專利名稱：：一種泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其應用的制作方法
技術領域：
：本發明公開了一種尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylaseUGP)基因及其克隆，屬于生物工程領域，特別涉及到泡桐禾斗(Paulowniaceae)泡桐屬(Paulownia)白花泡桐〔Paulownia.fortunei(Seem)Hemsl〕)編碼4CL基因及其應用。
背景技術：
：1、關于泡桐及其泡桐木材的材質改良泡桐(Paulownia)為泡桐科(Paulowniaceae)泡桐屬(Paulownia)落葉喬木，原產我國，除個別種[白花泡桐(P.fortunei(Seem)Hemsl.]分布到越南、老撾外，其他各種均為我國所特有。泡桐是世界三大優質、速生用材樹種之一，分布范圍很廣，二十三個省、市、自治區都有。不少地區作為四旁植樹、農桐間作、林網建設的主要樹種；有些地方還逐漸向山地造林發展，栽培量很大，僅河南省栽植的泡桐就達二億株左右。泡桐生長快，如果管理得好，泡桐五六年即可成材。泡桐材質輕，紋理鮮明美觀，易干燥，易加工、不翹、不裂、不易變形、不易燃燒，絕緣性好，耐酸耐腐，防濕隔熱，導音性能好等優點，是單板與人造板生產的重要原料；特別適合制作航空、艦船模型、救生器械及樂器及家具制作等，不但用于工農業及日常生活等各個方面，而且也是我國傳統的出口物資，在我國林業生產中占有特殊地位。但是應該看到，泡桐木材材質的另一面輕(容重低)，強度與硬度低，嚴重限制了它在建筑、交通、家裝、家具、造紙等方面的應用范圍與應用價值。因此，改良泡桐的材質，提高其強度與硬度，拓寬其應用范圍具有重大的應用與經濟價值。泡桐的材質改良有兩個方向。一是提高其強度與硬度，拓寬其木材建筑、交通、家裝與家具等方面的應用；二是提高木材中纖維素的含量，降低其木質素的比率，以提高紙漿的產量、降低對環境的污染，更適用于造紙。2、關于木材的材質改良與尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的關系我們知道木材的材質或特性主要是由木纖維的基本組分一纖維素、木質素單體種類、性質及其比率與總量決定的。纖維素約占木材干重的4050%，木質素約占1536%，二者總計占到木材總中的70%以上。纖維素是纖維素則是木材中的骨架、韌性成分，是由葡萄糖組成的大分子多糖。木質素是由對香豆醇、松柏醇、5-羥基松柏醇、芥子醇四種醇單體形成的一種復雜酚類聚合物。木質素是木材細胞間的粘合劑、剛性原料和保持性物質。UGP是纖維素生物合成的關鍵酶，催化葡萄糖-l-磷酸(Glc-l-P)生成尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-GLC)。尿苷二磷酸葡萄糖是纖維素生物合成的基本原料與前體。UGP的活性決定著木材中纖維素含量及其與木質素的與比率。木質素生物合涉及苯丙氨酸裂解酶(Phenylalaninea腿onialyasePAL)、4-香豆酸CoA連接酶(4-coumarate:CoAligase4CL)、肉桂酸CoA還原酶(cinnamoy1-CoAreductaseCCR)等多個基因。這些基因分處在木質素生物合成的源頭、中、下游不同位置，且功能、作用不同。這些基因的任何一種，都不能缺失、不能替代；任一種基因的失常都將影響木質素的合成，導致材質的變化，且影響的范圍、形式與結果不同。木材材質改良的實質，就是通過改變纖維素、木質素生物合成關鍵酶基因，調控纖維素、木質素單體種類、性質及其比率與總量。在此，應該特別指出，纖維素、木質素既是木材細胞壁的功能成份，同時又是其主要的結構物質，二者總量占到干重的70%以上，且均直接或間接來源于光合作用生產的光合產物。這就決定了在植物正常生長、光合產物穩定的情況下，UGP與木質素生物合成的任一種關鍵酶基因表達的上調或下調，不僅影響纖維素(或木質素)的含量而且也強烈影響著木質素(或纖維素)的含量與比率。增強UGP基因的表達，提高UGP酶的活性，可以提高纖維素在木材中的比率，用于造紙則可提高紙漿的產量，降低木質素對環境的污染。反之，沉默或抑制UGP基因，可以降低纖維素在木材中的含量，提高木質素的比率，提高其強度與硬度，擴大木材的應用范圍與經濟價值。
發明內容本發明公開了一種來源于泡桐科(Paulowniaceae)泡桐屬(Paulownia)白花泡桐〔Paulowniafortunei(Seem.)Hemsi〕的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylaseUGP)基因序列及其相應的氨基酸序列。提供了含有UGP的克隆載體PUC19/UGP和含有這種載體的E.coli細胞JM109/pUC19/UGP。泡桐UGP的DNA序列或其片段通常可以依據本發明提供的mRNA、氨基酸序列信息資料以PCR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法，可根據本發明所公開的有關核昔酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設計引物，按本領域技術人員己知的常規方法所制備的cDNA庫作為模板，擴增而得有關序列。當序列較長時，常常需要進行兩次或多次PCR擴增，然后再將各次擴增出的片段按正確次序拼接在一起。獲得有關的序列后，用重組法來大批量地獲得有關序列。通常是將其克隆入載體，再轉入細胞，然后通過常規方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關序列。此外，還可用人工化學合成的方法來合成有關序列。在本申請之前，現有技術已完全可以通過先合成多個多核昔酸小片段，然后再進行連接而獲得編碼本發明UGP基因的核昔酸序列。然后，可將該核昔酸序列引入本領域中各種現有的DNA分子(如載體)和細胞中。利用本發明成果，可以構建UGP基因工程菌，用于植物的基因轉化，達到改良植物品質或材質的目的。本發明中UGP基因的克隆，采用的技術方案是基于基因的同源性，利用簡并寡核苷酸引物的RT-PCR法，以白花泡桐RNA為模板，首先用簡并引物引物，通過RT-PCR的方法，得到了UGP基因的部分cDNA片段。然后，據此片段提供的cDNA序列信息，設計了2條反向嵌套式引物與2條正向嵌套式引物，用RACE方法獲得了未知的5'和3'端基因片段。最后，將獲得的3條cDNA序列進行拼接，獲得了白花泡桐UGP全長cDNA序列。將獲得的UGP基因片段與和專用的克隆載體pMD19-T連接，獲得pMD19-T-UGP質粒。利用熱激法將這一質粒導入感受態E.coli細胞JM109，成為含有pMD19-T-UGP的大腸桿菌細胞JM109/pMD19-T-UGP。泡桐UGP基因全長cDNA序列已在GenBanK數據庫注冊，注冊號為EU341595，見SEQIDNo:2。泡桐UGP基因全長1694bp，CDS1428(112-1539)，起始密碼子ATG位于112-114bp處，終止密碼子TAA位于1537-1539bp處；推測共編碼523個氨基酸，見SEQIDNo:l。通過GenBanKBLAST比對的結果，顯示泡桐與煙草(Nicotianatabacum)、楊樹(PopulustremulaxPopulustremuloidese)UGP基因的同源性分別為84%、81%。泡桐與煙草、楊樹UGP氨基酸序列(GenBankAccessionNo:AAB18637.1)同源性分別為89%、83%。含有本發明基因的表達載體、細胞系和宿主菌均屬于本發明的保護范圍。本發明的效果和益處在于該UGP是首次被提取、測序和克隆的白花泡桐〔Paulowniafortunei(Seem.)Hemsi〕UGP基因。該基因編碼的UGP是纖維素生物合成的關鍵酶，決定著纖維素合成的速率與合成量及其與木質素的比率，所以該基因的克隆可用于構建表達UGP基因的表達載體及其工程菌。將該基因轉入植物體并使之整合于植物的基因組，將嚴重影響其木質素、纖維素的合成、代謝的過程與結果，達到改良陸生植物植物，特別是用材林木樹種木材的理化特性、應用范圍、經濟價值。圖1為泡桐UGP基因簡并引物擴增片段電泳結果圖片。具體實施例方式一、泡桐UGP基因mRNA的克隆具體程序與方法程序、步驟這些步驟僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列步驟中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等《分子克隆實驗指南》、《實驗室手冊》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例l:泡桐部分UGP編碼序列的克隆和測序1、簡并引物的設計通過GenBanKBLAST系統分析了植物UGP氨基酸的同源性，選取其完全同源部分，優選了對簡并引物，下面列出了本發明所涉及的所有PCR引物。(1)簡并引物BUF5，AARGAYGGNTGGTAYCCNCCNGG3，BUR5,GGRTTNGGDATDATYTCCATYTT3,(2)5，RACE引物OuterPrimer5，-taccgtcgttccactagtgattt—3，InnerPrimer5，-cgcggatcctccactagtgatttcactatagg-3，U.5GSP15，TGATTGCCTGTAAGTTGACCC3，U.5GSP25，GACATATTCTTTGCCCTGCGATA3，(3)3，RACE引物3，RACE:OuterPrimer5'-taccgtcgttccactagtgattt-3'InnerPrimer5，-cgcggatcctccactagtgatttcactatagg-3，U.3GSP15'TTGTTATCGCAGGGCAAAG3，U,3GSP25，ACACTAGCTGATGTGAAAGGTGGT3，，(4)反義基因引物URF5'AGGATCCGTTATCGCAGGGCAAAGAATATGTC3，URR5'GTCTAGAACAAAGCCATCAGACAA3，2、泡桐總RNA的提取取生長旺盛的幼嫩白花泡桐枝條，剝去韌皮部，用清潔刀片刮取木質部外周形成層部分的細胞，液氮研磨成粉，加入TaKaRa公司生產的總RNA提取試劑RNAisoReagent(D312)，提取RNA。3、反轉錄采用TAKARA公司生產的反轉錄酶XL(ReverseTranscriptaseXLAMV)，以OligodT為引物，以提取的總RNA為模板，進行反轉錄反應，合成c腿。反轉錄反應液組成泡桐總RNA()1ul5XRTBuffer4uldNTPMixture(各10mM)2ulRNaseInhibitor,/u1)0.5ulOligad(T)isPrimer(2.5uM)1ulAMV(5U/ul)2ulRNaseFreedH209.5ulTotal20ul反轉錄液加完后輕輕混勻，離心。反轉錄反應程序室溫放置10分鐘；42C恒溫槽中保溫1小時；冰水中急冷2分鐘。4、PCR反應用TaKaRaLATaqHotStarVersion試劑盒進行PCR。PCR反應物組成如下(50u1):TaKaRaLATaqHS(5U/ul)0.5ul10XLAPCRBuffer5uldNTPMixture(各2.5mM)8ulBUFPrimer(100mM)1ulBURPrimer(100mM)1ul反轉錄反應液2uldH2032.5ulTotal50ul反應程序為94°C30sec55°C30sec72°C40sec30Cycles72°C5min。反應結束后，取8ul進行電泳鑒定。結果顯示，擴增出0.41kb左右的片段，參見圖l，圖1為泡桐UGP基因簡并引物擴增片段電泳結果圖片。將這一片段回收，插入pMD19-Tvector、轉化，挑單菌落鑒定、測序。該片段長413bp，見SEQ訓o:3，與煙草、馬鈴薯DNA的同源性分別為85%、84%。該序列推測可編碼137個氨基酸，其氨基酸與楊樹、煙草UGP的同源性分別達到95°/。、93%，可以確認這兩個序列均為泡桐UGP基因的部分mRNA序列。實施例2:泡桐UGPmRNA5'上游未知序列的獲得一個優選的方案是使用TaKaRa公司出品的5'-FULLRACEkit(CodeNo:D315)。這種技術系統第一歩是磷酸化，第二步是去帽子，第三步才是加接頭，從理論上講其第一步就淘汰了所有丟失了"帽子"的、中間斷裂的、殘缺的、不完整的mRNA，致使所克隆的5'未知末端是完整的，所克隆的mRNA才有可能是全長的。同時采用了加特異性接頭與嵌套PCR等技術，使之可以高靈敏度、高特異性地擴增cDNA的5'末端的全長序列。依據獲得的簡并引物RT-PCR獲得泡桐UGP部分編碼序列，優選了2條特異的嵌套式PCR引物見實施例1中1(簡并引物的設計)。具體的克隆程序包括a.泡桐總RNA的提取同實施例1中2(泡桐總RNA的提取)；b.泡桐總RNA去磷酸化處理；c.去帽子反應；d.5'RACE接頭的連接；e.反轉錄反應；f.以外測的特異性引物B.5GSP1與5'RACEOuterPrimer見實施例1中1(簡并引物的設計)進行PCR反應g.以內測的特異性引物B.5GSP2與5'RACEInnerPrimer見實施例1中1(簡并引物的設計)進行PCR反應。電泳結果顯示，擴增的片段長0.8kb左右。電泳回收擴增的片段，克隆于pMD20-T載體，轉化，菌落PCR鑒定、測序。該擴增片段長810bp，測序結果見SEQIDNo:5。序列中顯示出InnerPrimer與U.5GSP2Primer的位置。實施例3:泡桐UGPmRNA3'下游未知序列的獲得一個優選的方案是使用TaKaRa公司出品的3'-FULLRACECoreSetVer.20(CodeNo:D314)。這種技術系統使用加有特異性序列的Oligad(T)的接頭及其引物等技術，使得通過已知的部分cDNA序列，可以更靈敏、特異地擴增cDNA的3'末端序列。依據獲得的簡并引物RT-PCR獲得泡桐UGP部分編碼序列，優選了2條特異的嵌套式PCR引物見實施例1中1(簡并引物的設計)。具體的克隆程序包括a.泡桐總RNA的提取同實施例1中2(泡桐總RNA的提取)；b.套式PCR反應先以外測的特異性引物U.3GSP1與3'RACEOuterPrimer見實施例1中1(簡并引物的設計)，進行PCR反應，再以內測的特異性引物U.3GSP2與3，RACEInnererPrimer見實施例1中1(簡并引物的設計)進行PCR反應。電泳結果顯示，擴增的片段長0.84kb左右。電泳回收擴增的片段，克隆于pMD20-T載體，轉化，菌落PCR鑒定、測序。該片段長837bp,測序結果見SEQIDNo:6。序列中顯示出InnerPrimer與U.5GSP2Primer的位置。序列中有效序列長815bp。實施例4:序列的拼接及其泡桐UGP全長mRNA的獲得將前述獲得的三個泡桐UGPmRNA部分序列，即以(1)5，RACE、(2)以簡并引物RT-PCR、(3)3'RACE分別獲得的泡桐UGPmRNA部分序列進行拼接，獲得的了泡桐UGPmRNA全長序列。一個優選方案是，以3'RACERT-PCR反轉錄反應液(產物)為模板，mRNA5，頂端部分序列作引物(5'GAAAATCTTCCTTCATTTACGTGCC3')與3，RACE的InnerprimerPCR獲得的片段，插入pMD-19Vector,經轉化、挑單克隆，菌落PCR鑒定、測序，獲得了攜帶泡桐UGPmRNA全長序列的cDNA的質粒pMD19-UGP。二、關于克隆的泡桐4CL基因編碼序列的功能鑒定1、泡桐UGP基因RNA干擾體的構建為驗證克隆的UGP基因的功能，構建了UGP基因的反義基因。反義基因的啟動子為CaMV35S，終止子為NOS-Ter;反義片段長520bp，位于泡桐編碼序列的1161-642bp處，5'端酶切位點為Xbal，3'端酶切位點為Ndel，見SEQIDNo:7。克隆載體為pMD20-TVector的自體連接質粒。表達載體為pCAMBIA3301。2、UGP基因RNA干擾體轉化轉化材料，煙草(K326);轉化方法采用農桿菌介導法。3、UGP基因RNA干擾體轉化泡桐株系的分子鑒定檢測材料為轉UGP反義基因煙草葉片DNA。為避免煙草內源UGP基因的干擾將檢測引物見實施例1中1(簡并引物的設計)分別設計于靶基因啟動子CaMV35S、終止子Nos-Ter序列上。檢測引物UceF5，GMGGTGGCTCCTACAAATGC3，UceR5，CMGACCGGCMCAGGATT3，4、基因RNA干擾體轉化泡桐株系木質素、纖維素的變化測定材料為經鑒定確認轉化泡桐UGP反義基因的K312煙草。選取這些移栽后生長正常、株高30-40厘米的煙草3株，分別剪取第3-5葉片。葉片經100'C、5分鐘殺青，6(TC烘干5小時。取l克左右作試樣。對照為非轉基因K312，其生長狀況與處理同轉基因煙草。纖維素(包括半纖維素)含量測定采用"造紙原料總纖維素含量測定"GB/T2677.10-1995。測定方法是在PH4-5時，用亞氯酸鈉處理過抽出樹脂的試樣以除去所含木素，定量地測定殘留物(即總纖維素)。木質素含量測定采用"造紙原料酸不溶木素含量測定"GB/T2677.8-94。用(72+/-0.1)%(m/m)硫酸水解經苯醇混合液抽提過的試樣，然后定量的測定水解殘余物(即酸不溶木素)質量。分析結果詳見下列表l。表1轉基因煙草纖維素、木質素分析結果(樣品量100mg)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>對轉泡桐UGP反義基因煙草纖維素、木質素含量與比率的測定結果顯示轉化的泡桐UGP基因對煙草的纖維素的含量降低了69.2-87.3%，平均降低了77.84%;木質素升高111-203%，平均升高了145.4%。這些結果表明，克隆的泡桐UGP基因是有活性的，其反義基因影響煙草木質素的合成，降低了纖維素含量與比率，導致木質素含量與比率的提高。三、關于本發明泡桐UGP基因的應用說明1、關于相關基因的構建由于本發明的公開，本領域的技術人員可以利用其公知的技術，構建成多種不同的基因與具有特殊功能的構建體，例如植物組織器官、發育階段特異或者非特異表達的UGP基因。植物組織器官、發育階段特異或者非特異表達的反義基因。植物組織器官、發育階段特異或者非特異表達的UGP基因的RNA干擾體。當然，UGP基因可以構建的功能基因(或功能體)包括，但不限于這些。2、表達載體的構建及其應用這些構建好的功能基因到其功能的實現，即將功能基因轉入植物，到轉建立已是常規技術，其程序包括四個部分(1)表達載體的構建將構建好的功能基因表達盒切出，插入植物表達載體pCAMBIA3301等質粒相應的酶切位點，構建成這些功能基因的表達載體。(2)將攜帶功能基因的表達載體以液氮凍融法轉入根瘤農桿菌LBA4404。(3)利用農桿菌介導法將功能基因轉化植物材料。(4)轉化體選擇與鑒定:包括抗性選擇；組織化學、DNA、RNA及蛋白質水平的系統鑒定；生長特性、遺傳穩定性、生物安全性及生產特性鑒定等，最終實現改良植物，建立具有目的性狀或特性的新型植物。這些規程與技術已是本領域技術人員公知的，可以利用公知的技術完成、應用。序列表<110>河南省綠士達林業新技術研究所<120〉一種尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的克隆及其應用<歸2<210〉1<211>475〈212〉PRT〈213〉泡桐(Paulownia)<400>1METAlaAlaAlaThrLeuSerProAlaAspAlaGluLysLeuSer151015LysLeuLysSerAspValAlaThrLeuAsnGinlieSerGluAsn202530GinLysSerGlyPhelieAsnLeuValAlaArgTyrLeuSerGly354045GluAlaGinHislieGluTrpSerLyslieGinThrProThrAsp505560GluValValValProTyrGlyThrLeuAlaProValProGluAsp657075AlaAlaGluThrLysLysLeuLeuAspLysLeuValValLeuLys808590LeuAsnGlyGlyLeuGlyThrThrMETGlyCysThrGlyProLys95100105SerVallieGluValArgAsnGlyLeuThrPheLeuAspLeulie110115120VallieGinlieGluThrLeuAsnAlaLysTyrGlyCysAsnVal125130135ProLeuLeuLeuMETAsnSerPheAsnThrHisAspAspThrLeu140145150LyslieValGluLysTyrAlaAsnSerAsnlieGlulieHisThr155160165PheAsnGinSerGinTyrProArgLeuValValGluAspPheSer170175180ProLeuProSerLysGlyAsnThrGlyThrAspAlaTrpTyrPro185190195ProGlyHisGlyAspValPheProAlaLeuLysAsnSerGlyLys200205210LeuAspAlaLeuLeuSerGinGlyLysGluTyrValPheValAla215220225AsnSerAspAsnLeuGlyAlaValValAspLeuLyslieLeuAsn230235240HisLeulieArgAsnLysAsnGluTyrCysMETGluValThrPro<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>SerlieVaJAspLeuAspSerLeuLysValSerGlyAspVaJTrp425430435PheGlyAlaGlyValThrLeuLysGlyLysValThrlieAlaAla440445450LysProGlyLeuLysLeuGlulieAlaAspGlyAlaVallieAla455460465AsnLysGlulieAsnGlyProGluAsplie—470475<210〉2〈21.1〉1694〈212〉醒<213>泡桐(Paulownia)〈221〉cds<222>(112)…(1539)<4()0>2GAAAATCTTCCTGCTTAGATGCAACTCTGACTCAATCAGAAGTGGCGMGGTGCCTTACGGACAAACTTGCCAAAGTCTGATTGAGACACMCACTCATGCATACATTTATCCAAAGGAAGCTTTGAAGAGTTGCCAATTAGAAATAAGACTTCATTTACCTTGAAAATTGCCCTGCTGATCAGTGAAAACTCAACATATGTACCTTAGCTGGTGTTAAATTATCGAAGTTCAATGCCAAATGATACATTACCAGAGCCAATACTGGCACATAGTGGGAACAGATAACTTATGAATATTGGTGCCTTTTCTAAGTGAGTTTGCTGAGAAGTCAGMATCTAGAGTGGAGTCCCTGTGCCTGCTGAATGGATCGTMTGGCATACGGGTGCGAAGATTGTTATACCCTCGTGGATGCATGGGCTTGATGCAGGGCGCCGTCCATGGAGGTCTGTTGTCTCCAGTGATCGTACTCTCCAAGCGGATTCATCAAAGATCCAGAGAAGATGCTGGGCTTGGGAATTGACATTTCAATGTGCCCCGAAAAATATGCTGGTTGTTGTACCCTCCTGTTGTTATCGCGTTGATTTGAACGCCTAAAATTCMCAGTTATTTCGAGAATTAMTCTGAATCTGGTGGCCACCAACTGACAGAGACCAACTACAATGGGTTGACTTAATTGCTTTTAATCCAACTCAAAAAGATTTCAGGTCATGGAGAAGGGCAAAGAAAATTTTAAACACTAGCTGAGAATATCTGTAATGGCTGCTTGTCGCCACCTCGCTATCTCTGAGGTGGTGGAAGCTTCTGGTGTACTGGTTGTCATCCAAGAACTCATTCCATTGAGATTCCCACTTCCCTGTCTTTCCTATATGTCTTTTCATTTGATCTGTGAAAGGT60120180240300360420480540600660720780840900GGTACTCTGATCTCTTATGAAGGAAAAGTACAGCTCCTGGAAATAGCGCAAGTTCCTGAT960GAACATGTCAATGAATTTAAGTCAATAGAGAAGTTCAAAATTTTCAACACCAACAACTTG1020TGGGTCAACTTACAGGCMTCAACAGACTGGTTGAAGGAGATGCATTAAAGATGGAGATT1080ATTCCCAACCCAAAGGAAGTGGATGGGGTCAAAGTACTTCAACTTGAGACTGCTGCAGGG1140GCTGCAGTAAGGTTCTTTGATCATGCTATTGGAATTAATGTTCCCCGGTCTCGATTCCTT1200CCTGTAAAGGCAACTTCAGATTTGCTTCTAGTCCAATCTGATCTCTACACCTTGTCTGAT1260GGCTTTGTAATCCGGAACCCAGTAAGGGCCAATCCTGCCAATCCTTCCATTGATTTGGGA1320CCTGMTTCAAGAAGGTTGCCAACTTCTTAAGTCGGTTCAAGTCTATCCCCAGCATTGTT1380GACCTGGATAGCTTGAAGGTCTCAGGTGATGTTTGGTTTGGAGCTGGTGTTACTCTGAAG1440GGTAAAGTGACTATTGCTGCTAAACCTGGTCTGAAGCTGGAAATCGCTGATGGAGCTGTT1500ATTGCTAACAAGGAAATCAATGGTCCTGAAGATATATAATAAAAGAGTTACTTCTCTTAA1560TGACAAGGAGAGTTTCTCAAAGACAATGAGTTGTTTTTGGTTGTAATATGTTTGGTTTGA1620ACATGAGAAAATAAATGCGACTTCCCTTCTATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAT1680AAAAAAAAAAAAAA169權利要求1、一種泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶編碼蛋白，其氨基酸殘基序列如SEQIDNo1所示。2、一種泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶編碼基因，其堿基序列如SEQIDNo:2所示。3、根據權利要求l所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的編碼基因。4、含有權利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的編碼基因的表達載體。5、含有權利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的編碼基因的宿主菌。6、權利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的編碼基因在泡桐及其他植物材質改良中的應用。全文摘要本發明公開了一種泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其應用。該尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶氨基酸殘基序列如SEQID№1所示。利用這些信息可以構建成尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因、或該基因的反義基因、RNA干擾體，用于植物材質改良，可以建立起纖維素含量高、或低的新種質材料。文檔編號C12N5/10GK101434941SQ20081023147公開日2009年5月20日申請日期2008年12月23日優先權日2008年12月23日發明者葉金山,李榮幸,楊艷坤,熊治國,王軍軍,穆守義,苗麗娟,陳占寬申請人:河南省綠士達林業新技術研究所