專利名稱：：對應于轉基因事件mon89034的玉米植物和種子及其檢測和使用方法
技術領域：
：本發明涉及稱為MON89034的轉基因玉米植物及其與玉米事件(cornevent)MON89034無法區分的子代(它們也含有至少一種對應于插入轉基因DNA的等位基因)，其種子已于2006年3月28日保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)，保藏號PTA-7455。本發明的又一方面是所述玉米事件MON89034的植物和種子的子代植物或種子或可再生部分，所述玉米事含有選自以下的多核苷酸SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5。本發明還包括玉米事件MON89034的植物部分，包括但不限于花粉、胚珠、花、枝條(shoots)、根、莖(stalks)、穗絲、花序(tassels)、耳穗和葉，只要這些部分含有至少如上所述的多核苷酸。包含在MON89034基因組中的新的遺傳組分，以及得自MON89034的這些產物，例如對應于16MON89034事件的玉米粉、玉米面、玉米油、玉米漿和留在玉米作物田間的生物量(biomass)，都為本發明的一個方面。0011]本發明提供具有玉米事件MON89034的所有生理學和形態學特征的昆蟲抗性玉米植物。按照本發明的一個方面，提供檢測稱為MON89034的新玉米植物的轉基因/基因組插入區的存在情況的組合物和方法。提供含有MON89034的至少一種接合序列的DNA序列，所述接合序列選自SEQIDNO:l(位于SEQIDNO:5上的2051-2070位)和SEQIDNO:2(位于l1367-11388位)及其互補物；其中接合序列涵蓋插入基因組中的異源DNA和側接插入位點的玉米細胞DNA之間的接合，并診斷所述事件(圖l)。玉米事件MON89034和含有這些DNA分子的種子為本發明的一個方面。提供以下定義和方法以更好地詳細說明本發明，并指導本領域一般技術人員實施本發明。除非另外指出，否則術語根據相關領域的一般技術人員的常規用法來理解。分子生物學的普通術語的定義也可見于Rieger等，GlossaryofGenetics:ClassicalandMolecular,第5版，Springer-Verlag:NewYork,1991;和Lewin,GenesV,OxfordUniversityPress:NewYork,1994。本文使用的術語"包含"意指"包括但不限于"。還要理解的是，也可以使兩種不同的轉基因植物交配，產生含有兩個獨立地分離添加的外源基因的后代。適宜后代的自交能夠產生對于兩個所添加的外源基因為純合的植物。還設想了對親本植物回交和與非轉基因植物異交，無性繁殖就是這種情況。通常用于不同性狀和作物的其它育種方法的描述可見于若干參考文獻當中的一篇，i口Fehr，載于BreedingMethodsforCultivarDevelopment,^V—ilcox丄編輯，AmericanSocietyofAgronomy,MadisonWI(1987)。00301"探針"是連接常規可檢測的標記或報告分子的分離核酸，所述標記或"t艮告分子例如為放射性同位素、配體、化學發光劑或酶。這樣的探針與靶核酸鏈互補，就本發明而言，與玉米事件MON89034的基因組DNA鏈互補，無論它來自玉米植物還是來自包含該事件的DNA的樣品。本發明的探針不僅包括脫氧核糖核酸或核糖核酸，而且包括特異性地結合靶DNA序列并可用于檢測該靶DNA序列的存在情況的聚酰胺和其它探針材料。基于此處公開的側翼DNA和插入序列的引物和探針可用于通過常規方法(例如通過重新克隆和對這些序列測序)證實(如有需要，則校正)所公開的序列。本發明的核酸探針和引物在嚴格條件下同耙DNA序列雜交。任何常規的核酸雜交或擴增方法均可用于鑒定樣品中轉基因事件的DNA的存在情況。在某些情況下，核酸分子或其片段能夠與其它核酸分子特異性雜交。在本文中，如果兩個核酸分子能形成反向平行的雙鏈核酸結構，則這兩個分子被稱為能夠彼此特異性雜交。如果核酸分子顯示出完全互補，則一個核酸分子被稱為另一個核酸分子的"互補物，，。在本文中，當一個分子的每個核苷酸均與另一個分子的核苷酸互補時，這些分子被稱為表現出"完全互補"。如果兩個分子可相互雜交，具有的穩定性足以使它們在至少常規的"低嚴格，，條件下保持互相退火，則它們被稱為"最低限度互補"。類似的，如果分子可相互雜交，具有的穩定性足以使它們在常規的"高嚴格"條件下保持互相退火，則這些分子被稱為"互補"。常規嚴格條件由Sambrook等，1989和Haymes等，描述于M/de/c爿cW外6"'fifeWo",/4尸rac"ca/JpproacA,IRLPress,Washington,DC(1985)。因此，允許相對于完全互補有偏離，只要這些偏離沒有完全排除分子形成雙鏈結構的能力。為了使核酸分子用作引物或探針，僅僅需要在序列上足夠互補，以能夠在所用的特定溶劑和鹽濃度下形成穩定的雙鏈結構。關于利用特定擴增？1物對進行靶核苷酸序列擴增(例如通過PCR)，"嚴格條件"是指這樣的條件在DNA熱擴增反應中使引物對僅與耙核酸序列(具有相應野生型序列(或其互補物)的引物應與該耙核酸序列結合)雜交并優選產生獨特的擴增產物一擴增子。00381術語"特異于(靶序列)"是指在嚴格雜交條件下探針或引物僅同含有靶序列的樣品中的該靶序列雜交。本文所用的"擴增的DNA"或"擴增子"是指為核酸模板一部分的把核酸序列的核酸擴增產物。例如，為了確定玉米植物是否由含有本發明玉米植物的轉基因事件基因組DNA的有性雜交產生，可使用包含來源于緊鄰插入異源DNA的插入位點的植物基因組中的側翼序列的引物和來源于插入異源DNA的第二個引物的引物對，對從玉米植物組織樣品提取的DNA實施核酸擴增方法，以產生診斷事件DNA的存在情況的擴增子。所述擴增子具有一定長度，并具有也診斷所述事件的序列。擴增子的長度可在引物對加一個核苷酸堿基對、優選加大約50個核苷酸》咸基對、更優選加大約250個核普酸》威基對、甚至更優選加大約450個核苷酸堿基對的組合長度范圍內。或者，引物對可來源于插入DNA兩邊的側翼序列，以便產生包含全部插入核苷酸序列的擴增子。來自植物基因組序列的引物對的成員可以與插入DNA分子相距一定距離定位，該距離可以在一個核苷酸堿基對至最高大約兩萬個核苷酸堿基對的范圍內。術語"擴增子"的使用特別排除了可以在DNA熱擴增反應中形成的引物二聚體。另一個方法是Winge(Innov.Pharma.Tech.00:18-24,2000)描述的焦磷酸測序技術(pyrosequencingtechnique)。在該方法中，設計與相鄰基因組DNA和插入DNA接合區重疊的寡核苷酸。使寡核苷酸與來自目的區域的單鏈PCR產物雜交(一引物位于插入序列，另一引物位于側翼基因組序列)，并在DNA聚合酶、ATP、硫酸化酶、螢光素酶、三磷酸腺苷雙磷酸酶、腺苷5，磷酸硫酸酯以及螢光素存在下溫育。單獨加入dNTP，測量摻入產生的光信號。光信號指示歸因于成功的擴增、雜交和單堿基或多堿基延伸的轉基因插入序列/側翼序列的存在情況。如Chen等描述的熒光偏振(GenomeRes.9:492-498,1999)是一種可用于檢測本發明的擴增子的方法。使用此方法設計與基因組側翼和插入DNA接合區重疊的寡核苷酸。將寡核苷酸與來自目的區域的單鏈PCR產物雜交(一引物位于插入DNA^列，另一引物位于側翼基因組DNA序列)，并在DNA聚合酶和焚光標記的ddNTP存在下溫育。單堿基延伸導致摻入ddNTP。可以使用熒光計根據偏振變化測量摻入。偏振變化指示歸因于成功的擴增、雜交和單堿基延伸的轉基因插入序列/側翼序列的存在情況。7-l:l:l，位于SEQIDNO:5上的6809-7018位)。以上提到的非邊界序列的元件的組合，在玉米植物中時一起用于51起Cry1A.105殺蟲蛋白表達。這些元件隨后按順序連接至另一個表達盒，該表達盒由以下元件組成玄參花葉啟動子(位于SEQIDNO:5上的7086-7649位)、玉米Hsp0前導序列(本文稱為HSP0或I-Hsp70，位于SEQIDNO:5上的7672-8475位)和玉米葉綠體轉運肽編碼序列(本文稱為CTP2或TS-SSU-CTP,位于SEQIDNO:5上的8492-8892位)。這些有效連接的區段然后連接至編碼殺蟲蛋白Cry2Ab的核苷酸序列(位于SEQIDNO:5上的8893-10800位)，該序列以其3，末端連接根癌農桿菌的胭脂堿合酶基因的3'非翻譯區(本文稱為T-AGRtu.nos-l:l:13,位于SEQIDNO:5上的10827-11377位)。Cry2Ab編碼序列側翼的這些元件在玉米植物中存在時一起用于指導Cry2Ab表達。Cry2Ab表達盒隨后按順序后接由根癌農桿菌的左邊界(LB)區的足夠部分組成的核苷酸序列。用于在樣品中鑒定事件MON89034的代表性方法描述于事件特異性終點TaqmanPCR，用于其的條件實例描述于表1和表2。用于該測定的DNA引物為引物SQ2842(SEQIDN0:6)、SQ2843(SEQIDNO:7)、6FAMTM標記引物PB880(SEQIDNO:14)和VICTM標記引物PB2931(SEQIDNO:15)，6FAM和VIC為AppliedBiosystems(FosterCity,CA)的熒光染料產品，與DNA引物連接。對于TaqmanMGB探針，TaqDNA聚合酶的5'-胞外核酸酶活性由5'-末端切割焚光團和猝滅劑之間的探針。在與耙DNA鏈雜交時，猝滅劑和熒光團在三維空間足夠分離，產生熒光(熒光團激發波長)信號。這些測定為用于AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700或StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer9700或EppendorfMastercyclerGradient熱循環儀進行了優化。本領域4支術人員已知的、產生鑒定事件MON89034DNA的擴增子的其它方法和裝置在本領域技術范圍之內。可使用任何用于熱循環的方法設置和進行DNA擴增，包括人工操作或電控操作溫度步驟和循環。已成功使用StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer9700或EppendorfMastercyclerGradient熱循環儀或AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700或MJResearchDNAEnginePTC-225熱循環儀實施下列循環參數。在使用EppendorfMastercyclerGradient或MJEngine進4亍PCR時，熱循環4義以計算沖莫式循環。在使用Perkin-Elmer9700時，循環條件以設為最大的升溫速度實施。表2.接合性測定熱循環儀條件循環數設置AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700150°C2分鐘195°C10分鐘1095。C15秒64。C1分鐘(-rc/循環)3095。C15秒54°C1分鐘110。C浸入在StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer'st6msGeneAmpPCRSystem9700或M〗ResearchDNAEnginePTC-225熱循環儀中進行的DNA擴增已成功運行下列循環參數。在使用EppendorfMastercyclerGradient或MJEngine時，循環以計算沖莫式運行。在使用Perkin-Elmer9700時，循環以設為最大的升溫速度運行。表4.接合性測定熱循環儀條件<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>a:使用AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700對應于轉基因事件MON89034的種子已根據布達佩斯條約于2006年3月28日保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC),10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110。ATCC保藏號或專利保藏號為PTA-7455。保藏物將在保藏處保藏30年，或在最后請求后保藏5年，或保藏專利的有效期，取更長久的那一個，并根據需要在該期限內更換。[00901已經圖解和詳述了本發明的原理，對于本領域技術人員應當顯而易見的是，在不偏離這些原理的情況下，可在排列和細節上對本發明進行修改。我們要求保護在隨附權利要求書的精神和范圍內的所有修改。|0091本說明書中引用的所有出版物和公開專利文件都在此引用作為參考，其引用程度如同每種單獨的出版物或專利申請具體個別地指明引入作為參考一樣。權利要求1.一種被命名為轉基因玉米事件MON89034的轉基因玉米植物，用于獲得所述植物、產生子代、獲得生長植株或產生含所述轉基因玉米事件的大量種子的代表性種子，保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)，保藏號為PTA-7455。2.權利要求1的轉基因玉米植物，所述轉基因玉米植物含有診斷所述事件的DNA，其中所述DNA含有選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列。3.權利要求2的轉基因玉米植物、所述植物的子代、由所述植物培育的植物的細胞或由所述植物產生的種子，其中診斷所迷事件的所述DNA進一步選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。4.權利要求3的轉基因玉米植物，所述轉基因玉米植物被加工為選自玉米粉、玉米面、玉米油、玉米蛋白質、乙醇和DDGS的農產品或食品。5.權利要求1的轉基因玉米植物，所述轉基因玉米植物表現出對鱗翅類昆蟲侵襲的抗性。6.權利要求1的轉基因玉米植物，在所述植物的細胞的基因組中含有選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的DNA分子。7.—種用于診斷生物樣品中的轉基因玉米事件MON89034DNA的存在情況的擴增子，所述擴增子包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2所示序列的多核苷酸序列。8.權利要求7的擴增子，其中所述生物樣品包括玉米粉、玉米油、玉米餅、玉米種子、玉米胚芽、玉米淀粉和玉米面。9.一種含有連續核苷酸的分離的多核苷酸分子，所述連續核苷酸選自示于SEQIDNO:5的連續核苷酸，其中所述連續核苷酸含有約11個至約12000個核苷酸，并進一步含有選自SEQIDNO:l所示的核苷酸1-11或9-20以及SEQIDNO:2所示的核苷酸1-11或9-20的連續核普酸。10.—種含有連續核苷酸的分離的多核苷酸分子，所述連續核苷酸選自示于SEQIDNO:3的連續核苷酸，其中所述連續核苷酸含有約11個至約2000個核苷酸，并進一步含有選自SEQIDNO:l所示的核苷酸1-11和9-20的連續核普酸。11.一種含有連續核普酸的分離的多核苷酸分子，所述連續核苷酸選自示于SEQIDNO:4的連續核苷酸，其中所述連續核苷酸含有約11個至約914個核苷酸，并進一步含有選自SEQIDNO:2所示的核苷酸1-11和9-20的連續核苷酸。12.權利要求9-11中任一項的分離的多核苷酸分子，其中所述連續的核苷酸或其互補物可用于DNA擴增法，以由含有玉米DNA的生物樣品產生擴增子，其中所述擴增子的檢測診斷所述樣品中轉基因玉米事件MON89034DNA的存在情況。13.權利要求9-11中任一項的分離的多核苷酸分子，其中所迷連續的核普酸或其互補物可用于核普酸檢測法中，以檢測生物樣品中轉基因玉米事件MON89034的存在情況。14.一種檢測生物樣品中轉基因玉米事件MON89034DNA的存在情況的試劑盒，包含由至少約11個至約12000個連續核苷酸組成的探針多核苷酸分子，所述探針多核苷酸分子與含有SEQIDNO:5所示序列的核普酸區段表現出顯著同源性、或表現出顯著互補性，其中所述探針包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2所示序列的核苷酸序列。15.—種檢測擴增子的方法，所述擴增子診斷含有玉米DNA的生物樣品中的轉基因玉米事件MON89034DNA,所述方法包括(a)使所述生物樣品與兩種以上的引物在核酸擴增反應中一起接觸；(b)進行核酸擴增反應；和(c)檢測擴增子；其中所述擴增子包絲自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的核苦酸序列；和其中所述擴增子的存在情況用于診斷所述樣品中的所述事件DNA。16.權利要求15的方法，其中所述擴增子含有選自SEQIDNO:l的連續核苷酸1-11或9-20和SEQIDNO:2的連續核苷酸1-11或9-20的核苷酸序列。17.—種檢測多核普酸分子的存在情況的方法，所述多核普酸分子診斷樣品中轉基因玉米事件MON89034的存在情況，所述方法包括(a)使所述樣品與探針接觸，所述探針在嚴格雜交條件下所述多核苷酸分子雜交；(b)對所述樣品和探針實施嚴格雜交條件；和(c)檢測所述探針與所述多核苷酸分子的雜交情況；其中所述多核苷酸分子包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列；和其中在所述檢測步驟中檢測雜交情況用于診斷所述樣品中所述多核苷酸分子的存在情況。18.—種含有選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的分離純化的多核苦酸分子。19.一種含有診斷轉基因玉米事件MON89034的DNA的雜種玉米植物，所述雜種玉米植物通過將轉基因玉米事件MON89034與非事件MON89034的玉米植物一起育種產生。20.權利要求20的雜種玉米植物的種子，其中所述種子含有所述DNA。21.含有診斷轉基因玉米事件MON89034的DNA的雜種玉米植物。22.權利要求21的雜種玉米植物的種子，其中所述種子含有診斷轉基因玉米事件MON89034的DNA。23.—種由含有診斷轉基因玉米事件MON89034的DNA的種子培育的玉米植物。24.由權利要求23的玉米植物產生的細胞、種子或由權利要求23的玉米植物收集的組織，其中所述細胞、種子或組織含有所述DNA。25.—種保護玉米植物免于鱗翅類昆蟲侵襲的方法，包括在靶鱗翅類害蟲的膳食中提供一種或多種轉基因玉米植物細胞，每種玉米植物細胞在其基因組中都含有對應于SEQIDNO:l和SEQIDNO:2二者所示序列以及在SEQIDNO:l和SEQIDNO:2之間的、如SEQIDNO:5所示的連續核苷酸序列的多核苷酸，其中攝食所述轉基因玉米植物細胞的耙鱗翅類昆蟲被抑制進一步攝食所述玉米植物。26.權利要求25的方法，其中所述玉米植物進一步含有不同的殺蟲劑，所述殺蟲劑選自對非鱗翅類昆蟲有毒性的蛋白、對線蟲有毒性的蛋白、將基因靶向目標害蟲進行抑制的dsRNA和抗真菌蛋白。27.—種保護玉米植物免于鱗翅類昆蟲侵襲的轉基因植物細胞的組合物，所述組合物以目標鱗翅類害蟲的膳食提供，其中每種所述轉基因玉米植物細胞在其基因組中均含有對應于SEQIDNO:l和SEQIDNO:2二者所示序列以及在所述SEQIDNO:l和SEQIDNO:2之間的、如SEQIDNO:5所示的連續核苷酸序列的多核苷酸。28.—種昆蟲抗性玉米植物或其部分，所述玉米植物的種子已保藏于美國典型培養物保藏中心，保藏號為PTA-7455。29.—種昆蟲抗性玉米植物細胞，其中具有選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一30.權利要求28的昆蟲抗性玉米植物細胞的子代細胞，其中具有選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一種核苷酸序列的DNA構成了該植物細胞基因組的組成部分。31.權利要求30的子代細胞，其中所述細胞存在于由權利要求29的玉米植物細胞或子代細胞再生或培育的植物的種子中，其中所述種子含有所述至少一種核苦酸序列。32.—種生產昆蟲抗性玉米植物的方法，包括由權利要求30的細胞或子代細胞再生玉米植物，使所述玉米植物與不同的玉米植物雜交，產生子代玉米植物，并通過分析每種子代玉米植物的選自SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一種核苦酸序列，選擇昆蟲抗性子代植物。33.—種昆蟲抗性玉米植物或其部分，其中編碼Cry2Ab的DNA以及具有SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的核苷酸序列的DNA構成了所述植物或其部分的細胞中的基因組的組成部分。34.權利要求33的昆蟲抗性玉米植物細胞，所述細胞還含有編碼CrylA.105的DNA。35.權利要求34的昆蟲抗性玉米植物，其中所述玉米植物的細胞(非配子)就選自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列為雜合的。36.權利要求28的昆蟲抗性玉米植物，其中所述玉米植物細胞就選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列為純合的。37.—種在含有診斷玉米事件MON89034的玉米DNA的生物樣品中檢測多核苷酸的方法，其中所述多核苷酸含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2所示的接合序列，所述方法包括(a)使所述樣品與引物對接觸，所述引物對在玉米事件MON89034的DNA的核酸擴增反應中使用時，產生診斷玉米事件MON89034的擴增子；(b)進行核酸擴增反應，由此產生擴增子；和(c)檢測擴增子；其中所述引物對選自(l)含有SEQIDNO:3的玉米基因組部分的至少約15個連續核苦酸的第一引物和含有與SEQIDNO:5的異源插入DNA部分互補的至少約15個連續核香酸的第二引物，和(2)含有與SEQIDNO:4的玉米基因組部分互補的至少約15個連續核苷酸的第一引物和含有SEQIDNO:5的異源插入DNA部分的至少約15個連續核苷酸的第二引物；其中(l)中的所述擴增子含有SEQIDNO:l，而(2)中的所述擴增子含有SEQIDNO:2。38.用于在熱擴增反應中產生擴增子的多核苷酸引物對，所述擴增子診斷生物樣品中玉米事件MON89034DNA的存在情況，所述引物對選自(a)含有SEQIDNO:3的玉米基因組部分的至少約15個連續核苷酸的第一引物；和含有與SEQIDNO:5的異源插入DNA部分互補的至少約15個連續核苷酸的第二引物；和(b)含有與SEQIDNO:4的玉米基因組部分互補的至少約15個連續核苷酸的第一引物；和含有SEQIDNO:5的異源插入DNA部分的至少約15個連續核苷酸的第二引物；其中用(l)中的引物對產生的所述擴增子含有SEQIDNO:l或其互補物，而在(2)中的所述擴增子含有SEQIDNO:2或其互補物。39.—種檢測生物樣品中的玉米事件MON89034的接合序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的試劑盒，所述試劑盒含有(l)為選自SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的序列的核苷酸探針或為與選自SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的序列完全互補的核苷酸探針，和(2)用于核酸擴增反應的引物對，所述引物對選自(a)含有SEQIDNO:3的玉米基因組部分的至少約15個連續核苷酸的第一引物；和含有與SEQIDNO:5的異源插入DNA部分互補的至少約15個連續核香酸的第二引物；和(b)含有與SEQIDNO:4的玉米基因組部分互補的至少約15個連續核苷酸的第一引物；和含有SEQIDNO:5的異源插入DNA部分的至少約15個連續核苷酸的第二引物。40.—種用于在含有玉米DNA的生物樣品中檢測玉米事件MON89034的接合序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的方法，所述方法包括(a)使所述樣品與在嚴格雜交條件下和所述接合序列雜交的探針接觸；(b)對所述樣品和探針實施嚴格雜交條件；和(c)檢測探針與接合序列的雜交情況；其中檢測到探針與生物樣品雜交說明所述樣品中存在所述接合序列。41.一種含有多核普酸探針的DNA檢測試劑盒，所述多核苷酸探針在嚴格雜交條件下與一種或多種DNA序列雜交，所述DNA序列含有(l)SEQIDNO:3的至少20個連續核苷酸，并含有SEQIDNO:l或其互補物，或(2)SEQIDNO:4的至少20個連續核苷酸，并含有SEQIDNO:2或其互補物。42.—種含有多核普酸引物對的DNA檢測試劑盒，用于檢測生物樣品中診斷玉米事件MON89034的接合序列的存在情況，其中所述多核苷酸引物對的第一引物與對應于SEQIDNO:3中約核苷酸1位至約2050位所示的序列的反向互補序列特異性雜交，所述多核苷酸引物對的第二引物與SEQIDNO:5中約核苷酸2060位至約核苷酸12，208位所示的序列特異性雜交，所述引物對彼此相對延伸，形成含有SEQIDNO:l的擴增子，所述擴增子診斷所述樣品中MON89034事件DNA的存在情況。43.權利要求42的DNA檢測試劑盒，其中所述引物對選自含有SEQIDNO:3中所示至少約11個至約2000個核苷酸長度的任何連續核苷酸序列的第一引物，和含有SEQIDNO:4中所示至少約11個至約914個核普酸長度的任何連續核苷酸序列的反向互補物的第二引物。44.一種含有多核苷酸引物對的DNA檢測試劑盒，用于檢測生物樣品中診斷玉米事件MON89034的接合序列的存在情況，其中所述多核普酸引物對的第一引物與對應于SEQIDNO:5中約核苦酸l位至約11,370位所示的序列的反向互補序列特異性雜交，所述多核苷酸引物對的第二引物與SEQIDNO:4中所示約核苷酸1位至約核苷酸914位的序列特異性雜交，所述引物對彼此相對延伸，形成含有SEQIDNO:2的擴增子，所述擴增子診斷所述樣品中MON89034事件DNA的存在情況。45.—種分離的DNA分子，所述分離的DNA分子為選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的DNA分子，或與選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的DNA分子互補。46.—種用作DNA探針的分離的DNA分子，其中所述分離的DNA分子在生物樣品中的存在情況診斷生物樣品中的玉米事件MON89034DNA，所述分離的DNA分子含有SEQIDNO:1的至少11個連續核苦酸或其互補物。47.—種用作DNA探針的分離的DNA分子，所述分離的DNA分子在生物樣品中的存在情況診斷所述生物樣品中玉米事件MON89034的存在情況，其中所述分子含有SEQIDNO:2的至少11個連續核苷酸或其互補物。48.—種檢測生物樣品中玉米事件MON89034多核苷酸的存在情況的方法，所述方法包括(a)使所述樣品與DNA引物對接觸；(b)進行核酸擴增反應，由此產生擴增子；和(c)檢測所述擴增子；其中所述擴增子含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2，所述擴增子的檢測診斷所述樣品中玉米事件MON89034的存在情況。49.一種穩定轉化的玉米植物細胞，所述玉米才直物細胞的DNA在實施權利要求48的方法時，產生含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的DNA擴增子。50.權利要求48的方法，其中所述DNA引物對含有在SEQIDNO:6和SEQIDNO:7中所示的核苷酸序列。51.—種檢測生物樣品中玉米事件MON89034DNA的存在情況的方法，所述方法包括(a)使樣品與探針接觸，所述探針在嚴格雜交條件下與MON89034DNA雜交，但在所述條件下不與非MON89034DNA的玉米植物基因組DNA雜交，其中所述探針為選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列，或與選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互補；(b)對所述樣品和探針實施嚴格雜交條件；和(c)檢測探針與MON89034DNA的雜交；其中檢測到的雜交情況用于診斷所述生物樣品中所述玉米事件MON89034的存在情況。52.—種測定生物樣品中含有玉米事件MON89034DNA的玉米植物DNA的接合性的方法，包括(a)使樣品與包含SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:IO的3種不同引物接觸，所述引物(l)在含有玉米事件MON89034DNA的核酸擴增反應中使用時，產生診斷玉米事件MON89034的第一擴增子，和(2)當在含有非MON89034DNA的玉米基因組DNA的核酸擴增反應中使用時，產生診斷非MON89034DNA的玉米基因組DNA的第二擴增子；(b)進行核酸擴增反應；和(c)比較產生的擴增子，其中存在一個或兩個擴增子診斷樣品的接合性。53.—種雜種玉米植物，其中至少一個親本為玉米事件MON89034。54.由權利要求53的雜種玉米植物產生或培育的玉米植物產生的花粉、胚珠、種子、根或葉，其中所述花粉、胚珠、種子、根或葉含有診斷轉基因玉米事件MON89034的DNA。55.權利要求53的雜種玉米植物MON89034的子代，其中所述子代的細胞在它們的基因組中含有SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的序列。56.—種分離的多核苷酸區段，所述多核苷酸區段含有選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的至少約11個至約20個連續核香酸，其中所述區段來源于轉基因玉米植物MON89034的細胞。57.—種來源于轉基因玉米植物基因組MON89034的分離的多核苷酸區段，所述分離的多核苷酸區段含有為選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的核苷酸序列，或與選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互補的核苦酸序列。58.—種檢測生物樣品中玉米事件MON89034多核苷酸的存在情況的方法，所述方法包括(a)使樣品與探針在嚴格雜交條件下接觸，其中所述探針含有為選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的連續核苷酸序歹寸，或與選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互補的連續核苷酸序列；和(b)檢測所述探針與所述樣品的雜交；其中所述探針與所述樣品的雜交情況用于診斷所述樣品中所述玉米事件MON89034多核苷酸的存在情況。59.—種包含含有選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的序列的多核普酸的組合物，其中所迷組合物為選自玉米粉、玉米面、玉米油、玉米穗絲、玉米淀粉和加工食品的農產品。60.—種含有長約11個至約20個連續核苷酸的多核苷酸探針，用于檢測生物樣品中玉米事件MON89034DNA的存在情況，其中所述連續核香酸選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。61.權利要求60所述的多核苷酸探針，其中所述探針含有選自脫氧核糖核酸、核糖核酸和核苦酸類似物的核苷酸。62.權利要求61所述的多核苷酸探針，其中所述探針用至少一種熒光團標記。63.—種含有玉米事件MON89034核苷酸序列的農產品或食品，其中所述序列選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。64.;f又利要求63的農產品或食品，所述農產品或食品選自玉米油、玉米淀4分、玉米4分、玉米面、化妝品和填充劑。65.檢測診斷生物樣品中玉米事件MON89034的存在情況的核香酸序列的存在情況，其中所述生物樣品選自玉米油、玉米粉、玉米面、玉米面筋、玉米々并和玉米淀4分。66.培育含有診斷插入DNA區段的DNA的玉米細胞，所述插入DNA區段插入到對應于轉基因玉米事件MON89034的基因組中，其中所述插入DNA區段含有如SEQIDNO:5所示的核苷酸序列。全文摘要本發明提供轉基因玉米事件MON89034，以及含有診斷該玉米事件的DNA的細胞、種子和植物。本發明還提供含有診斷樣品中的所述玉米事件的核苷酸序列的組合物，檢測樣品中的所述玉米事件核苷酸序列的存在情況的方法，用于檢測診斷樣品中的所述玉米事件的存在情況的核苷酸序列的探針和引物，將這些玉米事件的種子培育成玉米植株的方法，以及繁殖而產生含有診斷該玉米事件的DNA的玉米植株的方法。文檔編號C12N15/29GK101495635SQ200780027882公開日2009年7月29日申請日期2007年5月24日優先權日2006年5月26日發明者H·安德森,J·杜格拉斯,J·格羅亞特,J·科爾特,J·賴斯,R·凱利,S·約翰遜申請人:孟山都技術有限公司