尾赤桉201-2多倍體育種方法
【專利摘要】本發明公開了一種尾赤桉201-2多倍體育種方法，包括以下步驟：1）將尾赤桉201-2組培苗的葉片置于質量濃度為0.2%的秋水仙素中浸泡24h；2）將步驟1）得到的經過秋水仙素浸泡處理后的葉片接種于增殖培養基中培養，分化出的不定芽繼代培養后接種到生根培養基中培養，得到尾赤桉201-2多倍體植株。本發明采用秋水仙素浸泡法誘導處理進行多倍體誘導，再結合組織培養技術進行培育，通過研究秋水仙素不同濃度、不同處理時間對多倍體誘導的影響，分析得出合適的誘導方案，培育出尾赤桉201-2多倍體植株。本發明的方法不僅具有經濟方便、誘導作用專一性強、減小毒性等特點，還可以提高多倍體發生頻率，減少嵌合體出現。
【專利說明】尾赤桉201-2多倍體育種方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于植物組織培養【技術領域】，涉及一種尾赤桉201-2多倍體育種方法。
【背景技術】
[0002]桉樹是桃金娘科(Myrtaceae)桉屬(Eucalyptus)植物的統稱，屬常綠高大喬木(少數種為小喬木)，具有生長快、輪伐期短、材質較好、適應能力較強、成長空間寬廣等特點。桉樹樹姿優美，四季常青，生長迅速，有萌芽更新及改善沼澤地的能力，宜作園林綠化樹種；樹葉含芳香油，有殺菌驅蚊作用，可提煉香油；嫩枝和樹皮中含有單寧，可以提煉栲膠；樹皮和木材還可用來造紙漿、建筑、家具等。桉樹喜溫暖氣候，但不耐濕熱，氣候過熱生長不良，畏寒，對低溫特別敏感。如果在_5°C以下2-3天就會產生不同程度的凍害，輕者小枝枯死，重者會全株枯死。其次，生長周期比較長，5-8年才能采伐利用。因此可以通過多倍體人工誘導培育優良品種。
[0003]林木倍性育種是一種重要的培育林木新品種的途徑。經過倍性育種育成的多倍體林木具有“巨大性”，在高產、收獲物優質及抗逆性強等方面比加倍前有顯著提高的表現。李云、馮大領在《木本植物多倍體育種研究進展》中對國內木本植物中的多倍體資源及其誘導途徑及其鑒定方法作了詳細的綜述。秋水仙素是誘導多倍體用的最廣泛又最有效的一種誘導劑，它作用只局限于阻礙處于細胞分裂中期的紡錘絲的形成，而對染色體的結構并無顯著的影響，在遺傳上很少發生其他不利的變異。羅曉丹、朱延林等總結了近年來秋水仙素在木本植物多倍體育種中的應用情況。根據Leran的經驗，染色體數目少、以收獲營養器官為主、異花授粉、多年生習性和可營養繁殖的植物適于通過倍性育種來改良。桉樹在生理特性上符合上述要求，具有通過加倍實現二倍體良種改良的潛力。
[0004]尾赤按201-2 (Eucalyptus urophylla x Eucalyptus cam aldulensis; clone DH_(201-2))是尾葉桉X赤桉的人工雜交種，既具有尾葉桉對土壤的高適應性和強抗病能力特點，又具有赤桉早期速生、耐低溫等優點。綜合表現為樹冠小，樹干筆直高大，材質優，有一定抗病蟲能力和抗臺風能力，耐-3~_5°C的低溫，作為耐寒速生品種在極低溫條件下廣泛栽培仍具有挑戰性。當前林產工業對像桉樹這樣短輪伐期的工業原料林需求量日益增長，苗木供不應求，但是，近年發生的一些病蟲害，像青枯病、流膠病、枯葉病、尺蛾等阻礙桉樹的健康發展。因此，桉樹的抗性培育研究是目前急需解決的問題。
【發明內容】
[0005]有鑒于此，本發明的目的在于提供一種尾赤桉201-2多倍體育種方法，采用組織培養與秋水仙素加倍處理相結合的方式來選育尾赤桉201-2多倍體植株，為桉樹多倍體的育種研究奠定基礎。
[0006]為達到上述目的，本發明提供如下技術方案:
[0007]本發明的尾赤桉201-2多倍體育種方法，包括以下步驟:
[0008]I)將尾赤桉201-2組培苗的葉片置于質量濃度為0.2%的秋水仙素中浸泡24h ；[0009]2)將步驟I)得到的經過秋水仙素浸泡處理后的葉片接種于增殖培養基中培養，分化出的不定芽繼代培養后接種到生根培養基中培養，得到尾赤桉201-2多倍體植株。
[0010]進一步，所述增殖培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加有6-芐氨基嘌呤lmg/L、吲哚乙酸lmg/L和吲哚-3- 丁酸0.5mg/L。
[0011]進一步，所述生根培養基是以1/3MS培養基為基本培養基，并添加有吲哚-3-丁酸
0.5mg/L 和 ABT 生根粉 0.5mg/L。
[0012]進一步，所述步驟I)中，葉片置于秋水仙素中浸泡時于搖床中振蕩，轉速為120r/
mirio [0013]進一步，所述步驟2)中，培養條件為:溫度25±2°C，光照強度15001x，每天光照12h。
[0014]本發明中所述的MS培養基和1/3MS培養基為植物組織培養中常用的基本培養基，其具體配方如下表所示:
【權利要求】
1.尾赤桉201-2多倍體育種方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)將尾赤桉201-2組培苗的葉片置于質量濃度為0.2%的秋水仙素中浸泡24h ； 2)將步驟I)得到的經過秋水仙素浸泡處理后的葉片接種于增殖培養基中培養，分化出的不定芽繼代培養后接種到生根培養基中培養，得到尾赤桉201-2多倍體植株。
2.根據權利要求1所述的尾赤桉201-2多倍體育種方法，其特征在于:所述增殖培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加有6-芐氨基嘌呤lmg/L、吲哚乙酸lmg/L和吲哚-3- 丁酸 0.5mg/L。
3.根據權利要求1所述的尾赤桉201-2多倍體育種方法，其特征在于:所述生根培養基是以1/3MS培養基為基本培養基，并添加有吲哚-3- 丁酸0.5mg/L和ABT生根粉0.5mg/L0
4.根據權利要求1、2或3所述的尾赤桉201-2多倍體育種方法，其特征在于:所述步驟I)中，葉片置于秋水仙素中浸泡時于搖床中振蕩，轉速為120r/min。
5.根據權利要求1、2或3所述的尾赤桉201-2多倍體育種方法，其特征在于:所述步驟2)中，培養條件為:溫度25 ±2°C，光照強度15001x，每天光照12h。
【文檔編號】A01H4/00GK103548688SQ201310532940
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月1日 優先權日:2013年11月1日
【發明者】陳澤雄, 劉奕清 申請人:重慶文理學院