多發性骨髓瘤的檢測方法及抑制方法

專利名稱：：多發性骨髓瘤的檢測方法及抑制方法
技術領域：
：本發明涉及一種以通過觀察多發性骨髓瘤的基因型來早期診斷多發性骨髓瘤為目的、通過檢測人11號染色體q23.1區域的基因組擴增而檢測癌癥的方法。而且，本發明還涉及一種基于對POU結構域第2類相關因子1(POUdomain,class2，associatingfactor1(POU2AF1))基因與多發性骨髓瘤的關系的認識來抑制腫瘤增殖的方法。
背景技術：
：多發性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)起因于來源于B細胞的漿細胞的異常增殖，據報道，其開始治療以后的平均生存期約為3年，5年生存率為10%左右，10年以上的生存率為約3-5%左右，是一種長期預后不良的疾病。關于多發性骨髓瘤的詳細情況記載于非專利文獻1中。關于癌基因與該疾病的關系，很早即已報道與c-myc、Bcl-1/2有關；而且也有報道認為與N-ras、K-ras的點突變、IgH基因群的多個基因轉座異常等有關。但是，骨髓瘤特異的基因異常尚不清楚。根據在此之前的研究，一般認為，在細胞分化、增殖的過程中，連鎖引發了基因的變化，并最終造成腫瘤化。從這點看來，到底是哪些基因的變化引發了多發性骨髓瘤目前還不清楚，所以關于多發性骨髓瘤的檢測方法以及其分型(typing)方法，目前還不存在一種利用基因進行的檢測方法。非專利文獻1:BhawnaSirohi,etal.，Lancet,363,875-87,2004.
發明內容發明所要解決的技術問題如果能在基因水平上闡明多發性骨髓瘤的機理，在基因水平上就可以做到多發性骨髓瘤的腫瘤化過程的早期發現并可以進行其惡性程度的診斷，進一步，根據該機理，也可以篩選、開發藥劑以及確立治療方法。具體來說，通過鑒定出顯示多發性骨髓瘤的特征性表現的基因，并以該基因為中心進行技術上的研究，即可以解決該課題。艮口，本發明通過鑒定顯示多發性骨髓瘤等癌癥的特征性表現的基因，以提供一種癌癥檢測方法和細胞增殖抑制劑為本發明所要解決的課題。解決課題的技術手段以DNA微陣列(DNAmicroarray)為對象進行的比較基因組雜交(ComparativeGenomicHybridization(CGH))、也即陣列CGH法是一種用于解析隨著基因組DNA中的多個基因的擴增以及缺失所致的基因異常的一種簡便、迅速、優良的方法。因此，為了解析與腫瘤化以及腫瘤惡化有關的基因組上的基因異常，通過篩選CGH陣列上載有的800禾中BAC/PACDNA(TakadaH.,etal.,CancerSci.96,100-105，2005),成功鑒定了促進多發性骨髓瘤的腫瘤化的癌癥基因，即P0U2AF1基因。然后，又成功地發現，P0U2AF1基因的擴增，即P0U2AF1蛋白質的增加能夠顯著促進多發性骨髓瘤細胞的增殖，而且，當抑制P0U2AF1基因的轉錄產物時，多發性骨髓瘤細胞的增殖顯著降低，由此完成了本發明。艮P，根據本發明，提供一種癌檢測方法，其包括以檢體中第ll號染色體q23區域的基因的擴增為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。優選的是，所述基因是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一個。優選的是，所述擴增指標是指同正常檢體相比，為1.32倍以上。優選的是，所述檢體是多發性骨髓瘤的檢體。優選的是，癌為多發性骨髓瘤。優選的是，提供一種多發性骨髓的檢測方法，包括在多發性骨髓瘤的檢體中，以POU2AF1基因的擴增為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。優選的是，基因擴增可以采用DNA芯片法、Southern印跡法、Northern印跡法、PCR法、實時RT-PCR法、FISH法、CGH法、基因擴增法、RFLP檢測法、核苷酸測序法以及陣列CGH法中的任意一種方法來檢測。根據本發明的另外一個方面，提供一種癌檢測方法，其包括在檢體中，以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一個基因的表達增強為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。根據本發明的另外一個方面，提供一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因從體外導入到腫瘤細胞中。根據本發明的另外一個方面，提供一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質在體外導入到腫瘤細胞中。根據本發明的另外一個方面，提供一種細胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。根據本發明的另外一個方面，提供一種細胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質。根據本發明的另外一個方面，提供一種激活細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導入到該細胞中。根據本發明的另外一個方面，提供一種細胞增殖的激活劑，其包括從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中所選擇的基因。發明效果根據本發明，可以切實地掌握多發性骨髓瘤細胞檢體中的腫瘤分類、腫瘤化的癥候以及腫瘤的恢復程度。而且，通過抑制多發性骨髓瘤細胞中擴增的POU2AF1基因的轉錄產物，可以抑制該多發性骨髓瘤細胞的增殖。S卩，根據本發明，新提供了一種抗腫瘤藥物，其對顯現出腫瘤化功能的POU2AF1基因的轉錄具有抑制作用或含有功能缺失型的由該基因編碼的POU2AF1蛋白質。無論是從根據腫瘤性質的不同而采取不同的治療方法、或者從腫瘤的預后改善等臨床角度考慮，還是從腫瘤的基礎研究角度考慮，這些藥物都是非常有用的。而且，通過測定POU2AF1基因的信使RNA的表達量、或者通過確認基因組DNA中的該基因的量，或者通過測定POU2AF1蛋白質的量，可以對多發性骨髓瘤患者的腫瘤進行遺傳學的分類。圖1表示使用由28種多發性骨髓瘤細胞制備的基因組DNA、采用MGCCancerArray-800型CGH陣列進行分析的CGH陣列分析結果。作為對照，使用的是來源于正常人淋巴細胞株的基因組DNA;在擴增或缺失的染色體區域，相對于全部細胞種類(28種)的頻率以在縱軸上的擴增(綠色)、缺失(紅色)、在橫軸上的UCSC作圖位置(http:〃genome.ucsc.edu/[versionMay,2004])作為參照的染色體位置的形式被示出。圖2表示在用CGH陣列法確定的11q23區域的染色體區域中，采用RPll-792p2的BAC克隆對AMOl和MOLP-2細胞進行FISH分析的分析結果。箭頭表示在原本染色體位置上的FISH信號，楔形表示多拷貝的強擴增信號，顯示發生了基因擴增。圖3表示采用llq23區域的15種BAC克隆進行AMOl和MOLP-2細胞的FISH分析，由其熒光信號強度計算對應的基因組DNA區域的拷貝數并做圖(左圖)。縱軸表示在11q23區域的BAC克隆ID與它們的相對位置。兩種細胞的平均染色亮度最高的區域(均質染色區，homogenouslystainingregions,HSRs)幾乎一致，這兩個區域均被定位于RP11-2519與708L7之間約3Mb(megabase)的位置上。右圖表示對存在于已定位的11q23區域的AMOl、RDX、ARHGAP20、POU2AFl、SNF1LK2、PPP2R1B、ALG9基因(mRNA)進行以簡易定量為目的的PCR反應，然后進行3%瓊脂糖凝膠電泳的結果。最下方表示作為表達量對照的GAPDH的結果。所采用的細胞株為在11q23區域有擴增的AM01、MOLP-2，還有在該區域沒有觀察到擴增的KMMl、KM-5以及作為對照的來源于正常人的LCL(淋巴細胞克隆)。圖4表示用Western印跡法對8種多發性骨髓瘤細胞株的POU2AF1蛋白質的表達量進行定量。上部分表示作為蛋白質量檢測對照的p-肌動蛋白的Western印跡結果。圖中，在POU2AF1中觀察到的2條帶表示同功異構體P34和p35。圖的下半部分示出了由FISH測定的POU2AF1基因在基因組DNA上的拷貝數。圖5中A表示將2種POU2AF1的siRNA—POU2AF1-A和POU2AF1-B導入到AMOl和KMS-21BM細胞后的Western印跡法分析結果。下半部分表示作為蛋白質量檢測對照的(3-肌動蛋白的Western印跡結果。B、C表示在lxl()4個AMOl和KMS-21BM細胞中導入POU2AF1的siRNA以后、將細胞接種于96孔板中、用WST分析按照一定時間測定活細胞數的結果。試驗平行3份，重復進行兩次，星號表示在非配對t檢驗(UnpairedStudent'sttest)中有顯著性差異(p〈0.05)。圖6A表示將全長POU2AF1基因(p34)的N末端結合Myc，構建用于表達的表達載體(pCMV-Tag3-p34-POU2AFl)，將其導入原本內源性POU2AF1基因表達很低的KMS-11細胞中，進行藥劑篩選3周，用細胞裂解液、經Western印跡法和抗Myc抗體檢測是否有POU2AF1蛋白質表達的結果。陰性對照采用在KMS-11細胞中導入無外源基因的pCMV-3B的細胞，將其作為空白對照(Mock)。B表示將上述轉化細胞在玻璃板上培養、用抗Myc多克隆抗體、Alexa488標記的羊抗兔抗體(MolecularProbes公司生產)進行染色、然后用熒光顯微鏡進行觀察的結果。同時，左邊表示用DAPI進行核染色的結果。將兩者的色調重疊后表示為"疊加"。下方表示的是空白對照的結果。C表示的是用WST分析活細胞數的形式檢測了空白對照和表達P0U2AF1基因的兩種細胞的細胞增殖速度的結果。圖7表示對2xl()6個AMOl和KMS-21BM細胞株的細胞，將POU2AF1-A和POU2AF1-B的各個siRNA(對KMS-21BM細胞僅用POU2AF1-B)進行基因導入。48小時以后，用實時RT-PCR分析TNFRSF17基因的表達的結果。將作為陰性對照的在隨機序列的siRNA存在下的TNFRSF17基因的表達設定為100，表達的相對量以數值來表示。B表示對由外部基因導入而建立的表達POU2AF1基因的KMS-ll細胞株與空白對照細胞同時采用實時RT-PCR對其進行TNFRSF17基因表達的比較分析的結果。在空白對照細胞中TNFRSF17基因的表達設定為100，表示相對的表達量。C表示利用數據庫對基因組DNA上的人TNFRSF17基因的5'區域搜索轉錄因子結合部位，從而發現從轉錄起始點(+1)上游3642位堿基開始存在有促進POU2AF1轉錄的八核苷酸序列(下文稱為"octamer")位點。箭頭表示在以后的試驗中使用的檢出上述octamer位點的PCR引物。D表示對AMOl和KMS-ll細胞(空白對照、表達POU2AF1基因的細胞)的染色質來說，對使用抗POU2AF1蛋白質的抗體的免疫沉淀物進行PCR驗證以檢測其是否含有octamer位點。PCR引物如圖7C的箭頭所示使用了夾有octamer位點的引物，用抗POU2AF1抗體將各細胞裂解液免疫沉淀以后，將免疫沉淀物的1/100作為PCR反應的模板。圖中"Input"為免疫沉淀前的染色質材料，(-)表示沒有免疫沉淀抗體狀態下的陰性對照。箭頭表示檢測出的octamer位點。圖8表示將包含TNFRSF17基因上游的octamer位點的DNA區域的熒光素酶啟動子-報告基因載體與POU2AF1的異構型p34或p35表達載體同時導入KMS-ll細胞中、測定的發光結果，其中所述TNFRSF17基因上游的octamer位點的DNA區域含有野生型(wt)和突變型(Mut)的octamer位點。將TNFRSF17-wtoctamer設定為1，顯示相對的熒光素酶活性。圖9表示用定量PCR法測定多發性骨髓瘤細胞以及由多發性骨髓瘤臨床檢體建立的初級細胞中的POU2AFl、TNFRSF17的基因表達。用相對于p-肌動蛋白以及p2-微球蛋白(P2M)的比值來表示(A為細胞株；B為初級細胞)。相關系數和P值如各圖右上所示。圖10中的A、B表示采用AMOl細胞與KMS-21BM細胞，首先以非特異性序列構成的siRNA作為對照，將POU2AF1基因、TNFRSF17基因的siRNA進行基因導入，以P-肌動蛋白為指標，用定量PCR測定POU2AF1基因、TNFRSF17基因的表達，對照為100，顯示相對表達值(A為POU2AF1;B為TNFRSF17)。C表示用WST法檢測AMOl細胞與KMS-21BM細胞中由TNFRSF17基因的siRNA所導致的抑制后(0、2、4、6日后)的活細胞數。星號表示在非配對t檢驗中與對照相比有顯著性差異(p〈0.05)。具體實施例方式下面，針對本發明進一步詳細說明。(1)癌癥檢測方法
技術領域：
：本發明的癌癥檢測方法的特征是以檢體中第11號染色體q23區域的基因擴增為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。根據在此之前的研究，人POU2AFl基因(別名也稱為OBF-l(OCT結合因子1，OCTbindingfactor1)、BOB-l(B細胞特異性共活化齊U-l,B-cell-specificcoactivatorOBF-1)、OCA隱B等)的轉錄產物己經為人所知，是存在于染色體11q23.1上的基因(Junker,S.etal.,Genomics33:143-145,1996)。人POU2AF1基因的堿基序列在NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的數據庫的編號是NM-006235號。且人POU2AF1蛋白質的氨基酸序列在同一數據庫中被登記為NP-006226號。人POU2AF1基因的堿基序列如序列編號1(SEQIDNO:1)所示。POU2AF1蛋白質由SEQIDNO:1的堿基序列的第524位至第1294位區域的堿基編碼構成，其氨基酸序列如序列編號2(SEQIDNO:2)所示。在本說明書中，所謂"P0U2AF1基因"是指由上述堿基序列所定義的來源于人的基因；所謂"POU2AFl蛋白質"是指由該POU2AF1基因編碼構成的、由上述氨基酸序列所定義的蛋白質。人POU2AF1基因編碼構成的蛋白質具有POU結構域(POU結構域蛋白質在其序列中具有被稱為POU特異性結構域和POU同源結構域的共同的DNA結合序列，用作轉錄調節因子)，已知與轉錄因子OCT1或者OCT2結合后會增強其活性。但是，還不知道該人POU2AF1基因是一種與人多發性骨髓瘤的發病有關的重要的癌基因。同樣，存在于第11號染色體q23區的基因已知有RDX基因、FDXl基因、ARHGAP20基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因。在NCBI的數據庫中，各基因的RefSeqID分別被登記為RDX(radixin)為NM-002906;FDX1(ferredoxin1,核基因編碼的腺茅立體蛋白質(nucleargeneencodingmitochondrialprotein))為雇-004109;ARHGAP20(RhoGTPase激活蛋白20)為NM-020809;LAYN(layilin)為NM-178834;SNF1LK2(SNFl-樣激酶2)為NM-015191;PPP2R1B存在2種剪切變型體(蛋白磷酸化酶2(proteinphosphatase2)(以前為2A)))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))、調節亞單元A(regulatorysubunitA)(PR65)、卩同功型(卩isoform)(PPP2R1B)、轉錄變體l，或者，蛋白磷酸化酶2(proteinphosphatase2)(以前為2A)))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))、調節亞單元A(regulatorysubunitA)(PR65)、卩同功型(卩isoform)(PPP2R1B)、轉錄變體2)，分別為NM-002716或NM-181699;ALG9(天門冬氨酸連接的糖基化9同系物，asparagine-linkedglycosylation9homolog(a-l，2-甘露糖轉移酶，S.cerevisiae，alpha-1,2-mannosyltransferase))為NM-024740。如上所述，作為本發明的癌癥檢測方法的一個示例，可以列舉在多發性骨髓瘤細胞中以檢測人POU2AFl基因擴增為特征的一種方法。作為人P0U2AF1基因擴增的檢測對象的多發性骨髓瘤細胞，最合適的是檢體提供者的活檢細胞。該檢體細胞不拘是正常人的骨髓細胞、血液細胞還是多發性骨髓瘤患者的腫瘤細胞，在實際中主要是以下述細胞為對象經檢査結果懷疑認為骨髓有腫瘤化征兆的該病變細胞，或者，己經確定為多發性骨髓瘤而需要判定其進展程度或恢復程度的多發性骨髓瘤細胞等。當由本發明的檢測方法而認為在"據檢査結果懷疑有骨髓腫瘤化病變部位時的病變細胞"中，發現人POU2AFl擴增時，其表示該病變細胞正在向腫瘤化發展或已經處于腫瘤化狀態、而且惡性程度在持續增高，需要立即進行實質治療(實質的化學療法等)。而認為在"雖然已經確定為多發性骨髓瘤，但是需要判定其類型的多發性骨髓瘤細胞"中，發現人POU2AF1擴增時，其表示需要進行該腫瘤細胞的分類、進行適當的實質治療(實質的化學療法等)。可對作為檢體而采集的多發性骨髓瘤細胞進行必要的處理，例如對采集的細胞進行調節其DNA或RNA，作為進行本檢測方法的對象。本發明中，如上所述，可以通過檢測多發性骨髓瘤細胞中的人POU2AF1基因的擴增，對該細胞的腫瘤化進行檢測和/或分類。本發明中，以檢體中第11號染色體q23區域的基因的擴增為指標來對檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。對需進行所述檢測和/或分類的癌的種類不做特別限定，只要其第11號染色體q23區域的基因顯示擴增即可。例如為惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、直腸癌、結腸癌、輸尿管腫瘤、膽囊癌、膽管癌、膽道癌、乳癌、肝癌、胰腺癌、睪丸腫瘤、上頜癌、舌癌、唇癌、口腔癌、咽癌、喉癌、卵巢癌、子宮癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腦腫瘤、皮膚多發性出血性肉瘤、血管瘤、白血病、真性多血癥、神經胚細胞瘤、視網膜胚細胞瘤、骨髓瘤、膀胱瘤、肉瘤、骨肉瘤、肌肉瘤、皮膚癌、基底細胞癌、皮膚附件癌、皮膚轉移癌、皮膚黑色素瘤等等，但并不僅僅限于這些。上述中特別優選的作為適用對象的癌是骨髓癌。本發明方法中，作為擴增的指標而使用的11號染色體q23區域的基因，例如可以列舉為RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因和ALG9基因。在本發明的方法中，同正常檢體比較，上述基因的擴增量為大于等于1.32倍、優選為大于等于1.5倍、更優選為大于等于2倍、更優選為大于等于3倍、再進一步優選為大于等于4倍、特別優選為大于等于5倍時，可以判斷為其顯示腫瘤化。可以直接進行所述人POU2AFl基因等的11號染色體q23區域的基因的擴增檢測的代表性的方法可以列舉CGH(comparativegenomichybridization，比較基因組雜交)法、FISH(FluorescenceInSituHybridization,熒光原位雜交)法。這些形式的本發明的檢測方法可以對具有人POU2AF1基因的BAC(BacterialArtificialChromosome,細菌人工染色體)DNA、YAC(YeastArtificialChromosome,酵母人工染色體)DNA或PAC(PhageArtificialChromosome,噬菌體人工染色體)DNA(下面也稱為BACDNA等)進行標記后，進行FISH時，即可以檢測到人POU2AF1基因的擴增部分。具體來說，含有人POU2AF1基因的BACDNA可以列舉RP11-262A12、RP11-686G14、RP11-792P2等。采用基因組DNA被固定在其上的基質來進行上述方法是合適的，而且是現實的。對于批量制造其中基因組DNA被固定于其上的基質并將該基質投入實際應用來說，由于通常所得到的BACDNA的量很少，所以就需要將該DNA作為基因擴增產物而獲得(該基因擴增過程也稱為"無窮化")。在該無窮化過程中，首先將BACDNA等用識別4堿基的酶例如Rsal、Dpnl、Hae111等消化以后，加入接頭進行連接。接頭為10-30個堿基、特別合適的是15-25個堿基組成的寡核苷酸，具有2條互補序列的鏈，經退火以后，形成平末端的3'-末端的寡核苷酸需要磷酸化。接下來，采用與所述接頭的寡核苷酸具有相同序列的引物，通過聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)法進行擴增，即可以實現無窮化。另一方面，可以將各BACDNA等中的特征性的50-70個堿基的氨基化寡核苷酸作為檢測用探針。這樣，通過將無窮化的BACDNA等固定于基質上、特別合適的是固定于固體基質上，即可以制備出所希望的DNA固定化基質。所述固體基質優選為玻璃板。玻璃等固體基質更優選通過聚-L-賴氨酸、氨基硅垸、金*鋁等的沉積將該基質進行包被。點接于基質上的上述無窮化的DNA的濃度優選為10pg15pg1。更優選為lng/|il200ng/^il。點接量優選為lnllpl，更優選為10nl100nl。對固定于基質上的各個樣點的大小和形狀不作特別限定，例如，大小可以為直徑0.01lmm，從上面看的形狀可以為圓形橢圓形。對干燥樣點的厚度也不作特別限定，為1100pm。進一步，對樣點的個數不作特別限定，一般每個基質具有1050,000個樣點，更優選為1005,000個樣點。雖然各個DNA的點接次數在一次至四次的范圍內，但優選兩次重復或三次重復點接。干燥點的制備可以通過采用點樣儀將無窮化的BACDNA等滴接于基質上，形成多個點以后，將點干燥而制得。點樣儀可以使用噴墨式打印機、針式陣列打印機、雙噴射式(注冊商標)打印機，優選使用噴墨式打印機。例如，可以使用Geneshot(日本名古屋市的力'<>株式會社生產)等。這樣，通過將無窮化的BACDNA等固定于基質上，特別合適的是固定于固體基質上，即可以制備出所希望的DNA固定化基質。另外，作為直接檢測人P0U2AF1基因擴增的手段之一，可以列舉Sorthern印跡法。Sorthern印跡法是將從試樣得到的基因組DNA分離、固定，通過檢測該基因組DNA與人P0U2AF1基因的雜交來檢測試樣中該基因存在的方法。而且，作為直接檢測人P0U2AF1基因擴增的手段之一，也可以使用PCR法。由被檢檢體中分離基因組DNA，用可以全部或局部擴增該基因的引物進行擴增以后，通過定量手段即可以進行檢測。而且，還可以通過Northern印跡法、實時RT-PCR法進行人P0U2AF1基因的擴增檢測。Northern印跡是一種將由檢體中獲得的mRNA分離、固定，通過檢測該mRNA與人P0U2AF1基因的雜交、從而檢測該檢體中該基因的mRNA存在的一種方法。實時RT-PCR法是通過逆轉錄反應和聚合酶鏈式反應進行目標基因擴增、并實時測定的一種方法，根據擴增倍率即可以對作為模板的mRNA進行定量。該定量可以采用熒光色素來進行，有兩種方法。SP:采用在雙鏈DNA中特異性插入(intercalate)發出熒光的色素(例如，SYBR綠)的方法和采用在擴增的DNA序列中的特異性寡核苷酸上結合有熒光色素的探針的方法。在本發明方法中，還可以在檢體中以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的任意一個基因的表達增強為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類，從而檢測癌癥。例如，在本發明中，采用針對POU2AF1蛋白質的抗體或抗體片斷來分析檢測檢體中的P0U2AF1蛋白質的量，以P0U2AF1基因的表達增強為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類，從而檢測癌癥。對于POU2AF1基因以外的其它基因表達，也可以采用針對該基因編碼的蛋白質的抗體或抗體片斷來進行同樣的分析。下面，以P0U2AF1基因的表達增強為指標時的情況為例進行說明。本方法中所使用的針對P0U2AF1蛋白質的抗體(下面稱為P0U2AF1抗體)可以以P0U2AF1蛋白質的全部或一部分作為抗原、按通常的方法制備而成。所謂"POU2AFl蛋白質的一部分"是指由序列編號2(SEQIDNO:2)中所示POU2AF1蛋白質的氨基酸序列中的例如至少6個連續氨基酸、優選至少約810個氨基酸、進一步更優選至少約1120個氨基酸所組成的多肽。作為抗原的POU2AF1蛋白質的全部或一部分的制備方法可以是生物學方法或化學合成方法中任意一種。例如，可以通過將上述抗原多次接種于小鼠、豚鼠、兔等動物的皮下、肌肉內、腹腔內、靜脈內等，充分免疫以后，從該動物采血、分離血清，制備多克隆抗體。例如，可以通過將采用上述抗原免疫后的小鼠脾細胞與市售的小鼠骨髓瘤細胞通過細胞融合制得雜交瘤以后，從該雜交瘤的培養液上清液中或給予該雜交瘤的小鼠的腹水中制得單克隆抗體。通過采用按上述方法制得的POU2AF1蛋白質抗體或其片斷，可以分析受試檢體中P0U2AF1蛋白質的表達量。測定時，可以使用免疫印跡法、酶免疫測定法(EIA)、放射免疫測定法(RIA)、熒光抗體法、免疫細胞染色等等免疫學方法、或者Western印跡法等等。這里，所謂"POU2AFl蛋白質抗體的片段"是指該抗體的單鏈抗體片段(scFV)等。受試檢體可以采用疑似腫瘤的骨髓檢體、組織切片、血液、淋巴液、咳痰、肺清洗液、尿液、糞便、組織培養上清液等等。(2)抑制細胞增殖的方法以及細胞增殖抑制劑根據本發明，提供一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因在體外導入到腫瘤細胞中。并且，本發明提供一種細胞增殖抑制劑，其包括上述siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。進一步，根據本發明，提供一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質在體外導入到腫瘤細胞中；而且，提供一種包含上述功能缺失型蛋白質的細胞增殖抑制劑。siRNA為約20個堿基(例如為約2123個堿基)或者不足20個堿基長度的雙鏈RNA。通過在細胞中表達這種siRNA，即可以抑制作為該siRNA的靶標的基因(在本發明中是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因)的表達。只要能夠引發RNAi，本發明中所使用的siRNA可以是任何形式。這里，所謂"siRNA"是"短干擾RNA(shortinterferingRNA)"的簡稱，或者是人工化學合成的，或者是生物化學方法合成的，或者是在生物體內合成的，或者是40個堿基以上的雙鏈RNA在體內分解為10個堿基對以上的短雙鏈RNA。通常，其具有5'-磷酸、3'-OH的結構，3'末端有約2個突出的堿基。該siRNA與特異性蛋白質結合，形成RISC(RNA-induced-silencing-complex,RNA誘導的沉默復合物)。該復合物能夠識別與該siRNA具有相同序列的mRNA并與之結合，發揮RNaseIII樣的酶活性，在siRNA的中央部將mRNA切斷。優選的是，siRNA的序列與作為被切割靶標的mRNA的序列100%—致，但是，在siRNA的中央位置以外的堿基不一致的情形下，多數情況下RNAi的切斷活性還會部分殘留，所以也可不必100%—致。優選的是，siRNA的堿基序列與表達應該被抑制的RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的堿基序列之間具有相同性的區域不包含該基因的翻譯起始區。原因在于由于預想到在翻譯起始區中siRNA會與各種轉錄因子、翻譯因子結合，從而在效果上就會不能與mRNA結合，可以預測其效果會降低。因此，具有相同性的序列，優選為距離該基因翻譯起始區20個堿基，更優選為距離該基因翻譯起始區70個堿基。具有相同性的序列例如可以是該基因3'末端附近的序列。根據本發明的另外一種實施形式，作為通過RNAi抑制目標基因表達的因子，其還可以使用3'末端具有一個突出部的短的發卡式結構的shRNA(shorthairpinRNA)。所謂"shRNA"是指通過在單鏈RNA中包含部分回文結構的堿基序列、從而在分子內形成雙鏈結構、形成類似于發卡一樣的結構的約20個堿基對以上的分子。這樣的shRNA被導入細胞內以后，在細胞內被分解為約20個堿基(代表性地為例如21個堿基、22個堿基、23個堿基)的長度，與siRNA—樣可以引發RNAi。如上所述，shRNA由于可以與siRNA—樣引發RNAi，在本發明中也可以有效地加以應用。shRNA優選具有3'突出末端。雖然對雙鏈部分的長度并不做特別限定，但優選為約10個核苷酸以上，更優選為約20個核苷酸以上。這里，3'突出末端優選為DNA，更優選為至少2個核苷酸以上的DNA，進一步更優選為24個核苷酸的DNA。如上所述，在本發明中，作為可以通過RNAi來抑制RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的表達的因子，可以使用siRNA或者shRNA。siRNA的優點在于(1)即便是導入到細胞內部，RNA本身也不會重組入正常細胞的染色體中，所以其不是一種能夠引起遺傳給后代的變異的治療方法，安全性較高；和，(2)短雙鏈RNA的化學合成比較容易，形成雙鏈形式比較穩定，等等。而shRNA的優點是通過長期抑制基因表達進行治療時，可以在細胞內形成轉錄有shRNA的載體，然后將其導入到細胞內部。通過本發明中所使用的RNAi來抑制RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因表達的siRNA或者shRNA可以是人工化學合成，也可以將由正義鏈和反義鏈的DNA序列反向連接形成的發卡結構的DNA通過T7RNA聚合酶在體外合成RNA而制備。體外合成時，使用T7RNA聚合酶和T7啟動子，由模板DNA可以合成反義和正義的RNA。將它們在體外退火以后導入細胞內，即可以引發RNAi，抑制目標基因的表達。這里，可以采用例如磷酸f5法、或者各種轉染試劑(例如oligofectamine、lipofectamine和lipofection)將那些RNA導入細胞內。上述siRNA或者shRNA可以作為細胞增殖抑制劑使用。本發明的細胞增殖抑制劑的給藥方法可以是經口給藥或非經口給藥(例如靜脈給藥、肌肉給藥、皮下給藥、皮內給藥、粘膜給藥、直腸給藥、陰道給藥、患病部位的局部給藥、皮膚給藥等等)、患部直接給藥等。本發明的制劑作為藥物組合物使用時，必要時可以添加藥學上許可的添加劑。藥學上許可的添加劑的具體例子可以列舉抗氧化劑、保存劑、著色劑、調味劑、以及稀釋劑、乳化劑、懸濁劑、溶劑、填料、增量劑、緩沖劑、傳輸介質、稀釋劑、載體、賦形劑和/或藥學佐劑等。但并不僅限于這些。對本發明的藥劑的制劑形式不作特別限定。例如可以列舉口服液劑、注射劑、緩釋劑等等。將本發明的藥劑作為上述制劑而用于處方時的溶劑可以是水性溶劑也可以是非水性溶劑。進一步，本發明的細胞增殖抑制劑的有效成分siRNA或者shRNA可以以非病毒載體或病毒載體的形式給藥。當為非病毒載體的形式時，可以使用脂質體導入核酸分子的方法(脂質體法、HVJ-脂質體法、陽離子脂質體法、脂質體轉染法、Lipofectamine法等)、顯微注射法、用基因槍與載體(金屬顆粒)一起將核酸分子轉入細胞內的方法等。而當將siRNA或者shRNA以病毒載體形式對生物體給藥時，可以使用重組腺病毒、逆轉錄病毒等病毒載體。在無毒化的逆轉錄病毒、腺病毒、腺病毒伴隨病毒、皰疹病毒、牛痘病毒、痘病毒、脊髓灰質炎病毒、辛德比斯病毒(Sindbisvirus)、仙臺病毒、SV40等DNA病毒或RNA病毒中導入能夠表達siRNA或者shRNA的DNA，使細胞或組織被該重組病毒感染，即可以將基因導入細胞或組織中。根據使用目的、疾病的嚴重程度、患者年齡、體重、性別、既往史、或者有效成分siRNA或者shRNA的種類，本領域技術人員可以決定本發明的細胞增殖抑制劑的給藥量。雖然siRNA或者shRNA的給藥量不作特別限定，例如可為約0.1ng/kg/日約100mg/kg/日，優選為約lng/kg/日約10mg/kg/日。一般是給藥后13日可見RNAi的效果。因此，優選以1日一次3日一次的頻率給藥。使用表達載體時，可以按一周左右給藥一次。本發明中，也可以將反義寡核苷酸作為細胞增殖抑制劑使用。本發明中所使用的反義寡核苷酸為與RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的DNA序列中的連續5100個堿基序列互補的、或雜交的核苷酸，也可以是DNA或RNA任意一個，或者，只要在功能上沒有損害，也可以是它們的修飾物。在本說明書中，所謂"反義寡核苷酸"，不僅指與構成DNA或mRNA的預定區域的核苷酸相對應的核苷酸完全互補的核苷酸，只要DNA或mRNA與寡核苷酸能夠穩定雜交，也可以存在一些錯配。也可以對反義寡核苷酸進行修飾。通過適當的修飾，該反義寡核苷酸在生物體內很難分解，更加穩定，從而可以阻礙ITIIa。這種修飾后的寡核苷酸可以列舉為S-oligo型(硫代磷酸酯型)、C-5噻唑型、D-oligo型(磷酸二酯型)、M-oligo型(甲基磷酸酯型)、肽核酸型、磷酸二酯鍵型、C-5丙烯基嘧啶型、2-0-丙基核糖、2'-甲氧基乙氧基核糖型等修飾型的反義寡核苷酸。而且，反義寡核苷酸也可以是通過將構成磷酸基團的氧原子的至少一部分為硫原子取代而被修飾。這種反義寡核苷酸的核酸酶耐受性、水溶性、對RNA的親和性特別優異。將構成磷酸基團的氧原子的至少一部分為硫原子取代而被修飾的反義寡核苷酸例如可以是S-01igO型等的寡核苷酸。反義寡核苷酸的堿基數優選為小于等于50個，更優選為小于等于25個。堿基數過多會導致寡核苷酸的合成的工夫與成本大大增加，收率也會降低。而反義寡核苷酸的堿基數為大于等于5個，優選為大于等于9個。堿基數小于等于4個時，對目標基因的特異性降低，所以是不優選的。反義寡核苷酸(或其衍生物)可以通過通常的方法合成，例如，通過市售的DNA合成裝置(例如AppliedBiosystems公司制造的等等)即可以很容易地合成。作為合成法，采用Phosphoroamidite的固相合成法、采用氫膦酸酯的固相合成法等等均可以獲得。在本發明中，當反義寡核苷酸用作細胞增殖抑制劑時，一般是以包含反義寡核苷酸和制劑用添加物(載體、賦形劑等)的藥物組合物的形式提供的。可以對包括人在內的哺乳動物以藥物形式給予反義寡核苷酸。對反義寡核苷酸的給藥途徑不作特別限定，經口給藥或非經口給藥(例如肌肉給藥、靜脈給藥、皮下給藥、腹腔給藥、鼻腔等粘膜給藥、或者吸入給藥等)中的任意一種均可。對反義寡核苷酸的制劑形式不作特別限定。經口給藥的制劑例如可以列舉片劑、膠囊劑、細粒劑、粉末劑、顆粒劑、口服液劑、糖漿劑等；非經口給藥的制劑例如可以列舉注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、黏膜吸收劑、皮膚吸收劑、滴鼻劑、滴耳劑等等。包含反義寡核苷酸的藥劑的形式、可使用的制劑用添加物、制劑的制造方法等本領域技術人員均可適當地選擇。反義寡核苷酸的給藥量可以綜合考慮患者的性別、年齡、體重、疾病的嚴重程度、給藥目的為預防還是治療、或者其它合并癥狀的有無等等而適當地選擇，但一般給藥量為約0.1嗎/kg體重/日100mg/kg體重/日，優選為約0.1嗎/kg體重/日10mg/kg體重/日。本發明中，也可以將RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的功能缺失型基因作為細胞增殖抑制劑使用。所謂"功能缺失型基因"是指在該基因中導入變異以使其功能缺失的基因。具體來說，與此相對應的基因是翻譯成一般被稱為突變蛋白質的基因，突變蛋白質是指由該基因形成的氨基酸序列中至少一個組成氨基酸缺失、至少一個組成氨基酸被別的氨基酸取代、至少一個氨基酸被附加等原本固有的功能喪失了的蛋白質。當功能缺失型基因作為細胞增殖抑制劑使用時，可以通過將作為有效成分的上述基因與基因治療劑中通常使用的基劑共同配合而制備。而且，當將上述基因重組入病毒載體時，制備含有該重組載體的病毒粒子，將其與基因治療劑中通常使用的基劑共同配合。上述基劑可以使用通常注射液中使用的基劑，例如，蒸餾水、氯化鈉或氯化鉀與無機鹽的混合物等的鹽溶液、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖等的溶液、甘氨酸、精氨酸等的氨基酸溶液、有機酸溶液或鹽溶液與葡萄糖溶液的混合溶液等。或者，根據本領域技術人員公知的常用方法，也可以在這些基劑中使用滲透壓調節劑、pH調節劑、植物油、表面活性劑等佐劑，以溶液、懸濁液、分散液的形式配制成注射劑。這些注射劑可以通過粉末化、凍干等操作制備成用時溶解的制劑。功能缺失型基因的給藥形式可以是通常的靜脈內、動脈內等全身給藥，或者也可以是局部注射或經口給藥等局部給藥方式。給藥時，也可以采用與插管技術、基因導入技術、或者外科手術等的組合給藥形式。功能缺失型基因的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數、劑型等等而異，但一般成年人每日攝入的重組基因的重量在l嗎/kg體重至1000mg/kg體重左右的范圍內。優選為從10]ug/kg體重至100mg/kg體重左右的范圍內。對給藥次數不作特別限定。上述本發明的各種基因治療劑也可以在按常法制備的脂質體懸濁液中添加基因、通過冷凍后融解而制得。制備脂質體的方法有薄膜震蕩法、超聲波法、逆相蒸發法、表面活性劑去除法等。優選的是，在超聲波處理脂質體懸浮液以后，添加基因可以提高基因的包封率。包封有基因的脂質體可以直接或與水、生理鹽水等混懸后靜脈給藥。進一步，本發明還可以將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質用作細胞增殖抑制劑(即，蛋白質制劑)。例如，將P0U2AF1基因的功能缺失型蛋白質作為細胞增殖抑制劑使用時，可以以藥物組合物的形式使用，該藥物組合物包含作為有效成分的功能缺失型P0U2AF1蛋白質或其功能缺失型的等同蛋白質、制劑用添加物(例如載體、賦形劑等)。對上述蛋白質制劑的形式不作特別限定。經口給藥的制劑例如可以列舉片劑、膠囊劑、細粒劑、粉末劑、顆粒劑、口服液劑、糖漿劑等；非經口給藥的制劑例如可以列舉注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、黏膜吸收劑、皮膚吸收劑等等。對上述蛋白質制劑的給藥途徑不作特別限定，經口給藥或非經口給藥(例如肌肉給藥、靜脈給藥、皮下給藥、腹腔給藥等粘膜給藥、或者吸入給藥等等)中的任意一種均可。上述蛋白質治療劑的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數、劑型等等而異，但一般成年人每日的攝入量在0.001ng/kg體重1000iig/kg體重左右的范圍內。優選為在0.001嗎/kg體重10(Hig/kg體重左右的范圍內。對給藥次數不作特別限定。上述本發明的細胞增殖抑制劑可以以其有效劑量通過對包括人在內的哺乳動物進行給藥用于抑制腫瘤。而且，上述抗腫瘤劑也可以以其預防和/或治療有效劑量通過對包括人在內的哺乳動物進行給藥用于預防和/或治療腫瘤。(3)細胞增殖的激活方法以及細胞增殖激活劑根據本發明，進一步提供一種激活細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導入到細胞中。而且提供一種包括上述基因的細胞增殖激活劑。在處理P0U2AF1基因時，基因也可以是本領域技術人員采用公知的技術從培養細胞等中獲得的cDNA，或者也可以是基于本說明書SEQIDNO:l所述的堿基序列，通過PCR法等進行酶學合成得到的DNA。當通過PCR法來獲取具有SEQIDNO:1所述堿基序列的DNA的時候，使用人染色體DNA或cDNA文庫作為模板，設計可以擴增SEQIDNO:1所述堿基序列的引物，使用該引物進行PCR擴增，PCR擴增的DNA片斷在大腸桿菌等宿主體內可以克隆進入能夠擴增的適當的載體中。POU2AF1基因的檢測探針或引物的制備、以及目的基因的克隆等等操作對于本領域技術人員來說均是已知的，例如，可以參照1989年冷泉港實驗室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆實驗手冊(第2版)"，或JohnWiley&Sons19871997年出版的"CurrentProtocolsinMolecularBiology,Supplement138"等記載的方法進行制備。而當處理的是POU2AF1基因以外的其它基因時，可以按與POU2AF1基因的情形同樣進行。從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因可以重組入載體中以重組載體的形式使用。載體為病毒載體或動物細胞表達用載體，優選使用病毒載體。作為病毒載體，可以列舉逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺病毒伴隨病毒載體、桿狀病毒載體、牛痘病毒載體、慢病毒載體等。其中，由于逆轉錄病毒載體在感染細胞以后病毒基因組整合進入宿主染色體內，從而可以使整合進入載體內的外源基因能夠穩定、長期地表達，所以特別優選使用逆轉錄病毒載體。動物細胞表達用載體例如可以采用pCXN2(Gene,1991年第108巻第193-200頁)或PAGE207(日本特開平6-46841號公報)或其變體等。將上述重組載體導入到適當的宿主中進行轉化，對得到的轉化體進行培養即可以進行生產。當重組載體為病毒載體時，導入該載體的宿主可以采用具有產生病毒能力的細胞，例如，COS-7細胞、CHO細胞、BALB/3T3細胞、HeLa細胞等等。逆轉錄病毒載體的宿主可以使用YCRE、甲CRIP、MLV等；腺病毒載體及腺病毒伴隨病毒載體的宿主可以是來源于人胎兒腎臟的293細胞等。可以采用磷酸鈣法等將病毒載體導入到動物細胞內。而重組載體為動物細胞表達用載體時，導入該載體的宿主可以使用大腸桿菌K12菌株、HB101菌株、DH5a菌株等，大腸桿菌的轉化是本領域技術人員公知的。所得到的轉化體分別在合適的培養基、培養條件下培養。例如，大腸桿菌轉化體的培養可以使用含有生長發育所必需的碳源、氮源、無機物以及其它物質的pH58左右的液體培養基來進行培養。通常在1543'C培養約824小時左右。此時，在培養結束以后，目的重組載體可以通過通常的DNA分離純化方法制得。動物細胞轉化體的培養例如可以使用含有約520%胎牛血清的199培養基、MEM培養基、DMEM培養基等進行培養。培養基的pH優選為約68。通常在304(TC培養約18~60小時。此時，由于含有該載體的病毒粒子釋放于培養上清中，目的重組載體可以經病毒粒子濃縮、氯化銫離心純化法、聚乙二醇沉淀法、過濾濃縮法等等進行制備。本發明的細胞增殖激活劑可以通過將作為有效成分的上述基因或其等同基因與基因治療劑中通常使用的基劑一起配合而制得。而且，當將上述基因或其等同基因重組整合進入病毒載體中時，制備含有重組載體的病毒粒子，將其與基因治療劑中通常使用的基劑一起配合。本發明中的所謂"等同基因"是指在某個特定基因的堿基序列中有l個至多個堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列的基因；或者是具有與某個特定基因的堿基序列在嚴謹條件下雜交的堿基序列的基因。本發明所述的"等同基因"優選的是具有對腫瘤化活性的蛋白質進行編碼的堿基序列的基因。而且，某一基因的等同基因也包括該基因的片段。上述"在堿基序列中1個至多個堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列"中，對"l個至多個"的范圍并不作特別限定，例如，其意指1個至60個，優選為1個至30個，更優選為1個至20個，進一步優選為1個至10個，特別優選為意指1個至5個左右。上述"在某一特定的堿基序列中具有1個至多個堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列的基因"可以通過化學合成、基因工程方法或誘發突變等本領域技術人員已知的任意方法進行制備。具體而言，利用上述特定的基因，通過在這些DNA中導入變異即可以獲得上述基因。例如，對于上述特定基因，可以采用與作為變異原的藥劑接觸的方法、采用紫外線照射的方法、采用基因工程的方法等等來進行。作為基因工程的方法之一，定點特異誘變法由于可以在特定位置上引入特定變異而非常有用，可以參照1989年冷泉港實驗室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆試驗手冊(第2版)"或JohnWiley&Sons19871997年出版的"CurrentProtocolsinMolecularBiology,Supplement138"等記載的方法進行制備。上述"在嚴謹條件下雜交的堿基序列"是指將DNA作為探針使用、采用菌落雜交法、噬菌斑雜交法、或者Southern印記雜交法等而得到的DNA的堿基序列。例如，可以列舉的是，采用固定有來源于菌落或噬菌斑的DNA或該DNA片段的濾膜，在0.71.0M的NaCl存在下，在65T進行雜交以后，使用0.12xSSC溶液(lxSSC溶液含有150mM氯化鈉、15mM檸檬酸鈉)在65"C條件下清洗膜，以此來鑒定獲得的DNA等。雜交可以參照1989年冷泉港實驗室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆試驗手冊(第2版)"等記載的方法進行。在嚴謹條件下雜交的DNA可以列舉與作為探針使用的DNA堿基序列具有一定程度以上的同源性的DNA，例如，具有70%以上，優選80%以上，更優選90%以上，進一步優選93%以上，特別優選95%以上同源性的DNA。上述的所謂"具有與某一特定堿基序列在嚴謹條件下雜交的堿基序列的基因"，如上所述，可以在一定嚴謹度雜交條件下通過采用菌落雜交法、噬菌斑雜交法、或者Southern印記雜交法等而得到。為了配合作為有效成分的上述基因或其等同基因，所使用的基劑可以使用通常注射液中使用的基劑，例如，蒸餾水、氯化鈉或氯化鉀與無機鹽的混合物等的鹽溶液、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖等的溶液、甘氨酸、精氨酸等氨基酸溶液、有機酸溶液或鹽溶液與葡萄糖溶液的混合溶液等等。或者，根據本領域技術人員公知的常用方法，也可以在這些基劑中使用滲透壓調節劑、pH調節劑、植物油、表面活性劑等佐劑，以溶液、懸濁液、分散液的形式調制為注射劑。這些注射劑可以通過粉末化、凍干等操作制備為用時溶解的制劑。本發明的細胞增殖激活劑的給藥形式可以是通常的靜脈內、動脈內等的全身給藥方式，或者也可以是局部注射或經口給藥等局部給藥方式。當細胞增殖激活劑在給藥時，也可以采用與插管技術、基因導入技術、或者外科手術等的組合給藥形式。本發明的細胞增殖激活劑的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數、劑型等等而異，但一般成年人每日攝入的重組基因的重量在lpg/kg體重至1000mg/kg體重左右的范圍內。優選為從10叫/kg體重至100mg/kg體重左右的范圍內。對給藥次數不作特別限定。下面通過實施例進一步詳細地說明本發明，但本發明并不特別限定于以下這些實施例。實施例試驗材料所使用的28種來源于多發性骨髓瘤的細胞株為由臨床檢體建立的AMOl、KMM1、KM-1、KM-4、KM-5、KM-6、KM-7、KM-ll、KMS-5、KMS陽ll、KMS-18、KMS-20、KMS-26、KMS-27、KMS-34、KMS匿12BM、KMS-12PE、KMS-21BM、KMS-21PE、KMS-28BM、KMS匿28PE、HS、ILKM-IO、IL認-12、ILKM-13、MOLP-2、MOLP-6、OPM-2以及一種用Epstein-Barr病毒轉化的來源于正常健康人淋巴細胞的細胞株。這些細胞株在10%胎牛血清的存在下在RPMI-1640培養基中進行培養。來源于臨床檢體中的32人的骨髓檢體獲自名古屋市立大學醫院，取得了各患者的同意且得到了該醫院的倫理委員會的認可。通過采用抗CD-138抗體珠的自動磁性細胞分選系統(德國美天旎生物技術公司生產)進行陽性分選來篩選診斷時的來源于多發性骨髓瘤的細胞。實施例l:多發性骨髓瘤細胞中的人基因區域的擴增及缺失為了擴增檢測出多發性骨髓瘤中的新型基因，采用由28種多發性骨髓瘤細胞制備的基因組DNA，采用MCGCancerArray-800型分析儀來分析CGH陣列。以來源于正常人淋巴細胞的細胞株的基因組DNA為研究對象用Cy5進行標記；以由上述多發性骨髓瘤細胞制備的基因組DNA為被檢DNA采用Cy3進行標記。具體地講，是將DpnII消化基因組DNA(0.5)tig)、分別在0.6mMdATP、0.6mMdTTP、0.6mMdGTP、0.3mMdCTP、0.3mMCy3-dCTP(多發性骨髓瘤細胞)或者0.3mMCy5-dCTP(正常細胞)的存在下，用BioPrimeArrayCGHGenomicLabelingSystem(Invitrogen公司生產)進行標記。Cy3禾口Cy5標記的dCTP購自AmershamBiosciences公司。在Cot-1DNA(Invitrogen公司生產)的存在下將兩種標記的基因組DNA加入乙醇中使其沉淀，然后溶解于120^1的雜交混合液(50%甲酰胺、10%硫酸葡聚糖(Dextransulfate)、2xSSC(lxSSC:150mMNaCl/15mM檸檬酸鈉)、4%SDS、pH7.0)中，在37。C孵育30分鐘以后，加到設于雜交室中的CGH陣列上，在37t:下以3rpm(轉/分鐘)的速度邊震蕩邊孵育4872小時。然后，將CGH陣列在50。/。甲酰胺/2xSSC溶液(pH7.0)中在50。C下清洗15分鐘，接下來在2xSSC/0.1%SDS中于50。C下清洗15分鐘。風干以后，將CGH陣列用GenePix4000B掃描儀(美國加利福尼亞州AxonInstruments公司制造)監測來源于Cy3和Cy5的熒光。得到的結果用GenePixPro6.0成像軟件(美國加利福尼亞州AxonInstruments公司制造)進行分析。將來源于Cy3的熒光強度的平均值和來源于Cy5的熒光強度的平均值調整為相同值，通過求得的Cy3/Cy5的比值來檢測出各個基因的由陣列CGH所得到的量的變化。當在基因組中沒有異常時，Cy3/Cy5的比值為1，而該比值以2為底的log值為正或負偏離0.4以上時被判定為基因異常(擴增或缺失)。關于擴增和缺失的染色體區域的異常，參照在縱軸上的擴增(綠色)、缺失(紅色)、在橫軸上的UCSC作圖位置(http:〃genome.ucsc.edu/[versionMay,2004])，相對于全部細胞株的異常細胞頻率以染色體位置的形式被示出(圖1)。在lq、7q、8q上出現擴增的頻率為50%以上，而在lp、13q、14q、17p、22q上出現缺失的頻率為50%以上。在14q32觀察到了最大頻率的缺失，是隨著在眾多的白血病、骨髓瘤中觀察到的免疫球蛋白重鏈恒定區Yl基因(immunoglobulinheavyconstantgamma1gene,IGHG1)的轉座的缺失所致。進一步，將其分類為高水平擴增(log2比值>2.0)、和同源缺失Uog2比值《2.0)，將變化大的基因與被觀察的細胞一同列出(表1)。表l:根據陣列CGH分析(MCGCancerArray-800)，在多發性骨髓瘤細胞中顯示高水平擴增(log2比值>2.0)、和同源缺失(log2比值<-2.0)的基因群<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>a根據UCSCGenomeBrowser(2004年5月裝)b代表性候選的與腫瘤有關的基因或位于BAC附近的標記物在28個細胞株中，11株觀察到了同源缺失的基因，在KMS-5細胞中觀察到9p21.3區域的MTAP和CDKN2A/pl6的缺失。另外，在28株細胞株中有11株觀察到了高水平擴增的16個基因。其中，在AMOl和MOLP-2兩株細胞中，llq23區的POU2AF1和PPP2R1B基因表現擴增。由于基因擴增在腫瘤病理學、臨床上的意義很大，與治療方法密切相聯，所以對該llq23區域進行了進一步分析。實施例2:AMOl和MOLP-2細胞中的FISH分析對實施例1用CGH陣列法確定的llq23區域的染色體區域，采用RPll-792p2的BAC克隆，按已知方法(InoueJ,OtsukiT,HirasawaA，等在AmJPathol.2004年第165巻第7181頁)進行FISH分析(圖2)。兩個細胞株在原本染色體位置上的FISH信號(箭頭)以外，還觀察到了由多拷貝構成的強擴增信號(楔形)，從而證實了確實發生了基因擴增。實施例3:由AMOl和MOLP-2細胞中的FISH分析進行擴增區域的精細定位與構成基因的表達分析采用以RP11-792P2為大致中心的15種BAC克隆進行FISH分析，由其熒光信號強度將對應的基因組區域的拷貝數做圖(圖3左)。縱軸表示在llq23區域BAC克隆ID和它們的相對位置。平均染色亮度最高的區域(均質染色區，HSRs)在兩種細胞間幾乎一致，這兩個區域被定位于RP11-25I9與708L7之間約3Mb(megabase)的位置上。接下來，對存在于已定位的llq23區域的AMOKRDX、ARHGAP20、POU2AFl、SNF1LK2、PPP2R1B、ALG9基因進行以簡易定量為目的的PCR反應。作為RT-PCR的表達量對照，采用已知道表達量不會隨細胞種類、條件變化而變化的GAPDH。從對數增長期的各細胞提取總RNA以后，按照常法制備cDNA。預先設定好各基因的特異的引物和條件，進行PCR反應后進行3。/。瓊脂糖凝膠電泳。用LAS-3000(富士寫真膠巻株式會社生產)測定凝膠圖像，用MultiGauge軟件(富士寫真膠巻株式會社生產)進行圖像分析(圖3右)。所采用的細胞株除了在11q23區域有擴增的AMOl、MOLP-2以外，還有在該區域沒有觀察到擴增的KMM1、KM-5以及作為對照的來源于正常人的LCL(淋巴細胞克隆)。其定量結果匯總于表2。表2在11q23區域中觀察到基因組DNA有擴增的區域的細胞以及沒有擴增的細胞中，存在于該區域的基因的表達分析比較<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>a每個細胞株中每個基因的表達水平被KMM1和KM-5細胞株中每個基因表達水平的平均值(參考值)相除后作為表達水平的增加倍數。用GAPDH標準化，KMM1和KM-5細胞株具有標準的llq拷貝數。相對表達水平的增加倍數>2.0時可以認為是顯著的，以黑粗體表示出。1lq23區域作為擴增結果的顯著過表達的單個基因以灰色背景示出。bN.T.表示表達水平低于定量的下限。結果發現，在AMOl和MOLP-2細胞所定位的區域中POU2AF1的基因表達比在基因沒有擴增的細胞(KMMl、KM-5)中的平均表達量升高4.55.0倍。實施例4:多發性骨髓瘤細胞中的P0U2AF1基因的蛋白質表達水平的驗證用Western印跡法對8種多發性骨髓瘤細胞株的P0U2AF1蛋白質的表達量進行了定量(圖4)。將各細胞溶解于含有蛋白酶抑制劑混合物(羅氏診斷公司生產)的RIPA緩沖液U0mMTris-HCl，150mMNaCl，lmMEDTA,1%脫氧膽酸鈉，0.1%SDS,1%TritonX-100,pH7.4)中以后，用BCAarray(Piercechemical公司生產)測定蛋白質濃度，將各10貼進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后，將其復印于difluoride膜上，用抗POU2AF1抗體(SantaCruzBiotechnology公司生產)、作為對照的抗(3-肌動蛋白抗體(Sigma公司生產)進行第一次檢測以后，用結合了過氧化物酶的二抗、經enhancedelectrochemiluminescencesystem(Amersham公司產生)進行顯色檢觀!j。圖中，POU2AFl蛋白質可以觀察到2條帶，除分子量較小的p34以外，還有p35。p34是p35的轉錄后修飾的同功異構型，據報道，對OCT結合因子1的轉錄激活的增強效果較高(YuX,等，Immunity,2001年第14巻第157167頁)。圖的下半部分示出了由FISH測定的POU2AF1基因在基因組DNA上的拷貝數。與預想的相同，在基因組DNA中發現有POU2AFl基因擴增的AMOl和MOLP-2細胞中，相較其它細胞，觀察到了強的P0U2AF1蛋白表達。實施例5:通過向細胞中添加POU2AF1基因的siRNA對POU2AF1蛋白質的表達抑制和細胞增殖的抑制效果將POU2AF1的siRNA設計為POU2AF1-A:CACCUUACACCGAGUAUGU(SEQIDNO:3)、POU2AF1-B:GGUUCUGUGUCUGCAGU(SEQIDNO:4)，購入(日本Bioservice)以后，用Nucleofector(德國)將200nM的各個引物導入到發現有2xl06個POU2AFl基因表達的AMOl和KMS-21BM細胞的基因中。用熒光標記的pmaxGFP分析儀一邊監測其效率，一邊同實施例4一樣進行Western印跡分析(圖5A)。對照釆用抗(3-肌動蛋白抗體。與預想的相同，觀察到了由于siRNA的添加，POU2AFl的表達被抑制。在"104個AMOl和KMS-21BM細胞中導入POU2AF1基因的siRNA以后，將細胞接種于96孔板中，用水溶性四氮唑鹽(WST)分析(Cellcountingkit-8試劑盒，日本同仁堂生產)隨時地測定活細胞個數(圖5B、C)。試驗平行3份，重復進行兩次，星號表示在采用沒有對應的Student'sttest法時兩者有顯著性差別。兩種細胞也都由于導入了POU2AF1的siRNA而增殖被抑制。實施例6:KMS-ll細胞的POU2AF1基因表達細胞株的建立、分布、以及對活細胞數的影響的觀察在全長POU2AFl基因(p34)的N末端結合Myc，構建用于表達的表達載體(pCMV-Tag3-p34-POU2AFl)。將其用Nucleofector導入原本內源性POU2AF1基因表達很低的KMS-ll細胞中，用G418(50叫/ml)進行藥劑篩選3周。用細胞裂解液、經Western印跡法和抗Myc抗體檢測POU2AF1基因表達的有無(圖6A)。同時也準備了在KMS-ll細胞中導入無外源基因的pCMV-3B的細胞，將其作為空白對照。與預想的相同，僅在有基因導入的細胞中檢測到了重組POU2AF1蛋白質。將上述轉化細胞在ShandonCytospin(美國Thermo公司生產)玻璃板上培養、離心以后，用10%甲酰胺固定，用抗Myc多克隆抗體(CellSignalingTechnology公司生產)染色一晚，將反應后的抗體用Alexa488標記的羊抗兔抗體(MolecularProbes公司生產)進行染色，用熒光顯微鏡進行觀察。同時，用DAPI進行核染色。兩者的色調重合后表示為merge(圖6B)。結果確認，P0U2AF1為核內蛋白質與DAPI同樣都能被核染色，其顯示POU2AFl原本的分布。通過用WST分析活細胞數，測定了空白對照細胞和POU2AF1基因表達細胞這兩種細胞的細胞增殖速度(圖6C)。由于POU2AFl基因的導入，細胞增殖速度顯著加快，由此確認了該基因的顯著促進細胞增殖的效果。實施例7:POU2AF1基因的調控基因TNFRSF17根據采用POU2AF1基因敲除的小鼠試驗，已報道POU2AF1基因與免疫球蛋白基因以外的基因表達有關(TeitellMA等，TrendsImmunol.2003年第24巻第546553頁)。與癌的發生、進展、細胞增殖、細胞粘連、轉移等有關的基因已知有BAFFR、TNFRSF17(tumornecrosisfactorreceptorsuperfamily,member17)、Bcl國2、cyclinD3、osteopontin等，通過實時RT-PCR分析發現，在多發性骨髓瘤細胞株中與POU2AF1基因的表達和表現唯一同步的基因就是TNFRSF17(數據沒有示出)。因此，對TNFRSF17的基因表達情況進行了詳細分析(圖7)。首先，對2xl()6個AMOl和KMS-21BM細胞株的細胞，用Nucleofector將200nM的POU2AF1-A禾卩POU2AF1-B的各個siRNA(KMS-21BM細胞中僅為POU2AF1-B)進行基因導入。48小時以后，用實時RT-PCR分析TNFRSF17基因的表達(圖7A)。結果證實，由于兩種細胞中的POU2AF1基因均被敲除，TNFRSF17基因的表達降低。同時制備了實施例6中的KMS-ll細胞的POU2AF1基因表達細胞株與空白對照，采用實時RT-PCR對它們進行了TNFRSF17基因表達的比較分析(圖7B)。在這種情況下，發現在POU2AFl基因被強制表達的細胞中，TNFRSF17基因的表達增強。利用數據庫(RecGroupScan;http:〃www.mgs.bionet.nsc.ru/mgs/programs/yura/RecGroupScanStart.html)對基因組DNA上的人TNFRSF17基因的5'區域搜索轉錄因子結合部位，從而發現從轉錄起始點(+1)上游3642位堿基開始存在有促進POU2AFl轉錄的octamer位點(圖7C)。接下來，對AM01和KMS-ll細胞(空白對照、表達P0U2AF1基因的細胞)的染色質來說，對使用抗P0U2AF1蛋白質的抗體的免疫沉淀物進行PCR以驗證其是否含有octamer位點(圖7D)。所使用的PCR引物如圖7C的箭頭所示，使用了夾有octamer位點的引物。用抗POU2AF1抗體(SantaCruzBiotechnology公司生產)的免疫沉淀物的1/100作為PCR反應的模板，Input為免疫沉淀前的染色體材料，(-)表示沒有免疫沉淀抗體狀態下的陰性對照。如箭頭所示，在表達POU2AF1基因的細胞株中與在表達內源性POU2AF1基因的AMOl細胞中，均檢測出了與POU2AF1蛋白質結合的octamer位點。施例8:使用包含了TNFRSF17基因上游的octamer位點的區域的POU2AF1表達載體和重組的啟動子-報告基因分析用PCR克隆獲得了含有TNFRSF17基因上游的octamer位點的307個堿基對的DNA區域，將包含野生型(wt:TTTAGCAT)和突變型(Mut:TTCCGCAT)的octamer位點的區域導入到載體pGL3-啟動子(Promega)中，分別命名為pGL3-TNFRSF17-野生型octamer和pGL3陽TNFRSF17-突變型octamer。采用lipofectamine2000(Invitrogen公司生產)將上述兩種熒光素酶啟動子-報告基因載體與pCMV-Tag3-POU2AFl的p34或p35以及校正基因導入效率的內標載體phRL-TK(Promega公司生產)一起導入KMS-ll細胞中。48小時以后，采用Dual-LuciferaseReporterAssaysystem(Promega公司生產)進行發光測定。將基因導入的pGL3-TNFRSF17-野生型octamer和pCMV-Tag3(空白對照)的值設定為1，表示相對的熒光素酶活性(圖8)。POU2AF1的異構型p34和p35都為野生型的octamer位點時，雖然其相較于對照顯示出較高的報告基因活性，但由于結合區域的變異導致其活性降低，其證實POU2AF1通過與轉錄因子OCT1或OCT2結合使其活性增強，從而對TNFRSF17基因的表達進行調節。實施例9:POU2AFl、TNFRSF17兩基因的信使RNA的表達相關性用定量PCR法測定多發性骨髓瘤細胞以及由多發性骨髓瘤臨床檢體建立的初級細胞中的POU2AFl、TNFRSF17的基因表達。用相對于(3-肌動蛋白以及卩2-微球蛋白(!32M)的比值來表示(圖9A:細胞株；B:初級細胞)。無論是在細胞株中還是在初級細胞中，P0U2AF1、TNFRSF17兩基因的表達均高度相關，兩者均顯示顯著的p值(在非配對t檢驗中表現出顯著性差異(p<0.05))。由此可以看出，在細胞株中當然不用說，即便是在臨床檢體中，TNFRSF17基因的表達由POU2AF1基因的表達量按正相關的方式進行調控。實施例10:使用siRNA后抑制了TNFRSF17基因表達，所引起的對細胞增殖的抑制效果采用高表達POU2AF1基因的AMOl細胞與可見有表達的KMS-21BM細胞，首先將非特異性序列作為對照siRNA，將200nMP0U2AF1基因、TNFRSF17基因的siRNA(Dharmacon公司生產，M-011217-00)進行基因導入，48小時以后，以p-肌動蛋白為指標，用定量PCR測定POU2AF1基因、TNFRSF17基因的表達(圖10A:POU2AF1;B:TNFRSF17)。與預想一致，由于POU2AF1的siRNA所導致的抑制，POU2AF1基因的表達當然被抑制，但由TNFRSF17基因的siRNA并不能抑制POU2AF1基因的表達，而由POU2AF1的siRNA所導致的抑制能夠抑制TNFRSF17基因的表達。這就說明，POU2AF1基因是在TNFRSF17基因的上游，調控TNFRSF17基因的表達。同時，用WST法檢測了AMOl細胞與KMS-21BM細胞中由TNFRSF17基因的siRNA所導致的抑制后的活細胞數(圖10C)。兩種細胞都是在由TNFRSF17基因的siRNA導入4天后觀察到了細胞增殖的顯著被抑制(星號是非配對t檢驗(p<0.05))。由這些結果可以看出，TNFRSF17基因的表達受POU2AF1基因表達的正調控，其效果就是顯現出細胞增殖效果。實施例的總結(1)通過陣列CGH法進行篩選，將28種來源于多發性骨髓瘤細胞的DNA的基因擴增的篩選與表達分析數據結合起來，確認POU2AF1基因表現異常。(2)P0U2AF1基因的表達位于TNFRSF17基因表達的上游位置，對TNFRSF17基因的表達進行正調控，其效果表現為對細胞增殖的正向調控，具有促進細胞增殖的功能。序列表<110>富士膠片株式會社國立大學法人東京醫科齒科大學〈120〉多發性骨髓瘤的檢測方法及抑制方法<130>F卜071154-59<150>JPNo.255155/2006<151>2006-09-21〈160>4〈170>PatentInversion3.3〈210>〈211><212>〈213〉13314DNAHomosapiens<400>1gaattccggcaggcgcccatggcgggctgagtcctgcccatgccctggtggcctggaagc60ctgcatgggcgccgtgcaaagatcaacgttttccagaggagcttttgggctcatcactgg120cctggggagggcttgacacggggttcccacagcttgccccacaccaccttcacacccaca180cacagcaggtccccgcggggccggtgcaggctgtggctgcccgcgctgcgctgttgctct240gtcccggctggctggctccgagtgtggggcgctctgggccggggccgctggggcgcgcac3003gtggggtg3C3ggCggCCtggCtgC3g333CgttgC3CCggtgCCtgaggtggg3gg3t360gtgatgacgcggcccacgcagcgggaacccaggcctttaaaaagcccaggaaacagcctc420agctcaagcggtggctccactggaggaaaacacaccccggtctcacattaaagaagccaa480actgtcggcttcaaagagaaaaggcaacatcctgtcacaggccatgctctggcaaaaacc540cacagctccggagcaagccccagccccggcccggccataccagggcgtccgtgtgaagga600gccagtgaaggaactgctgaggaggaagcgaggccacgccagcagtggggcagcacctgc660acctacggcggtggtgctgccccstcsgccctgcctggacatggaaggttctgtgtctgcCtggCtCtCCC3gCCC3CCCCggCC3CCCtCg3gt3tgtgCCCC3tg33gCtgtC3gCtgCgtgtgCCCC3gCt3C3CggtggtggggCCactC3tC3CC33tgtC3CgaC33g33gCtCgggCCC3g3gC3CC3ggC3CCCCtC3CCt3aCCC3CCtCC3CCCtgC3gt3CCggCCtCCCCagCtCCCC3tCtCt3tCCC3g3gCC3gtCgCC3gCtCgttg3CC3tCgSC33gCtgCtgcttaaccacactctctctgtggaaggcttcctgaaactggg3ttttaaaatgagcctgggt3gtC3tttCatg3Ct3CtCtttCt3CgCcttcccttcttccttcccctCCCtCCCtC3tcccctccctcccttcttcctttCC3SCCCCCtCCttCCCttCtCCCtttCC33CCCCttccttcccttctccctttccttcttt3cctc3CttCttttttC33ttctgttCC3ttttggtttt3tgtC333tgttgCC33gtctgtggtttCttgg3333ggCCtCCttCCtCC3gtgCCtCtgt33tttt33g3tgtatgtggtggCCtgagaaagtc3gcc33gggcctsccctgatcctggcgacctacaccacagtgggtccttc720agtgacagaggaggctgccctgtgtgccgg780gcagcccctggccccatggacaccttacac840cccctactcagctgacatgtatgtgcagcc900ctcctcagtgttggcctatgcctctccgcc960cgccacgcccgcagtggggcccccgctgga1020tttcccgtggcctcagcccctttccacact1080ggccccagccctacctgggccccagtttgt1140ccttcaggacatggaagaccccagaagagc1200tttggaggaagaggatagcgacgcctatgc1260ttaggcgtggctcccacctgagtcctgttc1320aattgagccccaggttcatgcttgtttgga1380acagctagaattgtagacctgtaaaccttc1440cttcctccctctcccccatccttccattct1500cttccttccttttcctccctcccttccttc1560ccttccttttcctccctcccttccttccct1620cctccctccctcgcttcttctctctttctt1680gaggtaattatagggattttagcaataaca1740ccatgggctttcatttctgtcacatttcat1800ctgctgaaccatcttagggtcactcacacc1860ggcgggaagaccagccccgacagcacctcc1920gccagagtccttgagctgtcagttcccaca1980<image>imageseeoriginaldocumentpage38</image>gaaaaaaaaaaaaa3314〈210〉2<211>256<212〉PRT<213>Homosapiens〈400〉2MetLeuTrpGinl_ysProThrAlaProGluGinAlaProAlaProAla151015ArgProTyrGinGlyValArgValLysGluProValLysGluLeuLeu202530ArgArgLysArgGlyHisAlaSerSerGlyAlaAlaProAlaProThr354045AlaValValLeuProHisGinProLeuAlaThrTyrThrThrValGly505560ProSerCysLeuAspMetGluGlySerValSerAlaValThrGluGlu65707580AlaAlaLeuCysAlaGlyTrpLeuSerGinProThrProAlaThrLeu859095GinProLeuAlaProl>pThrProTyrThrGluTyrValProHisGlu100105110AlaValSerCysProTyrSerAlaAspMetTyrValGinProValCys"5120125ProSerTyrThrValValGlyProSerSerValLeuAlaTyrAlaSer130135140ProProLeuMeThrAsnValThrThrArgSerSerAlaThrProAla145150155160ValGlyProProLeuGluGlyProGluHisGinAlaProLeuThrTyr165170175PheProTrpProGinProl_euSerThrLeuProThrSerThrLeuGin180185190TyrArgProProAlaProAlaLeuProGlyProGinPheValGinl_eu195200205ProMeSerMeProGluProValLeuGinAspMetGluAspProArg210215220ArgAlaAlaSerSerLeuThrMeAspLysLeuLeuLeuGluGluGlu225230235240AspSerAspAlaTyrAlaLeuAsnHisThrLeuSerValGluGlyPhe245250255〈210〉〈211>〈212〉<213>319隱人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述合成RNA<400>3caccuuacaccgaguaugu〈210〉〈211〉<212><213>417RNA人工序列<220>〈223〉人工序列的描述:合成RNA<400>4gguucuguguCUgC3gU191權利要求1、一種癌癥檢測方法，其包括以檢體中第11號染色體q23區域的基因擴增為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。2、權利要求1所述的癌癥檢測方法，所述基因是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一種。3、權利要求1或2所述的癌癥檢測方法，所述擴增的指標是同正常檢體相比，為大于等于1.32倍。4、權利要求13任意一項中所述的癌癥檢測方法，所述檢體是多發性骨髓瘤的檢體。5、權利要求14任意一項中所述的癌癥檢測方法，所述癌癥為多發性骨髓瘤。6、一種多發性骨髓瘤的檢測方法，其包括在多發性骨髓瘤的檢體中，以P0U2AF1基因的擴增為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。7、權利要求16任意一項中所述的癌癥檢測方法，所述基因的擴增可以采用DNA芯片法、Southern印跡法、Northern印跡法、PCR法、實時RT-PCR法、FISH法、CGH法、基因擴增法、RFLP檢測法、核苷酸測序法或陣列CGH法中的任意一種方法來檢測。8、一種癌癥檢測方法，其包括在檢體中，以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一種基因的表達增強為指標，對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。9、一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因在體外導入到腫瘤細胞中。10、一種抑制細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質在體外導入到腫瘤細胞中。11、一種細胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。12、一種細胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質。13、一種激活細胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導入到細胞中。14、一種細胞增殖的激活劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中所選擇的基因。全文摘要本發明通過對多發性骨髓瘤等癌癥中表現出特征性表現的基因進行鑒定來提供一種癌癥檢測方法和細胞增殖抑制劑。本發明提供一種癌癥檢測方法，該方法包括以檢體中第11號染色體q23區域的基因擴增為指標來對該檢體的腫瘤化進行檢測和/或分類。文檔編號C12N5/10GK101392285SQ200710140650公開日2009年3月25日申請日期2007年9月21日優先權日2006年9月21日發明者井上純,井本逸勢,稻澤讓治,晨趙申請人:富士膠片株式會社;國立大學法人東京醫科齒科大學