一種快速檢測轉基因大豆的方法

專利名稱：一種快速檢測轉基因大豆的方法
技術領域：
本發明屬于分子生物學技術領域，涉及轉基因產品的檢測方法，更具體說是一種快速檢測轉基因大豆的方法及根據轉基因時用的CaMV35s啟 動子序列及CP4-EPSPS設計的兩套引物對其進行擴增，通過觀察反應管濁 度或紫外燈下觀察SYBR Gold顏色變化或觀察瓊脂糖凝膠電泳來判斷擴增 情況。
背景技術：
2006年全世界轉基因作物種植面積為10200萬公J^，與2005年轉基 因作物9000萬公項相比增長了 13%，從1996年到2006年十年間轉基因 作物總的種植面積增加了 60倍。目前，世界各國已進行田間試驗的轉基 因作物超過5000種，批準商品化的轉基因作物有160多種，包括玉米、 大豆、油菜、番茄、馬鈴薯、甜椒、西葫，、木瓜、甜菜、香石竹、矮 牽牛、亞麻、煙草、西瓜、菊苣等。我國轉基因生物研究始于20世紀80 年代初期，主要是轉基因抗蟲棉.近年來，政府不斷加大對生物技術研 究的支持力度，積極促進農業生物技術的研究與產業化開發。
轉基因作物安全性主要集中在轉基因作物釋放的環境安全性和由轉 基因作物生產出的食品的安全性上。包括對人和動物健康的風險、對生 態環境與農業的風險、對非目標生物的風險。針對第一種風險，1993年， 聯合國經濟發展與合作組織(OECO)提出了食品安全性評估的"實質等 同性"原則。如果轉基因作物生產的產品與傳統產品具有實質等同性， 則可以認為是安全的。
最早提出對轉基因食品進行標識管理的是歐盟，1998年，歐盟在世界 上簽署第一個法案，要求對轉基因產品進行標簽說明；1999年，要求出 口到歐盟的非轉基因產品不得含有1%的轉基因產品污染；2002年，歐盟 將標識的最低限量降低到O. 9%。日本、澳大利亞、新西蘭對轉基因成分 的最低含量做了不同規定，域值從l-5%不等。我國于2001年5月9日公布并實施《農業轉基因生物安全管理條例》， 于2002年1月5日公布了農業轉基因生物安全評價、標識和進口安全管 理三個配套管理辦法，確定了第一批實施標識管理的農業轉基因生物目 錄，并于2002年3月20日起正式實施。為了能夠對轉基因作物及其產品做出綜合評價，除了需要各國政府和 國際機構制定科學的安全評價體系以及嚴格的管理法規外，建立有效的 方法體系對轉基因作物進行檢測也很重要，這是對轉基因作物進行安全 性評價和實施監管的基礎，也是農產品國際貿易健康發展的重要保障。轉基因作物的檢測主要是檢測樣品是否含有外源蛋白質(基因表達產 物)和是否含有外源基因(DM) (Luthy J. , 1999 )。轉基因作物中外 源蛋白可以利用基于免疫學原理的酶聯免疫吸附法(ELISA)、試紙條檢 測、Western雜交等方法檢測，主要從待測樣品中按照一定的程序抽提含有目的蛋白的基質，利用抗體與目的蛋白(抗原)特異結合的特性，通 過偶聯抗體與抗原抗體復合物的作用產生可檢測的信號。轉基因作物的核酸檢測方法主要有兩種核酸分子雜交技術(Sourthern blot) ， PCR 檢測技術。目前，PCR檢測方法是最主要、最準確地檢測轉基因作物的方 法，包括定性PCR方法、復合PCR方法、巢式PCR方法、竟爭性定量PCR方 法、熒光定量PCR方法等。國內外推廣使用的是定性PCR和實時定量PCR檢 測方法PCR技術的基本原理類似于DM的天然復制過程，其特異性依賴 于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。通過聚合酶的作用，在體外快速 特異地擴增目的片段，使微量、特定的目的DNA片段在幾小時內迅速擴增 到百萬倍。擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳、溴化乙錠染色后很容易觀察， 因而具有快速、靈敏等優點。轉基因作物及產品檢測過程一般為通過常用植物的內標準基因檢測 樣品的來源，然后檢測轉基因樣品中普遍存在的3種通用元件啟動子、 終止子和標記基因。如果結果為陽性則進一步對外源結構基因進行檢測。 例如，根據35S啟動子、N0S終止子、NPTII基因設計引物，檢測大豆 Roundup-Ready、抗蟲Bt玉米種子及深加工產品，并釆用了 Southern blot 和限制性內切酶酶切對實驗結果進行證明(Vollenhofer S. et al.，1999 )。實時熒光定量PCR的基本原理是在擴增反應體系中加入熒光基團，利 用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進 行定量分析的方法。熒光定量PCR方法根據采用的熒光基團發光原理的不 同又可以分很多種，例如SYBR Green I熒光染料、FRET^支術、TaqMan探 針、MolecjuLar Beacon等'其中TaqMan熒光定量PCR方法由于其探針的 簡單和高度特異性得到最為廣泛的應用。例如，利用TaqMan熒光定量PCR 方法特異性檢測GA21玉米品系(曹際娟等，2003 )其他檢測方法主要包 括將蛋白、核酸兩種方法的結合例如PCR-ELISA檢測方法、免疫PCR方法 和最新的基因芯片檢測方法。目前國際和國內轉基因檢測標準主要是定性PCR和實時焚光定量PCR 檢測。定性PCR方法技術成熟，穩定，但反應體系和操作過程比較復雜， 需要專業人員；所需PCR儀價格在5萬元左右，擴增時間2-3小時，擴增結 果電泳時間需l小時左右；電泳常用染料EB是強致癌物，有較強毒性。實 時熒光定量PCR技術先進，靈敏度更高，擴增時間在l小時左右，擴增結 果實時在電腦上顯示；能檢測出樣品中外源基因的數量信息(拷貝數) 穩定性、體系和操作同定性PCR相當，但儀器和耗材價格較高； 一臺定量 PCR在50萬元左右，不宜大范圍推廣。 發明內容本發明的目的在于公開一種快速檢測轉基因大豆的方法及根據轉基 因時用的Camv35s啟動子序列及CP4-EPSPS設計兩套引物對其進行擴增， 通過肉眼觀察濁度或加入SYBR Gold紫外燈下顏色的變化或觀察瓊脂糖凝 膠電泳結果判斷擴增情況。本發明的技術方案如下一種用于檢測轉基因大豆的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基 因特異性引物，其特征在于設計2對套式引物，其中外引物正向序列為 GCCACCCATCTCGATCAC，反向序列為GATCGGGAATTGGATCCGG;內引物正 向序列為TCGTCCACCGTGACAGGGTTTTTTCATCGCCATGAGCTTCCTC，反向序列為 AGTTCATGGACCTGATGGCCGTTTTTCATCAGGCAGCCTTCGTAT。另外一種用于檢測轉基因大豆的花椰菜花葉病毒35S啟動子特異性 引物，其特征在于設計2對套式引物，其中外引物正向序列為 GCCCAGCTATCTGTCACTTC ，反向序列為TCCCTTACGTCAGTGGAGAT;內引物 正向序列為CGGCAGAGGCATCTTGAACGATAAAAGGAAGGTGGCACCTAC，反向序列 為ACAGTGGTCCCAAAGATGGACCTGCTTTGAAGACGTGGTTGG。本發明采用上述兩套引物進行快速檢測轉基因大豆的方法，其特征在 于包括如下步驟(l)擴增反應體系擴增反應的總體積為25pL，其各種成分及終濃 度分別為2 x Buffer 2.5 nL， FIP4jaL, BIP4pL, F3 0. 5 n L, B3 0. 5dNTPs 3. 5yL，模板DNA 1jliL，用滅菌去離子水補齊到25pL;其 中2x Buffer 2. 5juL，表示的是2x緩沖液。(3) 擴增反應過程在DNA循環儀上95 1C條件下變性5min，加入Bst DNA聚合酶大片段1 jliL，在60-65 TC進行45-60min，并且在80"C持續2min， 4匸，保存；(4) 擴增反應結束，取體系液10-25nL用不同的檢測方法判斷擴增與否。其中的引物序列表如下:Primer名稱序列(5'to3')堿基數CP4EPSPS-F3GCCACCCATCTCGATCAC18CP4EPSPS-B3GATCGGGAATTGGATCCGG19CP4EPSPS-FIPTCGTCCACCGTGACAGGGTTTTTTCATCGCCATGAGCTTCCTC43CP4EPSPS-BIPAGTTCATGGACCTGATGGCCGTTTTTCATCAGGCAGCCTTCGTAT45CaMV35S-F3GCCCAGCTATCTGTCACTTC20CaMV35S-B3TCCCTTACGTCAGTGGAGAT20CaMV35S-FIPCGGCAGAGGCATCTTGAACGATAAAAGGAAGGTGGCACCTAC42CaMV35S-BIPACAGTGGTCCCAAAGATGGACCTGCTTTGAAGACGTGGTTGG42本發明所述的不同的檢測方法判斷擴增與否，包括瓊脂糖凝膠電泳， 加入EB染色劑，在紫外燈下觀察，各種片斷長度的莖環結構的擴增產物;或直接向擴增管中加入嵌入劑SYBR Gold,通過紫外燈下顏色的變化觀察 有無擴增反應；或評估擴增副產物焦磷酸鎂的白色沉淀物的量來觀察有 無擴增反應。為了能更加清楚的說明本發明的測定方法，下面對本發明的試驗方法 做以詳細的說明。1、 原理本方法應用 一種新型的核酸擴增方法，其原理是采用4條特異引物及 一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶，在651C左右對核酸進行擴增，短時間 擴增效率可達到10'-1(T個拷貝。具有高特異性、高效性、快速、簡便、 易檢測等特點。2、 引物設計該引物設計較復雜。需要最少4條引物，分別是正向內引物FIP、正向 外引物F3、反向內引物BIP、反向外引物B3。內引物長度通常超過40個堿 基，外引物短些，為25個堿基左右。除了引物的長度、堿基組成外，還 要考慮引物與靶序列的環狀結構等。本研究依據轉基因大豆Roundup Ready Soybean啟動子基因Camv35s 和抗除草劑基因CP4-EPSPS設計兩套引物。表l引物序列表如下:Pri邁er名稱序列(5' to3')堿基數CP4EPSPS-F3GCCACCCATCTCGATCAC18CP4EPSPS-B3GATCGGGAATTGGATCCGG19CP4EPSPS-FIPTCGTCCACCGTGACAGGGTTTTTTCATCGCCATGAGCTTCCTC43CP4EPSPS-BIPAGTTCATGGACCTGATGGCCGTTTTTCATCAGGCAGCCTTCGTAT45CaMV35S-F3GCCCAGCTATCTGTCACTTC20CaMV35S-B3TCCCTTACGTCAGTGGAGAT20CaMV35S-FIPCGGCAGAGGCATCTTGAACGATAAAAGGAAGGTGGCACCTAC42CaMV35S-BIPACAGTGGTCCCAAAGATGGACCTGCTTTGAAGACGTGGTTGG423、反應條件反應試劑需要鏈置換型DNA聚合酶、dNTPs、引物和反應緩沖液。反應在恒溫條件下進行，反應時間依據引物的效率和模板DNA質量變化， 一般 為lh或更少。模板DNA在進行恒溫擴增前先要在95 iC條件下變性5min， 在60-65 1C進行45-60min，并且在80^C持續2min而終止。這項沖支術的優 點就是不需要熱循環。由于擴增是在恒溫條件下進行的，因此僅需要恒 溫水浴鍋或金屬加熱塊維持反應溫度，不需要PCR儀等昂貴的儀器。 材料與方法(1) 試劑BioLabs (NEW ENGLAND)生產的Bst DNA聚合酶大片段和 lO倍Buffer溶液；篩選基因Camv35s引物；目標基因CP4-EPSPS引物； dNTPs;(2) 擴增反應體系擴增反應的總體積為25yL,其各種成分及終濃度 分別為2 x Buffer 2. 5yL, FIP 4jnL, BIP 4yL， F3 0. 5pL， B3 0.5 yL， dNTPs 3. 5yL，模板DNA lpL，用滅菌去離子水8. 5pL;然后補 齊到25yL。(3) 擴增反應過程95 iC條件下變性5min，加入Bst DNA聚合酶大片 段lpL，在60-65 'C進行45-60min，并且在80"C持續2min， 4'C，保存；(4) 擴增反應結束，取體系液10-25juL用不同的檢測方法判斷擴增與否。4、擴增結果觀察 有三種觀察方法，適合不同情況下進行1) 通過瓊脂糖凝膠電泳，加入EB染色劑，在紫外燈下觀察。反應會 產生各種片斷長度的莖環結構的擴增產物，因此在電泳圖鐠中顯示為從 點樣孔處開始的彌散和條帶現象。由于EB是致癌劑，因此該方法應用不 是很廣范。結果見圖l。2) 由于反應形成大量擴增產物，可以直接向擴增管中加入嵌入劑SYBR Gold,紫外燈下觀察，無擴增反應的管子呈橙色，有擴增反應的管子將 變為綠色。結果見圖2。3) 檢測還可以通過評估擴增副產物焦磷酸鎂的白色沉淀物的量來進 行。在反應中，在核酸大量合成時，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應 溶液中的Mg2+結合，產生副產物一焦磷酸鎂沉淀。它有極高的特異性，可以用肉眼觀察或濁度儀檢測反應管中的沉淀濁度就能夠判斷擴增與否。本發明的用于轉基因大豆檢測的擴增方法，具有許多迄今為止的擴增方法無法比擬的優點1) 操作簡便不需要復雜的儀器，不需要特殊試劑，只需一恒定溫 度就能反應，不需要預先進行雙鏈DNA的變性。2) 高特異性該技術由4條引物擴增靶序列的6個區段，并且這6個區 段的順序也有規定，因此具有高度特異性。3) 快速高效整個擴增不到lh即可完成，產量可達到10'-10"個拷貝；4) 靈敏度高擴增模板可僅為10拷貝甚至更少。5) 鑒定簡便可以用肉眼直接觀察反應管內沉淀的混濁度或者通過 SYBR Gold紫外燈下顏色變化判斷擴增與否。


圖l為擴增產物的電泳分析圖譜。自左向右依次為陽性Camv35s、 CP4-EPSPS、陰性對照Camv35s、 CP4-EPSPS和Marker。圖2為擴增產物加入SYBR Gold結果圖。左邊為陽性的Camv35s、 CP4-EPSPS，右邊為陰性對照Camv35s、 CP4-EPSPS。圖3為擴增產物加入SYBR Gold紫外燈下觀察的結果圖。自左向右依 次為1陽性Camv35s、2陽性CP4-EPSPS、3陰性Camv35s、4陰性CP4-EPSPS。圖4為擴增產物的電泳分析圖譜。自左向右依次為1陽性Camv35s、 2陽性CP4-EPSPS、 3陰性Camv35s、 4陰性CP4-EPSPS。圖5為擴增產物加入SYBR Gold結果圖。自左向右依次為1陽性 Camv35s、 2陽性CP4-BPSPS、 3陰性Camv35s、 4陰性CP4-EPSPS。為了能更加清楚的說明本發明的種植方法，下面對本發明的試驗方法 做以詳細的i兌明。 實施例l1、 轉基因大豆DNA的提取常規CTAB法提取(見附件)2、 擴增反應(1)試劑BioLabs (NEW ENGLAND)生產的Bst DNA聚合酶大片段和 10倍Buffer溶液；篩選基因Camv35s引物；目標基因CP4-EPSPS引物；25 mu m，(2) 擴增反應體系擴增反應的總體積為25nL，其各種成分及終濃 度分別為2 x Buffer 2. 5 ]Li L， FIP4pL， BIP4|iL， F3 0. 5 n L， B3 0. 5 yL， dNTPs 3. 5jiL,模板DNA lyL，用滅菌去離子水8. 5 jli L;補齊到(3) 擴增反應過程95 1C條件下變性5min，加入Bst DNA聚合酶大 片段lnL，在60 X:進行45min，并且在80lC持續2min， 4'C，保存；(4) 擴增反應結束，直接向擴增管中加入嵌入劑SYBRGold，在紫外 燈下觀察。無擴增反應的管子沒有熒光，有擴增反應的管子將變為綠色 焚光。結果見圖3。實施例21、 提取轉基因大豆粉中的DNA:常規CTAB法提取(見附件)2、 擴增(1) 試劑BioLabs (NEW ENGLAND)生產的Bst DNA聚合酶大片段和 lO倍Buffer溶液；篩選基因Camv35s引物；目標基因CP4-EPSPS引物； dNTPs;(2) 擴增反應體系擴增反應的總體積為25pL，其各種成分及終濃 度分別為2 x Buffer 2. 5 jLiL， FIP4yL， BIP4pL， F3 0. 5pL， B3 0. 5 HL， dNTPs 3. 5nL，模板dna lpL，用滅菌去離子水8. 5 m L;補齊到(3) 擴增反應過程95 "C條件下變性5min，加入Bst DNA聚合酶大 片段ljLiL,在65 1C進行60min，并且在80X:持續2min， 4X2,保存；(4) 擴增反應結束，取體系液10)iL，通過瓊脂糖凝膠電泳，加入EB 染色劑，在紫外燈下觀察。反應會產生各種片斷長度的莖環結構的擴增 產物，因此在電泳圖語中顯示為從點樣孔處開始的彌散和條帶現象。結 果見圖4.實施例31、提取轉基因豆粕中的DM:常規CTAB法提取(見附件) 2、擴增反應(1) 試劑BioLabs ( NEW ENGLAND )生產的Bst DM聚合酶大片段和 10倍Buffer溶液；篩選基因Camv35s引物；目標基因CP4-EPSPS引物； ■Ps;(2) 擴增反應體系擴增反應的總體積為25]iL,其各種成分及終濃 度分別為2xBuffer 2.5pL(含Mg2+) ， FIP 4jaL， BIP 4 p L, F3 0.5 yL， B3 0. 5jiL， dNTPs 3. 5juL，才莫板DM lyL，用滅菌去離子水8.5補齊到25juL。(3) 擴增反應過程95 'C條件下變性5min，加入Bst DNA聚合酶大 片段lnL,在63 1C進行50min，并且在80TC持續2min， 4C，保存；產量 可達到1(T個拷貝；(4) 擴增反應結束，直接向擴增管中加入嵌入劑SYBRGold，無擴增 反應的管子呈橙色，有擴增反應的管子將變為綠色。結果見圖5。附件常規CTAB法提取DNA(1) 取轉基因大豆約100mg，放入研缽中，加入少量液氮迅速磨碎。 液氮反復加入3~4次，磨碎成粉末為止。(2) 加入1. 5mL預熱至65'C的CTAB提取緩沖液，充分混合、懸浮試樣(依 試樣不同，可適當增加緩沖液的用量)，65。C保育30min，期間不停顛倒 混勻；(3) 約12000g離心10min。轉移上清至一新離心管，加入l倍體積的酚 氯仿異戊醇(25: 24: 1 ),充分混合。約12000g離心15min。轉移上 清至一新離心管中；(4) 加入1倍體積的氯仿異戊醇(24: 1)，充分混合。約12000g離 心15min。轉移上清至一新離心管中；(5) 加入2倍體積CTAB沉淀緩沖液，室溫靜置保育60min; 12000g離心 15min,棄上清；加入350nL氯化鈉溶液溶解沉淀；12000g離心10 min, 轉移上清至一新離心管。(6) 加入0. 6倍體積異丙醇，倒置離心管輕柔混合，室溫放置20min。12000g離心15min。棄上清。加入500fiL70%乙醇溶液，并顛倒離心管數 次。12000g離心10min。棄上清。(7)干燥DNA沉淀，加100jiL水或TE緩沖液溶解DNA。序列表<110>天津巿農業科學院中心實驗室 <120> —種快速檢測轉基因大豆的方法 <160> 8 <210> 1 <211> 18bp <212> DNA <213>人工序列 <權> 1gccacccatc tcgatcac 18<210> 2 <211> 19bp <212>腿 <213>人工序列 <備> 2gatcgggaat tggatccgg 19<210> 3 <211> 43bp <212> DNA <213>人工序列 <400> 3tcgtccaccg tgacagggtt ttttcatcgc catgagcttc etc 43<210> 4 <211> 45bp <212> DNA <213>人工序列 <權> 4agttcatgga cctgatggcc gtttttcatc aggcagcctt cgtat 45<210> 5 <211> 20bp <212> DNA<213>花椰菜花葉病毒啟動子(cauliflower mosaic virus promoter) <400> 5gcccagctat ctgtcacttc 20<210> 6 <211> 20bp <212> DNA<213>花椰菜花葉病毒啟動子(cauliflower mosaic vims promoter )<働> 6tcccttacgt cagtggagat 20<210> 7 <211> 42bp <212> DNA<213>花椰菜花葉病毒啟動子(cauliflower mosaic virus promoter) <400> 7cggcagaggc atcttgaacg ataaaaggaa ggtggcacct ac 42 <210> 8<211> 40bp <212> DNA
<213> 花椰菜花葉病毒啟動子(cauliflower mosaic virus promoter ) <400> 8acagtggtcc caaagatgga cctgctttga agacgtggtt gg 4權利要求
1、一種用于檢測轉基因大豆的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基因特異性引物，其特征在于，設計2對套式引物，其中外引物正向序列為GCCACCCATCTCGATCAC，反向序列為GATCGGGAATTGGATCCGG；內引物正向序列為TCGTCCACCGTGACAGGGTTTTTTCATCGCCATGAGCTTCCTC，反向序列為AGTTCATGGACCTGATGGCCGTTTTTCATCAGGCAGCCTTCGTAT。
2、 一種用于檢測轉基因大豆的花椰菜花葉病毒35S啟動子特異性引 物，其特征在于，設計2對套式引物，其中外引物正向序列為 GCCCAGCTATCTGTCACTTC，反向序列為TCCCTTACGTCAGTGGAGAT;內引物 正向序列為CGGCAGAGGCATCTTGAACGATAAAAGGAAGGTGGCACCTAC，反向序列 為ACAGTGGTCCCAAAGATGGACCTGCTTTGAAGACGTGGTTGG。
3、 一種快速檢測轉基因大豆的方法，其特征在于包括如下步驟(1) 擴增反應體系擴增反應的總體積為25niL,其各種成分及終 濃度分別為2 x Buffer 2. 5 pL， FIP4jaL, BIP4pL, F3 0. 5jjL， B3 0. 5 pL， dNTPs 3.5nL，模板DNA ljuL，用滅菌去離子水補齊到25niL;(2) 擴增反應程序95匸條件下變性5min，加入BstDNA聚合酶大 片段lyL，在60-65 X:進行45-60min,并且在80。C持續2min， 4'C，保 存；(3) 擴增反應結束，可以通過肉眼觀察反應管濁度判斷結果，無色 透明為陰性，白色混濁為陽性；或通過加入liaL 1000 xSYBR Gold紫外 燈下判斷結果，橙色為陰性，綠色為陽性；或通過瓊脂糖凝膠電泳判斷 結果，無條帶為陰性，有彌散及梯度條帶為陽性；(4)引物序列如下:引物名稱序列(5'to3')堿基數CP4EPSPS-F3GCCACCCATCTCGATCAC18CP4EPSPS-B3GATCGGGAATTGGATCCGG19CP4EPSPS-FIPTCGTCCACCGTGACAGGGTTTTTTCATCGCCATGAGCTTCCTC43CP4EPSPS-BIPAGTTCATGGACCTGATGGCCGTTTTTCATCAGGCAGCCTTCGTAT45CaMV35S-F3GCCCAGCTATCTGTCACTTC20CaMV35S-B3 TCCCTTACGTCAGTGGAGAT 20CaMV35S-FIP CGGCAGAGGCATCTTGAACGATAAAAGGAAGGTGGCACCTAC 42 CaMV35S-BIPACAGTGGTCCCAAAGATGGACCTGCTTTGAAGACGTGGTTGG 42
4、如權利要求3所述的檢測方法，其中不同判斷擴增與否的檢測方法，包括直接向擴增管中加入嵌入劑SYBR Gold的濃度和體積，通過 顏色變化觀察有無擴增反應；或評估擴增副產物焦磷酸鎂的白色沉淀物 的量來觀察有無擴增反應；或通過觀察瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷擴增結 果。
全文摘要
本發明公開了一種轉基因大豆的快速檢測方法。其原理是采用4條特異引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶，在65℃左右對核酸進行擴增，短時間擴增效率可達到10⁹-10¹⁰個拷貝。其鑒定采用肉眼直接觀察反應管內沉淀的混濁度或者通過紫外燈下SYBR Gold顏色變化判斷擴增與否。本發明的檢測方法具有高特異性、高效性、快速、簡便、易檢測等特點，為轉基因作物的檢測開辟了廣闊的前景。
文檔編號C12Q1/68GK101225435SQ200710060309
公開日2008年7月23日 申請日期2007年12月18日 優先權日2007年12月18日
發明者蘭青闊, 張麗華, 珠 朱, 永 王, 奕 程, 新 趙 申請人:天津市農業科學院中心實驗室