專利名稱：從發酵液中提取透明質酸的方法
從發酵液中提取透明質酸的方法 技術領域 本發明涉及一種從發酵液中提取透明質酸的方法。
背景技術：
目前，透明質酸的生產方法逐漸由動物組織提取法轉向微生物發
酵法。細菌發酵法成為透明質酸生產的發展方向
發明內容
本發明目的是提供一種簡單、快速的從發酵液中提取透明質酸的 方法。
本發明方法包括下列步驟
a) 、透明質酸粗提 發酵液經4000rpm離心20min，向溶液中加入 0.15mol/L的氯化鈉溶液，待透明質酸從溶液中析出后加入1-3倍體積95%的乙 醇，透明質酸完全沉淀，再經超濾或分子篩進行脫鹽；所用的鹽選自醋酸鉀、 醋酸氨或氯化鈉。
b) 、氯代十六烷基吡啶絡合 沉淀用0.15mol/L的氯化鈉水溶液溶解，再 加入10%氯代十六烷基吡啶水溶液，形成透明質酸一氯代十六烷基吡啶絡合沉 淀，然后離心；
c) 、透明質酸精提 將絡合沉淀置于0.4mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離至 沉淀溶解，然后加三倍體無水乙醇沉淀，沉淀用丙酮脫水后真空干燥得透明質 酸精品。
本發明方法具有不受原料資源限制，成本低，產量高，可獲得較高分子量 的透明質酸，分離純化工藝簡便，快速，易于大規模生產等特點。
具體實施例方式
下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方 式限制本發明。 實施例1:
a) 新鮮發酵液經4000rpm離心20min，向溶液中加入0.15mol/L氯化鈉溶液， 加入2倍體積95%的乙醇，透明質酸完全沉淀，再經超濾或分子篩進行脫鹽；
b) 沉淀用O.15mol/L的氯化鈉水溶液溶解，再加入10%氯代十六烷基吡啶 水溶液，形成透明質酸一氯代十六烷基吡啶絡合沉淀，然后離心；
c) 將絡合沉淀置于0.4mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離至沉淀溶解，然后加三
倍體無水乙醇沉淀，沉淀用丙酮脫水后真空干燥得透明質酸精品。透明質酸含 量用咔唑法測定。
結果顯示，發酵液廢液中未檢出透明質酸，透明質酸回收率為98%。
實施例2:
新鮮發酵液經4000rpm離心20min，向溶液中加入0.15mol/L氯化鈉溶液， 加入1倍體積95%的乙醇，透明質酸完全沉淀，再經超濾或分子篩進行脫鹽； 沉淀用0.15mol/L的氯化鈉水溶液溶解，再加入10%氯代十六烷基吡啶水溶液， 形成透明質酸一氯代十六垸基吡啶絡合沉淀，然后離心；將絡合沉淀置于 0.4mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離至沉淀溶解，然后加三倍體無水乙醇沉淀，沉 淀用丙酮脫水后真空干燥得透明質酸精品。結果顯示，發酵液廢液中檢出透明 質酸，透明質酸回收率為88%。
實施例3:
新鮮發酵液經4000rpm離心20min，向溶液中加入0.15mol/L氯化鈉溶液， 加入3倍體積95%的乙醇，透明質酸完全沉淀，再經超濾或分子篩進行脫鹽； 沉淀用0.15mol/L的，氯化鈉水溶液溶解，再加入10%氯代十六烷基吡啶水溶 液，形成透明質酸一氯代十六烷基吡啶絡合沉淀，然后離心；將絡合沉淀置于 0.4mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離至沉淀溶解，然后加三倍體無水乙醇沉淀，沉 淀用丙酮脫水后真空干燥得透明質酸精品。結果顯示，發酵液廢液中未檢出透 明質酸，透明質酸回收率為97%。
權利要求
1.一種從發酵液中提取透明質酸的方法，其特征在于它包括下列步驟a)、透明質酸粗提 發酵液經4000rpm離心20min，向溶液中加入0.15mol/L的氯化鈉溶液，待透明質酸從溶液中析出后加入1-3倍體積95％的乙醇，透明質酸完全沉淀，再經超濾或分子篩進行脫鹽；b)、氯代十六烷基吡啶絡合 沉淀用0.15mol/L的氯化鈉水溶液溶解，再加入10％氯代十六烷基吡啶水溶液，形成透明質酸-氯代十六烷基吡啶絡合沉淀，然后離心；c)、透明質酸精提 將絡合沉淀置于0.4mol/L氯化鈉溶液中攪拌解離至沉淀溶解，然后加三倍體無水乙醇沉淀，沉淀用丙酮脫水后真空干燥得透明質酸精品。
2. 根據權利要求1所述的從發酵液中提取透明質酸的方法，其特征在于 所述步驟a)中所用的鹽選自醋酸鉀、醋酸氨或氯化鈉。
全文摘要
本發明公開了一種簡單、快速的從發酵液中提取透明質酸的方法。包括下列步驟a)透明質酸粗提，b)，c)透明質酸精提。本發明方法具有不受原料資源限制，成本低，產量高，可獲得較高分子量的透明質酸，分離純化工藝簡便，快速，易于大規模生產等特點。
文檔編號C12P19/04GK101357955SQ20071001852
公開日2009年2月4日 申請日期2007年8月1日 優先權日2007年8月1日
發明者周劍平, 暉 楊, 王治業, 魏甲乾 申請人:甘肅省科學院生物研究所