一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法。
【背景技術】
[0002]薰衣草是異花授粉植物，由于該群體的復雜異質性，后代總是出現性狀分離，表現出多樣性，優良性狀難以穩定地遺傳下去，這就是目前我國薰衣草品種易混雜、退化的根本原因。薰衣草的常規育種往往為了獲得較穩定的純合后代和保證選擇效果，必須在適當控制授粉的條件下，進行多次選擇，而且異花授粉植物不耐自交，自交會導致生活力顯著衰退，因而育種難度較大、且耗時長，種質性狀不穩定。運用多倍體育種技術使植物染色體加倍后，通過提高薰衣草的生物學產量來達到提高其精油產量的目的，是目前在國際上應用比較廣泛，適用于精油類薰衣草的育種方法，同時為了獲得較穩定的純合后代和保證選擇效果，目前最直接、快捷的方法是運用組培快繁技術對選擇出的多倍體株系直接進行無性繁殖，避免種子及扦插繁殖種苗的種質變異，從而可獲取大量的多倍體薰衣草優質種苗。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于，提供一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法，該方法利用新疆薰衣草優選優株的無菌苗莖段為材料，通過在培養基中加入不同濃度秋水仙素進行誘導處理，使植株加倍后，再運用倍性體鑒定技術進行鑒定，獲得多倍體的新疆薰衣草植株。該方法提供了誘導多倍體的最佳秋水仙素濃度、處理時間、處理溫度以及用于倍性鑒定的方法。本方法可快速實現新疆薰衣草新品種選育，縮短育種周期，進而有效提高新疆薰衣草優質種苗的培育速率，克服新疆薰衣草在常規育種中易出現的性狀分離，優良性狀難以穩定地遺傳下去，培育出的新品種易混雜、退化等問題。
[0004]本發明所述的是一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法，按下列步驟進行:
a、選擇健壯的薰衣草植株莖尖，用濃度為5%的洗衣粉水溶液攪動洗滌，流水條件下沖洗2_4h，晾干后放置備用；
b、將步驟a中清洗好的莖尖置于濃度75%的酒精溶液20%+0.1%升汞溶液80%+吐溫80 2-3滴混合液中消毒7min,再用無菌水沖洗4_5次，用滅菌濾紙吸干水分后，接種于MS+BA1.0mg/L固體培養基中進行無菌苗誘導培養；
C、將步驟b中萌發生長的無菌苗切莖段后，接種于含有濃度為2% 二甲基亞砜和濃度為0.20%秋水仙素的誘導固體培養基MS+BA1.0mg/L上處理l_3d，培養溫度25°C，光照強度2000LX，光照時間12h ；
d、將步驟c中處理過的莖段及時轉入MS+BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L的增殖固體培養基中，培養25d，培養溫度24°C，光照強度2000LX，光照時間12h ;
e、將步驟d中增殖的苗切成3-4芽一叢，轉接至1/2MS+NAA0.5mg/L生根培養基中進行生根培養，培養溫度24°C，光照強度3000LX，光照時間16h ;
f、將步驟e中生長的植株生長到3-4cm，根長出0.5-lcm時，與二倍體對照植株做對比分析，根據二者在外觀形態葉片寬度、厚度、莖粗度及氣孔保衛細胞的大小和密度的差異，初步篩選出多倍體植株；
g、隨機剪取步驟f中初步篩選的植株幼嫩的根尖組織4-6mm，在溫度4°C條件下，用
0.002mol/L 1的8-羥基喹啉預處理4h或飽和對二氯苯水溶液預處理，于溫度4°C條件下用卡諾固定液95%乙醇:冰醋酸體積比=3:1固定24 h，棄去固定液，根尖置于溫度60°C水浴鍋中用I mol ^L1的鹽酸水解9 min，沖洗干凈解離液，用改良苯酚品紅溶液染色20 min，壓片觀察統計根尖染色體，染色體多于對照植株的一倍確定為多倍體植株，或用流式細胞儀進行倍性分析，確定多倍體植株；
1、將步驟g中經檢測培育的多倍體植株洗去根部附著的殘留培養基，定植于草炭土:珍珠巖=2: I的溫室苗床上，栽培完澆透水，噴施50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液進行消毒后，搭建小拱棚，覆上薄膜，每天通風1-2次，通風時間由1min逐漸增加至全天，揭膜前不用再澆水，只是在通風時稍噴一些清水在葉面上，20-25d后逐漸撤去薄膜，進行種苗正常管理，移栽成活率90%。
[0005]本發明所述的一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法，該方法中所述的50%多菌靈可濕性粉劑為市售產品，其中多菌靈為河南省金亮精細化工有限公司生產。
[0006]通過實施本發明具體的
【發明內容】
，可以達到以下效果:
本發明所述的一種多倍體新疆薰衣草植株的培育方法，該方法操作簡單，可快速實現新疆薰衣草新品種選育，縮短育種周期，進而有效提高新疆薰衣草優質種苗的培育速率，克服新疆薰衣草在常規育種中易出現的性狀分離，優良性狀難以穩定地遺傳下去，培育出的新品種易混雜、退化等問題。
【附圖說明】
[0007]圖1為本發明薰衣草C-197多倍體組培叢生苗圖片；
圖2為本發明薰衣草C-197多倍體繼代瓶苗圖片；
圖3為本發明大田移栽的薰衣草74-26多倍體組培苗圖片。
【具體實施方式】
[0008]本發明所述的方法并不限于以下的實施例；同時在下述的說明中，如無特別說明，%皆指m/m質量百分比；本發明中選用的所有試劑、工具和儀器都為本領域熟知市售產品，但不限制本發明的實施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用于本發明。
[0009]實施例1
a、選擇健壯的新疆薰衣草主栽品種C-197植株莖尖，用濃度為5%的洗衣粉水溶液攪動洗滌，流水條件下沖洗2-4h，晾干后放置備用；
b、將步驟a中清洗好的莖尖置于濃度75%的酒精溶液20%+0.1%升汞溶液80%+吐溫80 2滴混合液中消毒7min，再用無菌水沖洗4次，用滅菌濾紙吸干水分后，接種于MS+BA1.0mg/L固體培養基中進行無菌苗誘導培養；
C、將步驟b中萌發生長的無菌苗切莖段后，接種于含有濃度為2% 二甲基亞砜和濃度為0.20%秋水仙素的誘導固體培養基MS+BA1.0mg/L上處理ld，培養溫度25°C，光照強度2000LX，光照時間12h ； d、將步驟c中處理過的莖段及時轉入MS+BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L的增殖固體培養基中，培養25d，培養溫度24°C，光照強度2000LX，光照時間12h圖2 ;
e、將步驟d中增殖的苗切成3芽一叢，轉接至1/2MS+NAA0.5mg/L生根培養基中進行生根培養，培養溫度24°C，光照強度3000LX，光照時間16h圖1 ;
f、將步驟e中生長的植株生長到3cm，根長出0.5cm時，與二倍體對照植株做對比分析，根據二者在外觀形態葉片寬度、厚度、莖粗