誘導培養基需提前配制。
3、接種方法
將按照上述消毒方法消毒后的種子，在超凈工作臺上進行無菌操作。將大子葉的先端用消毒手術刀切除，將大子葉背面朝下接種在事先配制好的不定芽誘導培養基中進行誘導。
4、培養條件
接種完成后，暗培7天后，轉至光照時間為13h，光照強度為2000-3000lux，溫度為25±2℃，空氣濕度為30-40％的條件下培養，30天后統計分化率。
實施例2
1、外植體的處理與消毒
(1)將文冠果種子用中性洗滌劑，用中性洗滌劑主要成分是烷基磺酸鈉和脂肪醇醚硫酸鈉，飽和液浸泡12min，同方向攪拌，然后用清水沖洗干凈，再用清水浸泡17h；
(2)用0.5％濃度高錳酸鉀溶液消毒10min，不斷攪拌，用清水沖洗干凈，再用75％酒精浸泡40s，用清水沖洗4-5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和燒杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀輕輕剝去種皮，剝完后，將完整的胚放入消毒后的燒杯中，用流水沖洗1.5h；
(4)接種前，要在超凈工作臺上，再用70％酒精浸泡種胚10s，用無菌水沖洗4遍；然后用0.1％濃度升汞溶液(hgcl)進行消毒，消毒時間為5min，同方向搖晃，用無菌水沖洗6遍，每次保持1min。
2、誘導培養基
誘導培養基配方：ms+6-ba1.0mg/l+tdz0.05mg/l+naa0.01mg/l，誘導培養基需提前配制。
3、接種方法
將按照上述消毒方法消毒后的種胚，在超凈工作臺上進行無菌操作。將大子葉的先端用消毒手術刀切除，將大子葉背面朝下接種在事先配制好的不定芽誘導培養基中進行誘導。
4、培養條件
接種完成后，暗培7天后，轉至光照時間為13h，光照強度為1500lux，溫度為25±2℃，空氣濕度為30-40％的條件下培養，30天后統計分化率。
實施例3
1、外植體的處理與消毒
(1)將文冠果種子用中性洗滌劑，用中性洗滌劑主要成分是烷基磺酸鈉和脂肪醇醚硫酸鈉，飽和液浸泡15min，同方向攪拌，然后用清水沖洗干凈，再用清水浸泡20h；
(2)用0.5％濃度高錳酸鉀溶液消毒10min，不斷攪拌，用清水沖洗干凈，再用75％酒精浸泡45s，用清水沖洗5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和燒杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀輕輕剝去種皮，剝完后，將完整的種胚放入消毒后的燒杯中，用流水沖洗2h；
(4)接種前，要在超凈工作臺上，再用70％酒精浸泡種胚10s，用無菌水沖洗3-5遍；然后用0.1％濃度升汞溶液(hgcl)進行消毒，消毒時間為5min，同方向搖晃，用無菌水沖洗8遍，每次保持1min。
消毒完畢后即可接種在事先配制好的不定芽誘導培養基上。
2、誘導培養基
誘導培養基配方：ms+6-ba1.0mg/l+tdz0.05mg/l+naa0.01mg/l，誘導培養基需提前配制。
3、接種方法
將按照上述消毒方法消毒后的種胚，在超凈工作臺上進行無菌操作。將大子葉的先端用消毒手術刀切除，將大子葉背面朝下接種在事先配制好的不定芽誘導培養基中進行誘導。
4、培養條件
接種完成后，暗培7天后，轉至光照時間為13h，光照強度為3000lux，溫度為25±2℃，空氣濕度為30-40％的條件下培養，30天后統計分化率。
以上方法可使文冠果成熟胚的分化率達到77.5％。