長葉榧的無性繁殖方法
【專利摘要】本發明屬于植物無性繁殖技術領域，具體為一種長葉榧的無性繁殖方法。具體包括：（1）插穗采集與制穗；（2）扦插；（3）扦插后養護管理；（4）移栽后管理。本發明在扦插及生根時，施用復合微生物制劑，該制劑為專門針對長葉榧無性扦插生根的營養制劑，能夠形成良好的微生態系統，有利于植物生長，并形成有益微生物菌群，改善植物根際營養環境，大大促進扦插生根和存活率，具有應用前景。
【專利說明】
長葉榧的無性繁殖方法
技術領域
[0001]本發明屬于植物無性繁殖技術領域，具體涉及常綠小喬木長葉榧的無性繁殖方法。
【背景技術】
[0002]長葉榧(forreja jackii CAa/?)，又名浙榧、加氏榧，屬紅豆杉科榧樹屬，是新生代第三紀殘存的孑遺裸子植物，我國特有的珍貴樹種，國家II級重點保護的野生植物，對研究屬的分類、植物區系對第四紀冰期的氣候響應等均有較重要的意義。此外，長葉榧材質堅硬，有芳香，可制器具。
[0003]長葉榧為常綠小喬木或常為多分枝灌木;枝條輪生或對生，開展或小枝下垂;葉對生，列成二列，質硬，線狀披針形狀，長3-13厘米，寬3-4毫米，先有漸刺狀尖頭，基部楔形，有短柄，上面光綠色，微具2條和不明顯的中脈。雌雄同株，雄球花單生葉腋，具4-8輪、每輪4枚雄蕊。橢圓形或長圓形、基部有交互對生的苞片，具短梗。雌球花成對生于葉，各具2對交互對生的苞片和I枚側生的小苞片，具短梗；胚珠單生，直立，僅I個球花發育。種子全部被肉質假種皮所包，倒卵圓形，長2-3厘米，成熟時紅黃色，被白粉，胚明顯地向內深皺。
[0004]長葉榧樹多生長于濕潤、涼爽的山谷溝邊，山坡陰部闊葉樹林、竹林下和懸崖峭壁的巖隙中。主要分布于我國浙江南部、西部，福建西部、北部，江西省東部、北部和湖北省北部的一些地區，分布范圍比較窄小。地理坐標:東經112°?122°，北瑋26°?32°，其分布北緣在浙江省桐廬縣蘆茨鄉草榧嶺和湖北省保康縣黃化鄉、大水鄉一帶;南緣在福建省泰寧縣梅口鄉；東沿在浙江省仙居縣安嶺鄉石長坑，西至江西省資溪縣和靖安縣國有林場。
[0005]長葉榧分布范圍狹窄，資源稀少，隨著人類活動對自然環境的破壞，野生長葉榧數量逐步降低，而且長葉榧種子成熟期長，天然更新能力較差。采用溫砂貯過冬或直接播種，發芽率僅約0.5-1%。因而急需采取措施加快長葉榧的人工繁育。江蘇省中國科學院植物研究所從20世紀60年代初期即開始長葉榧的引種工作，經過50多年的馴化試驗，長葉榧已適應南京的氣候，現已保存2株來自浙江種源的樹高6米、胸徑達13厘米的大樹，從而將長葉榧的分布區域從原生境向北擴展。
[0006]現有技術中針對長葉榧的扦插繁殖研究非常少，由于長葉榧在野外極為罕見，市場上更適沒有，長葉榧種子成熟期非常長，天然更新能力較差，采用溫砂貯過冬或直接播種，發芽率僅為0.5-1%，此外，長葉榧生長緩慢，對環境的要求高，而且生長極為緩慢，每年生長高度不到I厘米，因此顯得更加珍貴稀有。現有技術的狀況不利用長葉榧的大規模繁殖，因此，研究長葉榧的有效無形繁殖方法可以拯救瀕危植物長葉榧，并使得該物種的生存背景向北推移。現有技術(申請號2013101994490)公開的扦插方法，生根率較低、扦插繁殖周期過長，本申請發明人與中科院合作在現有技術的基礎上進行改進，獲得優異的技術效果O
【發明內容】
[0007]
本發明的目的在于提供一種長葉榧的無性繁殖方法，該方法能保持長葉榧的優良特性，且方法簡單易行，繁殖成活率高，為能大規模應用制備長葉榧苗木提供技術保障。
[0008]本發明提供的一種長葉榧的無性繁殖方法，具體步驟如下:
1、全光照自動噴霧扦插池的建設:選擇光照充足、地勢平坦、通風良好和排水方便的地方建設扦插池。上方設有由時間控制的自動噴霧系統，不鋪遮陽網，為全光照條件。扦插池內包括若干個塑料筐，每個筐內鋪有一紗網，以防止基質漏出。塑料筐寬的方向的下方兩邊墊上磚塊，以方便排水。
[0009]2、扦插基質的制備:扦插池采用馬肝土:紅壤土:草炭土=4:3: 3重量比的混合基質，然后按混合基質總重量的3%加入生物有機肥料，并充分混勻，鋪設厚度為20-22cm。
[0010]3、插穗采集與制穗:扦插最佳時間一般為6月下旬至7月下旬。插穗的采集一般選陰雨天或早上露水未干時進行，從長葉榧種樹上采集當年生粗壯枝，進行制穗，穗條制作加工最好是在室內進行，或在室外陰涼的地方。穗條長度10-12cm，留葉4-6片，下剪口修剪為45度斜切，有利于生根；
將穗條下剪口浸泡在復合微生物制劑中，30min。
[0011]所述復合微生物制劑包括以下重量配比的原料:費氏中華根瘤菌發酵液:黃綠木霉發酵液:假絲酵母菌發酵液:地衣芽孢桿菌發酵液:赤霉素:草炭:磷酸氫二鉀= 4:3:4:3:2:5:2;
所述費氏中華根瘤菌為費氏中華根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01(參見費氏中華根瘤菌HNOl中putA基因的研究，唐美瓊等，2009年)；
所述黃綠木霉為黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)ACCC3224:8 所述假絲酵母菌具體為假絲酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023;
所述地衣芽抱桿菌具體為為地衣芽抱桿菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276(參見 CN101215537A);
所述復合微生物制劑的制備方法為首先將費氏中華根瘤菌、黃綠木霉、假絲酵母菌、地衣芽孢桿菌按照常規方式活化、培養至菌液中活菌數達到18個/克獲得發酵液，將上述發酵液按照4:3:4:3質量比例混合，按照重量配比添加赤霉素、草炭和磷酸氫二鉀即得。
[0012]4、扦插:插穗扦插深度為3-4cm，密度株行距為4 cmX4 cm;插完后澆水，使插穗與基質緊密接觸。
[0013]5、扦插后養護管理:插穗養護條件為全光照，并依據天氣情況調節噴水頻率和噴水時間長短。
[0014]6、移栽后管理:移栽基質為馬肝土:紅壤土:草炭土=4:3:3重量比的混合基質，并在混合基質中按照8%的重量比添加復合微生物制劑，有助于生根成活。小苗前期放置于遮陽網下，以防太陽光灼焦，等30天左右緩苗后，再移至室外，并視氣候狀況，每周噴淋一次透水。此外，及時更換大營養缽，有利于長葉榧根系生長和伸展。
[0015]本發明中，步驟5中，用時間控制的自動噴霧系統進行噴水，其在扦插后的前30天，時間控制噴水要求為:在晴天情況下每10分鐘噴10秒；陰天情況下每20-25分鐘噴10秒;30天后，時間控制噴水要求為:在晴天情況下每20分鐘噴10秒；陰天情況下每40-50分鐘噴10秒。
[0016]本發明的有益效果在于:其方法簡單易行，繁殖成活率高，遺傳性變化小、管理方便，利于大規模繁殖，可以有效拯救瀕危植物長葉榧，并使得該物種的生存背景向北推移。
[0017]對于植物無性繁殖領域，如何利用植物組織分化再生植株，提高植物的繁殖數量，是科學家研究重要的技術重點也是技術難點，本發明的復合微生物制劑為專門針對長葉榧無性扦插生根的營養制劑，其經過大量的調研及實驗，赤霉素的濃度適中，刺激根系細胞的伸展旺盛，搭配費氏中華根瘤菌、黃綠木霉、假絲酵母菌、地衣芽孢桿菌形成一個良好的微生態系統，浸泡后帶入基質中構建有利于植物生長并防治病蟲害的有益微生物菌群，改善植物根際營養環境，其代謝還能加強土壤有機物的分解，各菌種之間合理配伍，共生協調，互不拮抗，微生物分泌根系促生素和抑菌素能夠呵護幼苗根系感染腐霉根腐病、疫霉根腐病、細菌性根腐病和莖基腐病及立枯病、猝倒病等苗期病害，磷酸氫二鉀不斷供給營養，維持扦插苗壯勢頭，極大的提高植株的適應性，提高整個成活率，草炭通氣性好、吸附能力強，保水保肥，有利于微生物活動，增強生物性能，富含有機質、腐殖酸及其他營養成分。
[0018]馬肝土是長江下游地區特有的一種土壤，沙性強，干可固根，濕可保水，透水能力強，最適宜于插穗生根前的水分控制，其缺點是透水能力強，失水過快、容易風干，單一使用會使扦插苗成活后基部失水干枯。紅壤土具有良好的通透性和較大的鹽分平衡能力，草炭土質地松軟易散碎，具有吸氣性，呈微酸性，不具備保水性。本申請發明人經過大量創造性勞動，進行篩選對比實驗，從大量扦插基質中篩選得出馬肝土、紅壤土和草炭土這四種基質按照馬肝土:紅壤土:草炭土=(3-4):3:(2-3)重量比結合使用，最適宜長葉榧生根存活，各基質間互作互應，達到透氣、保濕、固根的效果。既能夠快速促進插穗生根，又可促進扦插成活后植株的生長。利用組合基質培養長葉榧，能夠快速有效的得到長葉榧，解決其短缺的問題。
【具體實施方式】
[0019]實施例1
扦插設施的建設:選擇光照充足、地勢平坦、通風良好和排水方便的地方建設扦插設施。扦插床為55 cmX 36 cmX18 cm的塑料周轉筐，筐底部鋪有一紗網，以防止基質漏出。周轉筐寬的方向的下方兩邊均墊上磚塊，以方便排水。上方80 cm的高度架設由時間控制的自動噴霧系統;上方不鋪遮陽網，為全光照條件。
[°02°]扦插基質:扦插基質的制備:扦插池采用馬肝土:紅壤土:草炭土=4:3: 3重量比的混合基質，然后按混合基質總重量的3%加入生物有機肥料，并充分混勻，鋪設厚度為20-22cm。扦插前用水饒透2次，使基質吸足水分。
[0021]插穗采集與制穗:于2014年7月17日早上，從長葉榧種樹上采集當年生粗壯枝，并將枝條豎插于水桶中，水桶內有深10 Cm的水。采集300根枝條后帶到室內進行制穗，插穗長度10-12 cm，留葉4-6片，下剪口修剪成45度斜切，I根枝條可剪成1-2個插穗，最后共得479個插穗用于扦插，將穗條下剪口浸泡在復合微生物制劑中，30min。
[0022]所述復合微生物制劑包括以下重量配比的原料:費氏中華根瘤菌發酵液:黃綠木霉發酵液:假絲酵母菌發酵液:地衣芽孢桿菌發酵液:赤霉素:草炭:磷酸氫二鉀= 4:3:4:3:2:5:2
所述費氏中華根瘤菌為費氏中華根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01 (參見費氏中華根瘤菌HNOl中putA基因的研究，唐美瓊等，2009年)；
所述黃綠木霉為黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)ACCC3224:8 所述假絲酵母菌具體為假絲酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023;
所述地衣芽抱桿菌具體為為地衣芽抱桿菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276(參見 CN101215537A);
所述復合微生物制劑的制備方法為首先將費氏中華根瘤菌、黃綠木霉、假絲酵母菌、地衣芽孢桿菌按照常規方式活化、培養至菌液中活菌數達到18個/克獲得發酵液，將上述發酵液按照4:3:4:3質量比例混合，按照重量配比添加赤霉素、草炭和磷酸氫二鉀即得。
[0023]扦插:扦插深度為3-4cm，密度株行距為4cm X 4cm。插完后用噴水壺進行澆水，使插穗與基質緊密接觸。
[0024]扦插后養護管理:插穗養護條件為全光照，扦插后的前30天，時間控制噴水要求為:在晴天情況下每10分鐘噴10秒；陰天情況下每20-25分鐘噴10秒。30天后，時間控制噴水要求為:在晴天情況下每20分鐘噴10秒；陰天情況下每40-50分鐘噴10秒。扦插苗在12月移入溫室O
[0025]2015年I月進行生根調查和移栽，其生根率為92.9%，對生根的445株扦插苗進行生根情況調查，每株平均發根數為4.33、平均根長6.03 cm、根粗0.227 cm。較之現有技術(生根率75%，平均根數2.73，根長4.35,根粗0.168)不但節省了時間，減少近3個月的培養，且在生根率和根長、根數等參數上取得顯著的效果。
[0026]移栽基質為馬肝土:紅壤土:草炭土=4:3:3重量比的混合基質，并在混合基質中按照8%的重量比添加復合微生物制劑，有助于生根成活。小苗前期放置于遮陽網下，以防太陽光灼焦，等30天左右緩苗后，再移至室外，并視氣候狀況，每周噴淋一次透水。此外，及時更換大營養缽，有利于長葉榧根系生長和伸展。至2015年3月31日調查，共獲得成活移栽長葉榧435株，移栽成活率為:97.8%。
[0027]經本發明方法獲得的長葉榧植株，長勢強健，抗病，能夠安全過冬，有效解決了長葉榧市場資源的空缺，具有廣闊的應用前景。
【主權項】
1.一種長葉榧的無性繁殖方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (1)扦插基質的制備:扦插池采用混合基質，然后按混合基質總重量的3%加入生物有機肥料，并充分混勻，鋪設厚度為20-22cm; (2)插穗采集與制穗:6月下旬至7月下旬，從長葉榧種樹上采集當年生粗壯枝，進行制穗，穗條長度10-12cm，留葉4-6片，下剪口修剪為45度斜切，有利于生根;再將穗條下剪口浸泡在復合微生物制劑中，30min; (3)扦插:插穗扦插深度為3-4cm，插完后澆水，使插穗與步驟(I)所得扦插基質緊密接觸； (4)扦插后養護管理:插穗養護條件為全光照，并依據天氣情況調節噴水頻率和噴水時間長短； (5)移栽后管理:移栽基質為混合基質，并在混合基質中按照8%的重量比添加復合微生物制劑，有助于生根成活。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合基質由馬肝土:紅壤土:草炭土按照4:3:3的重量比混合而得。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述復合微生物制劑包括以下重量配比的原料:費氏中華根瘤菌發酵液:黃綠木霉發酵液:假絲酵母菌發酵液:地衣芽孢桿菌發酵液:赤霉素:草炭:憐fe氣—■鐘=4: 3:4:3:2:5:2o4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于， 所述費氏中華根瘤菌為費氏中華根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01 ； 所述黃綠木霉為黃綠木霉(aureoviride)ACCC N0.32248 所述假絲酵母菌具體為假絲酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023; 所述地衣芽抱桿菌具體為地衣芽抱桿菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276。5.根據權利要求3-4所述的方法，其特征在于，所述復合微生物制劑的制備方法為:首先將費氏中華根瘤菌、黃綠木霉、假絲酵母菌、地衣芽孢桿菌按照常規方式活化、培養至菌液中活菌數達到18個/克獲得發酵液，將上述發酵液按照4:3:4:3重量配比混合，再添加赤霉素、草炭和磷酸氫二鉀即得。
【文檔編號】A01G17/00GK105875146SQ201610235095
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月18日
【發明人】孫羅軍
【申請人】杭州富陽飛博科技有限公司