專利名稱：將多種細胞粘附到同一基底上的裝置及粘附方法
技術領域：
本發明涉及一種將多種細胞粘附到同一基底上的裝置及粘附方法。
背景技術：
在藥物篩選和基礎的細胞生物學的研究中，往往需要在同一表面固定兩種或多種 細胞。為此，人們已經研究出了一些方法。
例如在文獻h Chiu， D. T.; Jeon， N. L.; Huang, S.; Kane, R. S.; Wargo， C. J.; Choi， I. S.; Ingber, D. E.; Whitesides， G. M., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2000， 97， (6)， 2408-2413 中，WMtesides實驗小組公開了一種運用三維結構的微流管道在同一表面固定多種細 胞，而且可以形成由多種細胞組成的復雜圖案的方法。這種方法首先制備出三維結構 的PDMS的"印章"，然后在"印章"與細胞培養盤基底結合后，往不同的管道入口 通入不同的細胞，這樣不同種細胞被運送到基底的不同位置，待培養一段時間后，細 胞長滿，就可以出現設計好的圖案。但是，這種方法得到的粘附了多種細胞的基底， 在實驗過程中如果把含有三維結構的PDMS的"印章"拿幵，粘附在管道中的細胞會 自由爬動，使得固定的細胞圖案被破壞。另一方面，如果始終不能去掉"印章"，不同 種細胞間不能夠相互作用，不利于進一步研究細胞間的相互作用。此外，這種方法將 多種細胞粘附到基底上時，需要復雜的微加工方法。
在文獻2: Yousaf， M. N.; Houseman, B, T.; Mrksich, M., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2001,98， (11)， 5992-5996中，Mrksich實驗小組公開了一種非接觸式、在同一表面固定 兩種不同細胞的方法。此方法首先運用微接觸印刷技術把一種細胞固定在表面，然后 運用電化學技術改變表面沒有粘附細胞的區域化學組成，從而可以固定第二種細胞。 這種方法的優點是需要很少的物理操作，缺點是需要復雜的化學合成。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術在將多種細胞粘附到同一基底表面時，不好控制 粘附的細胞的運動，使得固定的細胞圖案被破壞或是根本不能相互作用，以及需要復 雜的微加工方法或是復雜的化學合成的缺陷，從而提供一種簡單和易操作、并且可以
控制不同種細胞間的運動，以便研究其相互作用的將多種細胞粘附到同一基底的將多 種細胞粘附到同一基底上的裝置及粘附方法。
本發明的目的是通過如下的技術方案實現的
本發明提供的將多種細胞粘附到同一基底上的裝置，包括
一基底；所述基底上表面上依次蒸鍍有鈦粘附層和金層，及通過在l一5mM硫醇 的乙醇溶液中自組裝于所述基底上表面上的金層上的惰性單分子膜層；
一下表面上具有至少一組微凹槽單元的經氧化處理后的具親水表面的聚二亞甲基硅 氧烷印章；所述微凹槽單元包括位于中間位置的直線型中間凹槽，和分別位于所述 直線型中間凹槽兩側的第一凹槽和第二凹槽；所述第一凹槽和第二凹槽的中間段與所 述直線型中間凹槽平行且間距為100-500微米，所述第一凹槽和第二凹槽的中間段之 外的兩端部段向遠離直線型中間凹槽的方向傾斜；所述直線型中間凹槽、第一凹槽和 第二凹槽的長度在1.2 1.5cm范圍內，寬度在20-300微米；所述直線型中間凹槽、 第一凹槽和第二凹槽的槽端處分別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；
所述聚二亞甲基硅氧垸印章的下表面貼覆于所述基底的惰性單分子膜層上；和 一負極連通于所述基底，正極連通于所述聚二亞甲基硅氧烷印章的電壓為1 — 1.4 伏的電源。
所述通過在l一5 mM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜 層為是通過在l一5 mM六聚聚乙二醇鏈取代的甲硫醇化合物的乙醇溶液中自組裝在所 述金層表面上的惰性單分子膜層。
所述通過在2 mM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層為 通過在1 一5 raM的HS (CH2) u (0CH20CH2) 60H、 HS (CH2),, (0CH20CH2) 50H或 HS(CH2)u(0CH20CH2)30H的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層。
所述的鈦粘附層的厚度為2 10nm;金層的厚度為20 50nm。
本發明提供的將多種細胞粘附到同一基底的方法，包括如下的步驟
1) 在干凈的玻璃基底上表面上先蒸鍍2 10nm厚的鈦粘附層，然后再在其上蒸 鍍20 50nm厚的金層；
2) 把步驟1)的玻璃基底的金層朝上地放入l~5mM硫醇的乙醇溶液里，5 10 小時后，硫醇在金表面上自組裝一具有強抗拒蛋白質或細胞吸附的惰性單分子膜層； 將基底取出，用氮氣吹干備用；
3) 使用光刻技術，在硅片上制備至少一組凸型線型微結構單元，該凸型線型微結
構單元包括位于中間位置的直線型中間凸型線，和分別位于所述直線型中間凸型線兩 側的第一凸型線和第二凸型線；所述第一凸型線和第二凸型線的中間段與所述直線型中 間凸型線平行且間距為100-500微米，所述第一凸型線和第二凸型線的中間段之外的兩 端部段向遠離直線型中間凸型線的方向傾斜；所述直線型中間凸型線、第一凸型線和第 二凸型線的長度在1.2 1.5cm范圍內，寬度在20-300微米范圍內；
4) 用聚二亞甲基硅氧垸對步驟3)得到的至少一組凸型線型微結構單元進行翻膜， 得到一與所述凸型線型微結構單元相對應的具有至少一組微凹型單元的聚二亞甲基硅 氧烷印章；
所述聚二亞甲基硅氧垸印章的微凹槽單元包括位于中間位置的直線型中間凹槽， 位于所述直線型中間凹槽兩側的第一凹槽和第二凹槽；所述第一凹槽和第二凹槽的中間 段與所述直線型中間凹槽平行且間距為100-500微米，所述第一凹槽和第二凹槽的中間 段之外的兩端部段向遠離直線型中間凹槽的方向傾斜；所述直線型中間凹槽、第一凹槽 和第二凹槽的長度在L2 1.5cm范圍內，寬度在20-300微米范圍內；所述直線型中間 凹槽、第一凹槽和第二凹槽的槽端處分別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；
然后把聚二亞甲基硅氧烷印章的具有微凹型單元的面朝上，在等離子清洗器中氧
化2 5min，制成具有親水表面的聚二亞甲基硅氧烷印章；
5) 將步驟4)中的具有親水表面的聚二亞甲基硅氧垸印章取出后，把具有微凹型 單元的面朝下與步驟2)的所述基底的惰性單分子膜層進行接觸性連接，形成封閉的 流通管腔；然后10分鐘內把50~200 pg/ml細胞外基質蛋白的PBS磷酸緩沖液通入流 通管腔中；在該流通管腔的入口處通正電極，在金表面上通負電極，電壓為1.0~1.4 伏，通電時間為30一0秒，流通管腔內金表面上的硫醇解析附，重新變為具有吸附蛋 白質或細胞功能的表面層；再次通入細胞外基質蛋白溶液1 3小時，在流通管腔內金 表面吸附有細胞外基質蛋白；
6) 制備不同種的粘附細胞的懸浮溶液，細胞密度為106/ml，然后把不同種細胞通 入相應的流通管腔中，再放入細胞培養箱，在37°C， 二氧化碳體積濃度5%，培養30~60 分鐘，細胞粘附在流通管腔內的金表面上；揭掉聚二亞甲基硅氧烷印章，將生長有細 胞的金表面放入普通細胞培養液中，12~24小時后，細胞在各自限定區域內生長，以 完成多種細胞粘附于同一基底上。
所述步驟2)的硫醇是六聚聚乙二醇鏈取代的甲硫醇化合物。 所述步驟2)的硫醇是HS(CH2)u(OCH20CH2)60H、 HS(CH2)u(OCH20CH2)50H、 或HS(CH2)u(OCH2OCH2)3OH。
所述步驟5)的細胞外基質蛋白為纖維結合蛋白、膠原蛋白、或層粘連蛋白。 本發明提供一種上述方法制得的粘附了多種細胞的基底，其允許粘附的細胞間通
過分泌的可溶性生物分子相互作用。
本發明的這種粘附了多種細胞的基底可以用于藥物篩選，在粘附的細胞培養的條
件下加入待篩選的藥物，然后對比加入藥物的樣品和沒有加入藥物的樣品之間的細胞
移動的不同，可以了解哪種藥物可以影響這幾種細胞之間的相互作用，從而為新藥篩
選，提供一種極為便利的方法。
本發明提供的方法首先是在基底表面先用金表面形成以寡乙二醇為末端的單層 膜，細胞不會在該表面任何地方粘附。然后用PDMS中的微流管道為掩膜，進行電化學 反應，解除指定圖案內的單層膜在金表面的吸附，使得在指定圖案的范圍內可以吸附 細胞，而其他部分不能吸附細胞。最后，把PDMS拿開，幾種不同的細胞便有序的吸附 在表面。
與現有技術相比，本發明的優點在于 1、本發明利用表面化學、電化學和微流控的結合，來構筑復雜的細胞培養體系， 可以讓多種細胞在可調控的空間和時間，有序地在表面的粘附、生長。
2、 在這種方法得到的粘附了多種細胞的基底為細胞生物學、組織生物學的基本
研究提供了平臺，可以單細胞水平高精度的在時間和空間上對細胞生物學進行分析， 同時，還可以作為基于細胞和細胞之間作用的藥物檢測，為發現藥物和有毒物質的分 析提供了新的途徑。
3、 這幾種細胞的密度和相間的距離可以精確調控，以便檢測幾種細胞之間的反
應。因為可以控制細胞密度、幾種細胞之間的間隔，所以分析的精度是前所未有。
4、 在不同種細胞有序固定在表面后，也可以進行第二次電解析檢測幾種細胞之 間互相爬動的影響。
圖l為本發明的將多種細胞粘附到同一基底上的裝置的結構示意圖。
具體實施例方式
圖1為本發明的將多種細胞粘附到同一基底上的裝置的結構示意圖，由圖1可知， 本發明提供的將多種細胞粘附到同一基底上的裝置，包括
一基底l;所述基底l上表面上依次蒸鍍有鈦粘附層和金層，及通過在2mM硫醇 的乙醇溶液中自組裝于所述基底上表面上的金層上的惰性單分子膜層；
一下表面上具有至少一組微凹槽單元的經氧化處理后的具親水表面的聚二亞甲基硅 氧烷印章2;所述微凹槽單元包括位于中間位置的直線型中間凹槽21，和分別位于 所述直線型中間凹槽兩側的第一凹槽22和第二凹槽23;所述第一凹槽22和第二凹槽 23的中間段與所述直線型中間凹槽21平行且間距為100-500微米，所述第一凹槽22 和第二凹槽23的中間段之外的兩端部段向遠離直線型中間凹槽的方向傾斜；所述直線 型中間凹槽21、第一凹槽22和第二凹槽23的長度在1. 2 1. 5cm范圍內，寬度在 20-300微米范圍內；所述直線型中間凹槽21、第一凹槽22和第二凹槽23的槽端處分 別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；
所述聚二亞甲基硅氧烷印章的下表面貼覆于所述基底的惰性單分子膜層上；和
一負極連通于所述基底，正極連通于所述聚二亞甲基硅氧烷印章的電壓為l.O — 1.4伏的電源V。
所述通過在2mM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層為 是通過在2mM六聚聚乙二醇鏈取代的甲硫醇化合物的乙醇溶液中自組裝在所述金層表 面上的惰性單分子膜層。
所述通過在2raM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層為 通過在2 mM的HS (CH2) u (OCH2OCH2) 60H、 HS (CH2) (0CH20CH2) 50H或HS (CH2) (0CH20CH2) 3OH 的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層。
所述的鈦粘附層的厚度為2 10nrn;金層的厚度為20 50nm。
實施例1、
1) 在一干凈的玻璃載波片(厚度0.15mm)表面蒸鍍5nm (2 10nm均可)的鈦 作為粘附層，然后再在其上蒸鍍30nm (20 50nm均可)厚的金層，制得一實驗所需 要的基底；
2) 把步驟l)的基底切成2x2cn^的小塊，然后金層朝上地放入2mM (1 5mM) 硫醇(分子式HS(CH2) (OCH2OCH2)6OH)的乙醇溶液里，8小時后，硫醇在金表面 自組裝成單分子膜，形成強烈抗拒蛋白質和細胞的吸附的"惰性"的表面；從溶液中 把該硫醇化的基底取出，用氮氣吹干，備用；
3) 使用光刻技術在硅片上制備出至少一組凸型線型微結構單元，首先用作圖軟件 L-edH設計出所要圖形三條并排的凸型線，該三條并排的凸型線包括位于中間位置的
直線型中間凸型線，和位于該直線型中間凸型線兩側的第一凸型線和第二凸型線；第一 凸型線和第二凸型線的中間段與直線型中間凸型線平行且間距為100微米(線間距 100-500微米均可)，第一凸型線和第二凸型線的中間段之外的兩端部段向遠離直線型中 間凸型線的方向傾斜；直線型中間凸型線、第一凸型線和第二凸型線的長度為1.4cm (凸 型線長為1.2 1.5 11均可)，寬度為寬100微米(凸型線寬為20-300微米均可)；然后 打印為分辨率為3600dpi的膠片；接著再涂膠(SU-8系列負膠)，利用甩膠機均勻地將光 刻膠，涂在硅片基底上，再在8(TC烘烤3小時后硬化，把膠片垂直放在涂有光刻膠的基 板上，顯影曝光后就在涂有光刻膠的硅片上制成了所述的凸型線型微結構單元；
4) 用聚二亞甲基硅氧烷(PDMS)對步驟3)得到的凸型線型微結構單元進行翻 膜，得到一與上述微結構相對應的、具有凹型圖案的PDMS印章；然后把印章有凹型 圖案的面向上，在等離子清洗器中氧化2min，形成具有親水表面的PDMS印章；
5) 將步驟4)中的印章取出后，把有凹型圖案的面向下與步驟2)的硫醇化的基 底接觸，形成封閉的管腔；然后在10分鐘內把100pg/ml細胞外基質蛋白(纖維結合 蛋白(fibronection))的PBS磷酸緩沖液(pH7.4)通入管腔中；在該管腔的入口處通 正電極，在硫醇化的基底的金表面通負電極，電壓為1.0伏，通電時間為30秒，管腔 內的金表面的硫醇解析附，重新變為可以吸附蛋白質和細胞的表面層；再次通入上述 細胞外基質蛋白溶液2小時，在管腔內的金表面吸附了細胞外基質蛋白；
6) 制備不同種的粘附細胞——Hela細胞和NIH 3T3細胞的懸浮溶液，細胞密度 均為106/ml，然后把Hela細胞的懸浮溶液通入第一和三管腔中，將NIH3T3細胞的懸 浮溶液通入第二管腔中，放入細胞培養箱，于37'C、 二氧化碳濃度5% (體積濃度)， 培養40分鐘，細胞粘附在管腔內的金表面上；把PDMS印章揭掉，把長有細胞的金 表面放入普通細胞培養液(胎牛血清濃度10% )中，24小時后，細胞就會長滿各自 的限定區域，得到一粘附了 2種細胞的基底。
同樣的方法和步驟可以得到粘附多種細胞的基底。
實施例2
1) 在一干凈的玻璃載波片(厚度0.12mm)表面蒸鍍10nm (2 10nm均可)的 鈦作為粘附層，然后再在其上蒸鍍20nm (20 50nm均可)厚的金層，制得一實驗所 需要的基底；
2) 把步驟l)的基底切成2x2cii^的小塊，然后金層朝上地放入3mM (l~5mM) 硫醇(分子式HS(CH2)u(OCH2OCH2)sOH)的乙醇溶液里，5小時后，硫醇在金表
面自組裝成單分子膜，形成強烈抗拒蛋白質和細胞的吸附的"惰性"的表面；從溶液 中把該硫醇化的基底取出，用氮氣吹干，備用；
3) 使用光刻技術在硅片上制備出至少一組凸型線型微結構單元，首先用作圖軟件 L-edit設計出所要圖形三條并排的凸型線，該三條并排的凸型線包括位于中間位置的 直線型中間凸型線，和位于該直線型中間凸型線兩側的第一凸型線和第二凸型線；第一 凸型線和第二凸型線的中間段與直線型中間凸型線平行且間距為150微米(線間距 100-500微米均可)，第一凸型線和第二凸型線的中間段之外的兩端部段向遠離直線型中 間凸型線的方向傾斜；直線型中間凸型線、第一凸型線和第二凸型線的長度為1.4cm (凸 型線長為1.2 1.5 11均可)，寬度為寬150微米(凸型線寬為20-300微米均可)；然后 打印為分辨率為3600dpi的膠片；接著再涂膠(SU-8系列負膠)，利用甩膠機均勻地將光 刻膠，涂在硅片基底上，再在8(TC烘烤3小時后硬化，把膠片垂直放在涂有光刻膠的基 板上，顯影曝光后就在涂有光刻膠的硅片上制成了所述的凸型線型微結構單元；
4) 用聚二亞甲基硅氧垸(PDMS)對步驟3)得到的凸型線型微結構單元進行翻 膜，得到一與上述微結構相對應的、具有凹型圖案的PDMS印章；然后把印章有凹型 圖案的面向上，在等離子清洗器中氧化3min，形成具有親水表面的PDMS印章；
5) 將步驟4)中的印章取出后，把有凹型圖案的面向下與步驟2)的硫醇化的基 底接觸，形成封閉的管腔；然后在10分鐘內把80Mg/ml細胞外基質蛋白(纖維結合蛋 白(fibronection))的PBS磷酸緩沖液(pH7.4)通入管腔中；在該管腔的入口處通正 電極，在硫醇化的基底的金表面通負電極，電壓為1.4伏，通電時間為30秒，管腔內 的金表面的硫醇解析附，重新變為可以吸附蛋白質和細胞的表面層；再次通入上述細 胞外基質蛋白溶液2小時，在管腔內的金表面吸附了細胞外基質蛋白；
6) 制備不同種的粘附細胞——Hela細胞和NIH 3T3細胞的懸浮溶液，細胞密度
均為106/ml，然后把NIH3T3細胞的懸浮溶液通入第一和三管腔中，將Hela細胞的懸
浮溶液通入第二管腔中，放入細胞培養箱，于37'C、 二氧化碳濃度5% (體積濃度)，
培養30分鐘，細胞粘附在管腔內的金表面上；把PDMS印章揭掉，把長有細胞的金
表面放入普通細胞培養液(胎牛血清濃度10% )中，24小時后，細胞就會長滿各自
的限定區域，得到一粘附了2種細胞的基底。 同樣的方法和步驟可以得到粘附多種細胞的基底。
實施例3
將實施例得到的粘附了多種細胞的基底浸入普通細胞培養液(胎牛血清濃度10% );在溶液處通正電極，在硫醇化的基底的金表面通負電極，電壓為1.2伏，通電 時間為30秒，進行第二次電化學解析附，指定圖案以外的金表面區域的硫醇解析附， 重新變為可以吸附蛋白質和細胞的表面層，被粘附在指定圖案內的細胞就可以自由移 動了。
同理，使用本發明的裝置和方法可以將多種細胞粘附到同一基底上。
權利要求
1、 一種將多種細胞粘附到同一基底上的裝置，包括-一基底；所述基底上表面上依次蒸鍍有鈦粘附層和金層，及通過在1一5 mM硫醇 的乙醇溶液中自組裝于所述基底上表面上的金層上的惰性單分子膜層；一下表面上具有至少一組微凹槽單元的經氧化處理后的具親水表面的聚二亞甲基硅 氧烷印章；所述微凹槽單元包括位于中間位置的直線型中間凹槽，和分別位于所述 直線型中間凹槽兩側的第一凹槽和第二凹槽；所述第一凹槽和第二凹槽的中間段與所 述直線型中間凹槽平行且間距為100-500微米，所述第一凹槽和第二凹槽的中間段之 外的兩端部段向遠離直線型中間凹槽的方向傾斜；所述直線型中間凹槽、第一凹槽和 第二凹槽的長度在1.2 1.5cm范圍內，寬度在20-300微米；所述直線型中間凹槽、 第一凹槽和第二凹槽的槽端處分別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；所述聚二亞甲基硅氧烷印章的下表面貼覆于所述基底的惰性單分子膜層上；和一負極連通于所述基底，正極連通于所述聚二亞甲基硅氧烷印章的電壓為1. 0伏一 1.4伏的電源。
2、 如權利要求l所述的將多種細胞粘附到同一基底的裝置，其特征在于所述通 過在l一5 mM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層為是通 過在l一5 mM六聚聚乙二醇鏈取代的甲硫醇化合物的乙醇溶液中自組裝在所述金層 表面上的惰性單分子膜層。
3、 如權利要求l所述的將多種細胞粘附到同一基底的裝置，其特征在于所述通 過在l一5 mM硫醇的乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層為通過 在2 mM的HS (CH2) u (0CH20CH2) 60H、 HS (CH2) (0CH20CH2) 50H或HS (CH2) u (0CH20CH2) 30H的 乙醇溶液中自組裝在所述金層表面上的惰性單分子膜層。
4、 如權利要求l所述的將多種細胞粘附到同一基底的裝置，其特征在于所述的 鈦粘附層的厚度為2 10nm;金層的厚度為20 50nm。
5、 一種將多種細胞粘附到同一基底的方法，包括如下的步驟1) 在干凈的玻璃基底上表面上先蒸鍍2 10nm厚的鈦粘附層，然后再在其上蒸 鍍20 50nm厚的金層；2) 把步驟l)的玻璃基底的金層朝上地放入l一5mM硫醇的乙醇溶液里，5 10 小時后，硫醇在金表面上自組裝一具有強抗拒蛋白質或細胞吸附的惰性單分子膜層； 將基底取出，用氮氣吹干備用；3) 使用光刻技術，在硅片上制備至少一組凸型線型微結構單元，該凸型線型微結 構單元包括位于中間位置的直線型中間凸型線，和分別位于所述直線型中間凸型線兩 側的第一凸型線和第二凸型線；所述第一凸型線和第二凸型線的中間段與所述直線型中 間凸型線平行且間距為100-500微米，所述直線型中間凸型線、第一凸型線和第二凸型 線的長度在1.2 1.5cm范圍內，寬度在20-300微米范圍內；4) 用聚二亞甲基硅氧烷對步驟3)得到的至少一組凸型線型微結構單元進行翻膜， 得到一與所述凸型線型微結構單元相對應的具有至少一組微凹型單元的聚二亞甲基硅氧烷印章；所述聚二亞甲基硅氧烷印章的微凹槽單元包括位于中間位置的直線型中間凹槽， 位于所述直線型中間凹槽兩側的第一凹槽和第二凹槽；所述第一凹槽和第二凹槽的中間 段與所述直線型中間凹槽平行且間距為100-500微米，所述第一凹槽和第二凹槽的中間 段之外的兩端部段向遠離直線型中間凹槽的方向傾斜；所述直線型中間凹槽、第一凹槽 和第二凹槽的長度在1.2 1.5cm范圍內，寬度在100-300微米范圍內；所述直線型中 間凹槽、第一凹槽和第二凹槽的槽端處分別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；然后把聚二亞甲基硅氧烷印章的具有微凹型單元的面朝上，在等離子清洗器中氧 化2min，制成具有親水表面的聚二亞甲基硅氧烷印章；5) 將步驟4)中的具有親水表面的聚二亞甲基硅氧烷印章取出后，把具有微凹型 單元的面朝下與步驟2)的所述基底的惰性單分子膜層進行接觸性連接，形成封閉的 流通管腔；然后10分鐘內把50—200[ig/ml細胞外基質蛋白的PBS磷酸緩沖液通入流 通管腔中；在該流通管腔的入口處通正電極，在金表面上通負電極，電壓為1.0—1.4 伏，通電時間為30—60秒，流通管腔內金表面上的硫醇解析附，重新變為具有吸附蛋 白質或細胞功能的表面層；再次通入細胞外基質蛋白溶液1一3小時，在流通管腔內金 表面吸附有細胞外基質蛋白；6) 制備不同種的粘附細胞的懸浮溶液，細胞密度為106/ml，然后把不同種細胞通 入相應的流通管腔中，再放入細胞培養箱，在37°C， 二氧化碳體積濃度5%，培養30~60 分鐘，細胞粘附在流通管腔內的金表面上；揭掉聚二亞甲基硅氧垸印章，將生長有細 胞的金表面放入普通細胞培養液中，24小時后，細胞在各自限定區域內生長，以完成 多種細胞粘附于同一基底上。
6、 如權利要求5所述的將多種細胞粘附到同一基底的方法，其特征在于所述步 驟2)的硫醇是六聚聚乙二醇鏈取代的甲硫醇化合物。
7、 如權利要求5所述的將多種細胞粘附到同一基底的方法，其特征在于所述步驟2 )的硫醇是HS(CH2)n(OCH20CH2)60H 、 HS(CH2)u(OCH2OCH2)5OH 、或 HS(CH2)u(OCH2。CH2)30H 。
8、如權利要求5所述的將多種細胞粘附到同一基底的方法，其特征在于所述步驟5)的細胞外基質蛋白為纖維結合蛋白、膠原蛋白、或層粘連蛋白。
全文摘要
本發明涉及將多種細胞粘附到同一基底上的裝置和方法，其為在基底表面先用金表面形成以寡乙二醇為末端的單層膜，細胞不會在該表面任何地方粘附；然后用PDMS中的微流管道為掩膜，進行電化學反應；然后在不同管道通入不同的細胞懸液，等細胞粘附后，把PDMS拿開，幾種不同的細胞便有序的吸附在表面。該制備方法和裝置簡單和易操作、并且可以控制不同種細胞間的運動，以便研究其相互作用。該粘附了多種細胞的基底可以用于藥物篩選，在粘附的細胞培養的條件下加入待篩選的藥物，然后對比加入藥物的樣品和沒有加入藥物的樣品之間的細胞移動的不同，可以了解哪種藥物可以影響這幾種細胞之間的相互作用。
文檔編號C12N11/14GK101121930SQ200710098280
公開日2008年2月13日 申請日期2007年4月25日 優先權日2006年8月11日
發明者勇 李, 蔣興宇 申請人:國家納米科學中心