專利名稱：一種離體培養藥蒲公英的方法及其專用分化培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種培養藥蒲公英的方法及其專用培養基，特別是涉及一種離體培養藥蒲公英的方法及其專用分化培養基。
背景技術：
藥蒲公英是菊科(Compositae)蒲公英屬(Taraxacum)的多年生草本植物，分布廣泛，是傳統的中藥材，具有清熱解毒、消腫散結等功效，被稱為中藥八大金剛之一。最新研究表明，蒲公英甾醇具有抗腫瘤作用，而且在蒲公英中含量較高，從而使蒲公英成為開發抗癌新藥的又一個努力方向。營養成分分析表明，蒲公英葉片中蛋白質、脂肪、維生素、胡蘿卜素等有機營養成分的含量明顯高于其他常見蔬菜，而且蒲公英還含有豐富的微量元素，其中包括鈣、鐵、硒等人體必需的礦質元素，是一種理想的營養保健蔬菜。
近年來，隨著世界范圍內“崇尚自然，反樸歸真”保健時尚的興起，國內外市場對天然保健品的需求日益增加，以蒲公英開發的健胃劑、利尿劑、美容劑等系列產品深受市場歡迎。用野生蒲公英進行保健已成為發達國家的消費時尚。在“綠色食品”倍受青睞的今天，集食用和藥用于一身的營養保健蔬菜——蒲公英必將成為蔬菜市場的新寵，在給人們帶來健康的同時，也會創造出十分可觀的經濟效益。隨著人們對蒲公英的利用和需求的日益增加，野生蒲公英越來越少，組織培養以其繁殖快的優點而成為蒲公英生產的重要商業途徑。
發明創造內容本發明的目的是提供一種離體培養藥蒲公英的方法及其專用培養基。
本發明所提供的離體培養藥蒲公英的方法，是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ中，培養7-14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉入MS培養基進行生根，培養8-12天得到完整的再生植株。
其中，所述分化培養基優選為MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ，尤其優選為MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/LIAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ；最優選為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
上述方法中采用的培養條件可為溫度20-28℃，光照周期10-14h/14-10h，光照強度1400-1800lx；優選為溫度24-26℃，光照周期12h/12h，光照強度1600lx。
本發明以MS為基本培養基，添加不同的激素成分篩選得到了藥蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)的分化培養基，進而建立了離體培養藥蒲公英的方法，實驗結果表明，利用本發明的方法，可以得到穩定的藥蒲公英植株再生體系，藥蒲公英葉片在本發明的專用培養基中能夠快速高效地再生，平均誘芽數高達15，不僅為藥蒲公英化學成分的研究以及無融合生殖現象的深入研究提供了一個平臺，而且可以快速地進行藥蒲公英的規模化生產，滿足市場需求。
圖1為外植體在培養基1-9中的分化頻率柱狀2為3號培養基中幼葉的形成照片圖3為4號培養基中幼葉的形成照片圖4為8號培養基中幼葉的形成照片具體實施方式
實施例1、離體培養藥蒲公英藥蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)種子(購自意大利SAIS公司)經常規消毒(70％酒精消毒30s，10％NaClO消毒6min，無菌水沖洗4次)后接種在1/2MS培養基，黑暗中培養。4天后多數種子已萌發，轉移至光下培養，1月后成苗，苗高6-8cm。
將上述無菌苗葉片切成0.5cm×0.5cm的小塊，接種到分化培養基上，誘導器官發生。為了得到最佳誘導培養基，葉片外植體以40-60塊為一組，分別接種到不同培養基(培養基配方如表1所示)。
實驗結果如圖1所示，表明藥蒲公英葉片外植體接種2周后，在3號培養基(MS+0.2mg/L IAA+4mg/L 6-BA)和4號培養基(MS+0.2mg/L IAA+1mg/L TDZ)中均分化出大量叢生芽，分化頻率(發生分化的外植體數/接種的外植體總數)分別為65.21％和71.56％，平均誘芽數(形成的不定芽數目/接種的外植體數)(表2)為12-15，其次是8號培養基(平均誘芽數為9)。由于3號培養基中外植體的分化高峰比4號培養基滯后3-4天，因此，4號培養基是藥蒲公英分化的最佳培養基。雖然1和9號培養基中分化頻率也比較高，但它們的平均誘芽數僅為3-5個，遠小于3、4號培養基(平均幼芽數12-16)。外植體接種3周后，已經由芽點形成了幼葉(圖2、圖3和圖4)。將這些小植株分離后接種在MS基本培養基中，10天后生根，形成完整的再生植株。
表1.藥蒲公英分化培養基
注基本培養基是MS+3％蔗糖+0.8％瓊脂，pH5.8其中，上述整個組織培養過程中，培養條件為溫度(25±1)℃，光照周期12h/12h，光照強度1600lx。
表2.藥蒲公英在1-9號分化培養基中的分化情況
權利要求
1.一種離體培養藥蒲公英的專用培養基，其配方為MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ。
2.根據權利要求1所述的專用培養基，其特征在于所述培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
3.根據權利要求2所述的專用培養基，其特征在于所述培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
4.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于所述分化培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
5.一種離體培養藥蒲公英的方法，是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-2mg/L TDZ中，培養7-14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉入MS培養基進行生根，培養8-12天得到完整的再生植株。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述分化培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述分化培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述分化培養基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
9.根據權利要求5-8中的任意一項所述的方法，其特征在于所述方法中采用的培養條件為溫度20-28℃，光照周期為10-14h/14-10h，光照強度1400-1800lx。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于所述培養條件為溫度24-26℃，光照周期12h/12h，光照強度1600lx。
全文摘要
本發明公開了一種離體培養藥蒲公英的方法及其專用培養基。該方法是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養基MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－5.0mg/L 6－BA或MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－2mg/L TDZ中，培養7－14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉入MS培養基進行生根，培養8－12天得到完整的再生植株。實驗結果表明，藥蒲公英葉片在本發明的專用培養基中能夠快速高效地再生，平均誘芽數高達15，可以快速地進行藥蒲公英的規模化生產，滿足市場需求。
文檔編號C12N5/04GK1667117SQ200410006600
公開日2005年9月14日 申請日期2004年3月11日 優先權日2004年3月11日
發明者李銀心, 陳華 申請人:中國科學院植物研究所