專利名稱：余甘子提取物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及余甘子提取技術，具體是余甘子提取物及其制備方法與應用。
背景技術：
食品中油脂的氧化將導致產品的酸敗變質，不僅降低了食物的營養價值，有些氧化產物還具有毒副作用，給人類健康帶來了極大的威脅。因此如何降低油脂氧化是食品和醫學領域中一個重要課題，而防止油脂氧化酸敗最常用的手段是添加抗氧化劑。
現有的抗氧化劑主要是人工合成抗氧化劑，如沒食子酸丙酯(PG)、丁羥基茴香醚(BHA)和二丁基羥基甲苯(BHT)等雖然作用效果顯著，但安全性存在著一些問題，畜禽攝入后對機體產生一定的毒性，動物實驗表明它們有一定的毒性和致癌作用。而一些天然的抗氧化劑如Vc、VE及多酚類物質等，雖然安全性高，但使用效果不佳或在油脂中存在溶解性差等問題。
發明內容
本發明的目的在于針對現有產品和技術中存在的缺陷，提供一種余甘子提取物的制備方法，得到的提取物可用作天然抗氧化劑，用于食用動、植物油和含油食品中。
本發明的目的還在于提供所述方法制備的余甘子提取物。
本發明的目的還在于提供所述余甘子提取物的應用。
余甘子(Phyllanthus emblica)系大戟科(Euphorbiaceae)葉下珠屬(Phyllanthus)熱帶、亞熱帶落葉小喬木的果實，俗名滇橄欖、油甘子、庵摩勒、庵婆羅果、喉甘子等。余甘子起源于印度和緬甸，主要分布于印度、中國、緬甸、馬來西亞、巴基斯坦等地，以中國的產量最多，云南、廣西、廣東、福建、貴州、海南等省區都有野生余甘林分布。截止2002年，我國余甘子野生及栽培林面積大約在60 000hm2以上，野生余甘子在福建、云南、貴州、廣西等省每年合計產量為100 000t。由于野生余甘林大多在山區，生產條件十分落后，對野生余甘子果實的開發利用率很低，約90％以上的余甘子果實從樹上掉到地上爛掉，造成資源浪費。
余甘果中含有豐富的超氧化歧化酶(SOD)、Vc、多酚類物質及多糖等活性物質，具有抗炎、抗腫瘤、抗突變、抗高血壓、降血脂、降血壓、保肝等功效，余甘子超強的抗氧化活性是其生理功能的基礎，而余甘子多酚是主要的抗氧化物質。
本發明利用余甘子的抗氧化特性，對其中多酚類物質進行提取，得到具有抗氧化性的提取物，用作食用天然抗氧化劑，取代現有人工合成的食品添加劑。
本發明的余甘子提取物的制備方法方法，包括如下步驟(1)將余甘子除雜、干燥、粉碎、過篩，制成余甘子干粉；(2)以水與乙醇體積比為50∶100的比例配制提取液；(3)按固液比1∶5～10將余甘子干粉浸泡于提取液中，然后放入微波萃取器進行微波輻射5～10min，功率為490～750W，微波壓力為0.10～0.15MPa；(4)抽濾，減壓蒸餾得粗提物；(5)將粗提物配制成2～5g/L溶液，按1克XDA-5大孔樹脂加5～10毫升該溶液配制，在15～30℃振蕩吸附達到平衡；按1克樹脂與8～20毫升體積濃度為70％乙醇在20～40℃進行樹脂解吸2～4小時；(6)步驟(5)處理得到的洗脫液減壓蒸餾，回收乙醇，得到濃縮液，加入相當于濃縮液3～5倍體積的石油醚，分層后，棄去上層的石油醚相，保留水相；(7)加入相當于水相3～5倍體積的乙醚進行萃取，分層后，棄去上層的乙醚相，保留水相；(8)加入相當于步驟(7)得到的水相3～5倍體積的乙酸乙酯進行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留乙酸乙酯相；(9)將乙酸乙酯相減壓蒸餾至干，回收乙酸乙酯，得余甘子提取物。
作為優選方案，步驟(3)中，所述浸泡是在35～45℃下浸泡2～4小時。
步驟(4)、(6)、(9)中，在40℃下抽濾，在壓力0.07～0.08MPa下減壓蒸餾。
步驟(1)中所述的干燥是在45℃通風干燥8小時，粉碎后過60～80目篩。
所述微波萃取裝置可采用Microwave laboratory systems，意大利Milestone公司生產；本發明與現有技術相比具有如下優點1、提供了一種新型的天然抗氧化劑——余甘子提取物，可食用動、植物油和含油食品的添加劑；2、本發明方法得到的余甘子提取物與天然抗氧化劑維生素C(Vc)、維生素E(VE)和化學合成抗氧化劑特丁基對苯二酚(TBHQ)進行比較，結果顯示余甘子提取物清除DPPH自由基的活性是Vc的2倍，是TBHQ的1～2倍；對脂質過氧化活性的抑制力是VE的2～8倍，是TBHQ的1～6倍；在花生油中的抗過氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍；在豬油中的過氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍。
具體實施例方式
實施例1(1)余甘子鮮果500克，45℃通風干燥8小時，粉碎后過60目篩得到余甘子干粉100克；(2)以水與乙醇體積比為50∶100的比例配制提取液；(3)按固液比1∶5將余甘子干粉浸泡在提取液中35℃下浸泡2小時，然后放入微波萃取器進行微波輻射5min，功率為490W，微波壓力為0.10MPa；(4)提取液在40℃下抽濾，在壓力0.07Mpa下減壓蒸餾得粗提物；(5)將粗提物配制成2g/L溶液，按1克XDA-5大孔樹脂加5毫升該溶液，在15℃振蕩吸附達到平衡；按1克樹脂與8毫升體積濃度為70％乙醇在20℃下解吸2小時，得洗脫液；(6)步驟(5)處理得到的洗脫液在40℃，壓力0.07Mpa下減壓蒸餾回收乙醇，得到濃縮液，加入相當于濃縮液3倍體積的石油醚，分層后，棄去上層的石油醚相，保留水相；(7)加入相當于水相3倍體積的乙醚進行萃取，分層后，棄去上層的乙醚相，保留水相；(8)加入相當于步驟(7)得到的水相3倍體積的乙酸乙酯進行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留乙酸乙酯相；(9)將乙酸乙酯相在40℃，壓力0.07Mpa下減壓蒸餾至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物10.6克，提取物中多酚含量達94％。
實施例2(1)余甘子鮮果500克，45℃通風干燥8小時，粉碎后過70目篩得到余甘子干粉100克；(2)以水與乙醇體積比為50∶100的比例配制提取液；(3)按固液比1∶8將余甘子干粉浸泡在提取液中40℃下浸泡3小時，然后放入微波萃取器進行微波輻射8min，功率為550W，微波壓力為0.13MPa；(4)提取液在40℃下抽濾，在壓力0.075Mpa下減壓蒸餾得粗提物；(5)將粗提物配制成3g/L溶液，按1克XDA-5大孔樹脂加8毫升該溶液，在20℃振蕩吸附達到平衡；按1克樹脂與12毫升體積濃度為70％乙醇在30℃下解吸3小時；(6)步驟(5)處理得到的洗脫液在40℃，壓力0.075Mpa下減壓蒸餾回收乙醇，得到濃縮液，加入相當于濃縮液4倍體積的石油醚，分層后，棄去上層的石油醚相，保留水相；(7)加入相當于水相4倍體積的乙醚進行萃取，分層后，棄去上層的乙醚相，保留水相；(8)加入相當于步驟(7)得到的水相4倍體積的乙酸乙酯進行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留乙酸乙酯相；(9)將乙酸乙酯相在40℃，壓力0.075Mpa下減壓蒸餾至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物11.2克，提取物中多酚含量達95％。
實施例3(1)余甘子鮮果500克，45℃通風干燥8小時，粉碎后過80目篩得到余甘子干粉100克；(2)以水與乙醇體積比為50∶100的比例配制提取液；(3)按固液比1∶10將余甘子干粉浸泡在提取液中45℃下浸泡4小時，然后放入微波萃取器進行微波輻射10min，功率為750W，微波壓力為0.15MPa；(4)提取液在40℃下抽濾，在壓力0.08Mpa下減壓蒸餾得粗提物；(5)將粗提物配制成5g/L溶液，按1克XDA-5大孔樹脂加10毫升該溶液，在30℃振蕩吸附達到平衡；按1克樹脂與20毫升體積濃度為70％乙醇在40℃下解吸4小時；(6)步驟(5)處理得到的洗脫液在40℃，壓力0.08Mpa下減壓蒸餾回收乙醇，得到濃縮液，加入相當于濃縮液4倍體積的石油醚，分層后，棄去上層的石油醚相，保留水相；(7)加入相當于水相5倍體積的乙醚進行萃取，分層后，棄去上層的乙醚相，保留水相；(8)加入相當于步驟(7)得到的水相5倍體積的乙酸乙酯進行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留乙酸乙酯相；(9)將乙酸乙酯相在40℃，壓力0.08Mpa下減壓蒸餾至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物11.3克，提取物中多酚含量達93％。
測定余甘子提取物的抗氧化性，測定方法如下1)取1mL樣品液，加入1mM DPPH甲醇溶液1mL，室溫放置30min，測定517nm處吸光值。以1mL溶劑替代提取液測定空白吸光值(A空白)。
DPPH清除率(％)＝(1-A樣品/A空白)×1002)0.5mL樣品的甲醇溶液(6∶4v/v)加入亞油酸乳濁液2.5mL，2.5mL磷酸鹽緩沖液(0.2M，pH 7.0)，37℃保溫4h，取0.1mL加入5mL75％乙醇，0.1mL30％的硫氰酸銨，0.1mL20mM的氯化亞鐵的3.5％HCL溶液，室溫下放置3min，磷酸鹽緩沖液調零，以不加樣品提取物為對照，500nm下測定吸光度。
抗脂質過氧化力(％)＝(1-A樣品)/A對照×1003)以30mL升三氯甲烷-冰乙酸混合溶解樣品，再加入1.00mL飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖30s，然后于暗處放置3min。取出加75mL雙蒸水，搖勻，立即用硫代硫酸鈉標準滴定溶液(0.002mol/L)滴定，至淡黃色時，加1mL淀粉指示劑，繼續滴定至藍色消失為終點，取相同量三氯甲烷-冰乙酸溶液、碘化鉀溶液、水，按同一方法，用TBHQ、VE做對照試驗。采用烘箱法高溫(65℃)誘導豬油和花生油(30g)發生過氧化反應，將已添加好抗氧化物(0.02％)的油脂置于恒溫干燥箱中，每隔5天測定其過氧化值。過氧化值按下列公式計算POV(meq/kg)＝C(V1-V0)×1000/MV1-用于測定的硫代硫酸鈉標準滴定溶液的體積，mL；V0-為空白實驗消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液的體積，mL；C-硫代硫酸鈉標準滴定溶液的濃度，mol/L；M-樣品質量，g通過DPPH自由基清除活性，抗脂質過氧化活性，及油脂過氧化能力的測定，對余甘子抗氧化劑的抗氧化性能進行測定，并與天然抗氧化劑維生素C(Vc)、維生素E(VE)和化學合成抗氧化劑特丁基對苯二酚(TBHQ)進行比較。結果見表1～4，其中表1是實施例1得到的余甘子提取物清除DPPH自由基的活性；表2是實施例2得到的余甘子提取物對亞油酸體系的脂質過氧化抑制活性；
表3是實施例3得到的余甘子提取物對花生油POV(meq/kg)值的影響(濃度0.2％)；表4是實施例4得到的余甘子提取物對豬油POV(meq/kg)值的影響(濃度0.2％)。結果顯示余甘子提取物清除DPPH自由基的活性是Vc的2倍，是TBHQ的1～2倍；對脂質過氧化的抑制活性是VE的2～8倍，是TBHQ的1～6倍；在花生油中的抗過氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍；在豬油中的抗過氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍。
表1
表2
表3
表4
權利要求
1.一種余甘子提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將余甘子除雜、干燥、粉碎、過篩，制成余甘子干粉；(2)以水與乙醇體積比為50∶100的比例配制提取液；(3)按固液比1∶5～10將余甘子干粉浸泡于提取液中，然后放入微波萃取器進行微波輻射5～10min，功率為490～750W，微波壓力為0.10～0.15MPa；(4)抽濾，減壓蒸餾得粗提物；(5)將粗提物配制成2～5g/L溶液，按1克XDA-5大孔樹脂加5～10毫升該溶液配制，在15～30℃振蕩吸附達到平衡；按1克樹脂與8～20毫升體積濃度為70％乙醇在20～40℃進行樹脂解吸2～4小時，得洗脫液；(6)步驟(5)處理得到的洗脫液減壓蒸餾，回收乙醇，得到濃縮液，加入相當于濃縮液3～5倍體積的石油醚，分層后，棄去上層的石油醚相，保留水相；(7)加入相當于水相3～5倍體積的乙醚進行萃取，分層后，棄去上層的乙醚相，保留水相；(8)加入相當于步驟(7)得到的水相3～5倍體積的乙酸乙酯進行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留乙酸乙酯相；(9)將乙酸乙酯相減壓蒸餾至干，回收乙酸乙酯，得余甘子提取物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述浸泡是在35～45℃下浸泡2～4小時。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟(4)、(6)、(9)中，在40℃下抽濾，在壓力0.07～0.08Mpa下減壓蒸餾。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中所述的干燥是在45℃通風干燥8小時，粉碎后過60～80目篩。
5.權利要求4所述余甘子提取物在制備食用抗氧化劑中的應用。
全文摘要
本發明涉及余甘子提取物及其制備方法與應用，將余甘子干粉通過微波輔助溶劑萃取得到的原提取液，經過大孔樹脂純化后提取物多酚含量達93％以上。余甘子提取物分別進行乙醚、乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相揮掉溶劑，得到一種以余甘子多酚為主要活性成分的天然抗氧化劑。此天然抗氧化劑與其它天然和合成抗氧化劑(Vc、V
文檔編號A23L3/3463GK101032322SQ200710027398
公開日2007年9月12日 申請日期2007年3月30日 優先權日2007年3月30日
發明者趙謀明, 崔春, 劉曉麗, 趙強忠 申請人:華南理工大學