專利名稱：月季試管開花的方法
技術領域：
本發明涉及月季的栽培方法，具體來說是涉及迷你月季(/ o幼力y6ri血頂i/7J')試管開 花的方法。
技術背景花卉的試管內誘導開花是一種新型的生物技術。試管內開花的植株由于觀賞時間長、觀賞價 值高、管理簡單而深受人們的喜愛，在歐洲花卉市場上十分暢銷。迷你月季是有刺灌木，它 的花多而艷，連續開花能力強，是深受大眾歡迎的盆栽植物之一。但在試管內開花的迷你月 季花色更為鮮艷、開花時間更長、運輸方便、易栽培管理而成為一種新型的室內觀賞花卉， 具有廣闊的巿場前景。目前，國內未見對月季試管開花進行規模生產和專利申請的報道，國 夕卜文獻(Wang G Y， Yuan M F' Hong Y. In vitro flower induction in roses. In Vitro Cellular Developmental Biology - Plant, 2002， 38:513-518.)報道采用的品種不同，所采用 的方法也較復雜。 發明內容本發明的目的在于提供一種簡單的、開花誘導率較高的月季試管開花的方法。 我們通過在生長季節選取生長旺盛的月季的莖尖或帶節莖段為外植體，采用成分獨特培 養基進行組織培養，方法簡單，開花誘導率較高，從而實現了本發明的目的。 本發明月季試管開花的方法，其特征包括以下的步驟-(1) 外植體誘導材料消毒和不定芽誘導在生長季節選取生長旺盛的迷你月季Wo幼 Ar力riA 的莖尖或帶節莖段為外植體，用水沖洗干凈后，先用70% 75%的酒精浸 泡10 30 s，再用0. 1% 0. 2%升汞溶液或1% 2%的次氯酸鈉溶液消毒5 10 min，無菌水沖 洗后，接種到培養基中，在溫度(28士2)。C，光照度1500 2000 lx，光照8 12 h/天， 培養形成不定芽，所述的培養基每升中含有6-芐基嘌呤1.0 2.0 mg,蔗糖20 30g和瓊 脂5 7 g,其余為MS， pH 5. 5 5.8;(2) 不定芽的繼代增殖將歩驟(l)誘導出的不定芽切割后再繼代培養于培養基中，在溫 度(28土2)。C，光照度1500 2000 lx，光照8~12 h/天進行不定芽的增殖，所述的培養 基每升中含有6-芐基嘌呤1.0 2.0mg，萘乙酸O. 1 0.2mg，蔗糖20 30 g和瓊脂5~7 g， 其余為MS, pH 5. 5 5.8;(3) 試管開花誘導當步驟(2)芽高約2 3 cm時,切下接種到開花誘導培養基中，在 溫度(28土2)T，光照度1500 2000 lx，光照8 12 h/天培養，所述的培養基每升中含 有6-芐基嘌呤0. 1 0.3 mg，萘乙酸O. 1 0.2mg，蔗糖20 40 g和瓊脂5 7 g，其余為 MS， pH 5. 5 5. 8。步驟(l)所述的無菌水沖洗次數為4 5次，所述的莖尖和帶節莖段最好切成長度為約 lcm，培養15 20天能在外植體上形成不定芽，消毒成功率80% 90%。步驟(2)中的一個繼代增殖周期為30 35天，每一個繼代增殖周期后的增殖倍數為3 5 倍，繼代10代后仍能保持增殖率。步驟(3)中培養至開花時間一般是40 50天，45天左右開花率可達60%以上，苗高約7 8厘米。上述培養基中的MS為國際通用的培養基，其成分和配制方法參看文獻(譚文澄、戴策剛 主編.觀賞植物組織培養技術.北京中國林業出版社，1991.)。本發明月季試管開花的方法培育速度快，消毒方法簡單、消毒成功率在80% 90%，培養 基成分獨特且簡單實惠，開花誘導率較高，花率可達60%以上，花色鮮艷。
具體實施方式
以下的實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。 實施例1:在生長季節選取生長旺盛的迷你月季Wosa力y6rjVa 的莖尖或帶節莖段為外植 體，在自來水下沖洗干凈后，先在70%酒精中浸泡10 3，再用0.2%升汞溶液消毒5分鐘，無 菌水沖洗4次，切成lcm左右，接種到培養基(每升含有6-芐基嘌呤2.0mg，，蔗糖30g 和瓊脂7 g，其余為MS， pH5.5)，在溫度28。C，光照度1500 1x，光照12 h/天，消 毒成功率80%， 15天左右能在外植體上形成不定芽。將誘導出的不定芽切割后再繼代培養在 培養基(每升含有6-芐基嘌呤l.Omg，萘乙酸0.2mg，蔗糖30g和瓊脂7g，其余為MS， pH 5.5),在溫度28 °C，光照度1500 lx，光照12小時/天進行不定芽的增殖，30天為1 個繼代增殖周期， 一個繼代增殖周期后的增殖倍數為3倍，能多次繼代，繼續繼代后增殖倍 數略有升高。當芽高約3 cm時，切下接種到開花培養基(每升含有6-芐基嘌呤0.1 mg， 萘乙酸O. lmg，蔗糖30g和瓊脂7g，其余為MS， pH 5. 5)，在溫度28。C，光照度1500 1x， 光照12 h/天，培養48天時開花率達65%，苗高約7 8厘米。實施例2:在生長季節選取生長旺盛的迷你月季(/to幼力/6ri^ ck肌'/7力的莖尖或帶節莖段為外植 體，在自來水下沖洗干凈后，先在75%酒精中浸泡30 s，再用0. 1%升汞溶液消毒10 min，無 菌水沖洗5次，切成長lcm左右，接種到培養基(每升含有6-芐基嘌呤l.Omg，蔗糖30g 和瓊脂7 g，其余為MS， pH 5.5)，在溫度26 。C,光照度2000 lx，光照8 h/天，消毒 成功率90%， 20天在外植體上形成不定芽。將誘導出的不定芽切割后再繼代培養在培養基(每 升含有6-芐基噤呤2.0 mg,萘乙酸O. lmg，蔗糖30g和瓊脂7g，其余為MS， pH 5. 5)， 在溫度26。C，光照度2000 lx，光照8h/天，進行不定芽的增殖，30天為1個繼代增殖
周期， 一個繼代增殖周期后的增殖倍數為5倍，能多次繼代。當芽高約3 cm時,切下接種到 開花培養基(每升含有6-芐基嘌呤0.2 mg，萘乙酸0.2mg，蔗糖40g和瓊脂7 g，其余 為MS， pH5.5)，在溫度26。C，光照度2000 1x，光照8h/天，培養50天時開花率達70%， 苗高約7 8厘米。 實施例3:在生長季節選取生長旺盛的迷你月季(^^a/^6rj'A 肌'/7力的莖尖或帶節莖段為外植 體，在自來水下沖洗干凈后，先在7(W酒精中浸泡30s，再用1.5%次氯酸鈉溶液溶液消毒10 min,無菌水沖洗5次，切成長約lcm，接種到培養基(每升含有6-芐基嘌呤1.5mg，蔗糖 20g和瓊脂5g，其余為MS， pH5.8)，在溫度30 T，光照度1800 lx，光照10 h/天， 消毒成功率90%， 18天在外植體上形成不定芽。將誘導出的不定芽切割后再繼代培養在培養 基(每升含有6-節基嘌呤1.5mg，萘乙酸0. 15mg，蔗糖20g和瓊脂5g，其余為MS，pH5.8)， 在溫度30。C，光照度1800 lx，光照10h/天，進行不定芽的增殖，35天為1個繼代增殖 周期， 一個繼代增殖周期后的增殖倍數為4倍，可進行多次繼代。當芽高約2cm時，切下接 種到開花培養基(每升含有6-芐基嘌呤0.3 mg，萘乙酸0.2mg，蔗糖20g和瓊脂5g，其 余為MS， pH 5.8)，在溫度30 。C，光照度1800 lx，光照10 h/天，培養45天時開花率 達60%，苗高約7 8厘米。
權利要求
1.月季試管開花的方法，其特征包括以下的步驟(1)外植體誘導材料消毒和不定芽誘導在生長季節選取生長旺盛的迷你月季(Rosahybrida cv.mini)的莖尖或帶節莖段為外植體，用水沖洗干凈后，先用70％～75％的酒精浸泡10～30s，再用0.1％～0.2％升汞溶液或1％～2％的次氯酸鈉溶液消毒5～10min，無菌水沖洗后，接種到培養基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天，培養形成不定芽，所述的培養基每升中含有6-芐基嘌呤1.0～2.0mg，蔗糖20～30g和瓊脂5～7g，其余為MS，pH 5.5～5.8；(2)不定芽的繼代增殖將步驟(1)誘導出的不定芽切割后再繼代培養于培養基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天進行不定芽的增殖，所述的培養基每升中含有6-芐基嘌呤1.0～2.0mg，萘乙酸0.1～0.2mg，蔗糖20～30g和瓊脂5～7g，其余為MS，pH 5.5～5.8；(3)試管開花誘導當步驟(2)芽高約2～3cm時，切下接種到開花誘導培養基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天培養，所述的培養基每升中含有6-芐基嘌呤0.1～0.3mg，萘乙酸0.1～0.2mg，蔗糖20～40g和瓊脂5～7g，其余為MS，pH 5.5～5.8。
2. 根據權利要求1的月季試管開花的方法，其特征是步驟(l)所述的無菌水沖洗次數為 4 5次，培養15 20天在外植體上形成不定芽；步驟(2)中的一個繼代增殖周期為30 35 天。
全文摘要
本發明涉及月季試管開花的方法，首先在生長季節選取生長旺盛的迷你月季(Rosahybrida cv.mini)的莖尖或帶節莖段為外植體，經消毒后接種到每升含有6-芐基嘌呤1.0～2.0mg的MS培養基中至形成不定芽，然后將誘導出的不定芽切割后再繼代培養于含有6-芐基嘌呤1.0～2.0mg，萘乙酸0.1～0.2mg的MS培養基中進行不定芽的增殖，當芽高約2～3cm時，切下接種到每升含有6-芐基嘌呤0.1～0.3mg，萘乙酸0.1～0.2mg的MS培養基中進行試管開花誘導。本發明方法培育速度快，消毒方法簡單、消毒成功率在80％～90％，培養基成分獨特且簡單實惠，開花誘導率較高，花率可達60％以上，花色鮮艷。
文檔編號C12N5/04GK101129130SQ20071003059
公開日2008年2月27日 申請日期2007年9月28日 優先權日2007年9月28日
發明者吳坤林, 曾宋君, 碩 梁, 俊 段, 楓 鄭, 陳之林 申請人:中國科學院華南植物園