專利名稱：一種編碼蔗糖酶的基因及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種編碼蔗糖酶的基因，特別是涉及克隆自環境宏基因組的一 種新的編碼蔗糖酶的基因，該基因編碼的蛋白質可用于蔗糖的降解。
背景技術：
蔗糖是植物中光合作用產生的可再生的碳水化合物，每年全球產量超過了
5億噸(馬爾克斯'薩瓦亞，亞克，蔗糖乙醇的中巴合作，商務周刊，2009， 1:72)。 蔗糖的酶水解是一個重要的生物化學反應過程蔗糖通過蔗糖水解酶一 0 -呋喃 果糖苷酶或稱蔗糖酶(P-fructofuranosidase， Invertase , EC 3. 2.1.26) 的水解作用分解產生單糖(葡萄糖和果糖)，單糖再進一步被用于生產如燃料乙 醇等重要的工業產品，因而高效的蔗糖水解酶是蔗糖生物能源利用的關鍵因素 (Marris E， Sugar cane and ethanol: drink the best and drive the rest, Nature, 2006, 444(7120): 670-672)。
蔗糖通過蔗糖酶的催化水解得到葡萄糖和果糖。葡萄糖和果糖在微生物細 胞中進入糖酵解發酵途徑分解產生代謝物質。通過這樣的代謝路徑，酵母利用 葡萄糖和果糖來產生乙醇。利用酵母發酵蔗糖生產乙醇是所有的生物質生產乙 醇中能量投入產出比最高的，這個投入產出比達到了8 (Marris E, Sugarcane and ethanol: drink the best and drive the rest, Nature, 2006， 444(7120): 670-672)。(能量投入產出比在這里是指計算蘊藏在生產得到的一噸酒精里的 能量，這個是產出；投入是，為了發酵乙醇耗費的原料所蘊藏的能量，以及這
3個原料的種植、運輸等環節耗費的能量)。生物燃料乙醇作為解決目前的石油危 機和溫室效應的可替代能源受到了重視，利用蔗糖作為生物燃料乙醇的發酵原 料成為一個有效的途徑。蔗糖酶是微生物蔗糖代謝途徑中的第一個酶，是蔗糖 代謝水解的關鍵酶之一，也是決定蔗糖發酵時間的最主要的因素之一。尋找新 的蔗糖酶基因用于構建新的更適合工業化生產各種化工產品的基因工程菌，提 高微生物水解蔗糖的轉化效率和水解速度，從而縮短發酵生產時間，對于降低 直接發酵甘蔗汁生產各種化工產品的生產成本具有十分重要的意義。
蔗糖酶屬于一個較小的糖基水解酶家族。蔗糖酶是一類糖基水解酶
(glycosyl hydrolases),糖基水解酶根據催化功能域的氮基酸序列相似性， 被劃分成不同的家方夷(families) (Davies G. ， Henrissat B, Structures and mechanisms of glycosyl hydrolases. Structure 1995， 3:853-859; Henrissat B., Bairoch A. Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases. Biochem. J. ， 1996， 316:695-696)。根據碳水化合物活性酶數據 庫(hUp:〃www. cazy. org/fam/accjm. html)上所列糖基水解酶類的最新清單， 目前糖基水解酶類有U2個家族，而蔗糖水解酶屬于糖基水解酶類家族32的一 個成員。
蔗糖酶分布于植物、真菌和細菌中。目前國內外對細菌蔗糖酶基因的克隆 以及重組表達研究集中于對腸道細菌，比如常見的克雷伯氏菌、大腸桿菌、沙 門氏桿菌等微生物(Sharon J. Reid， Valerie R. Abratt. Sucrose utolosation in bacteria:genetic organisation and regulation, Appl Microbiol Biotechnol. 2005， 67:312-321)。在這些研究中都是通過對微生物的實驗室 的培養來進行研究的。但是自然界中可以被人類培養的微生物只占自然界中微 生物種類的1% (Rapp6 MS, Gio窗noni SJ. The uncultured microbialmajority. Annu. Rev. Microbiol., 2003， 57:369—94)，而其余的99%的微 生物用目前的實驗條件是無法培養的。這些不可培養的微生物中蘊藏著大量的 基因資源。從這些無法培養的微生物中獲取基因資源成為微生物研究的熱點
(Voget S， Leggewie C, Uesbeck A， et al. Prospecting for novel biocatalysts in a soil metagenome. Appl. Environ. Microbiol., 2003, 69(10) 6235-6242)。近年來從環境樣品未培養微生物提取基因組DNA然后構 建宏基因組DNA文庫以分離各種新基因已是成熟技術(Daniel R. The soil metagenome—a rich resource for the discovery of novel natural products. Curr. Opin. Biotechnol. ， 2004, 15 (3) :199-204)。大量具有應用價值的酶 基因通過宏基因組的方法被克隆和應用(Richardson TH, Tan X, Frey G, et al. A novel, high performance enzyme for starch liquefaction.J. Biol. Chem.， 2002， 277(29): 26501-26507 )。糖廠廢水中含有豐富的蔗糖，被糖 廠廢水浸潤的土壤中有大量的微生物在進行蔗糖的分解，在這個土壤環境中的 未培養微生物中含有大量的蔗糖酶資源，其中很有可能有優于目前所發現的蔗 糖酶。通過構建糖廠廢水污染土壤微生物的宏基因組DNA文庫，能從中篩選得 到比目前應用還要好的蔗糖酶。
發明內容
本發明的目的是提供一種編碼蔗糖酶的基因及其應用。該基因是通過構建 糖廠廢水污染土壤微生物的宏基因組DNA文庫以及進行文庫克隆的蔗糖酶活性 平板檢測篩選法，得到了新的編碼蔗糖酶的基因，這個蔗糖酶基因可應用于基 因重組菌中用于蔗糖的水解或是在宿主細胞中大量表達該基因以生產該蔗糖 酶。
本發明通過以下技術方案達到上述目的 一種編碼蔗糖酶的基因，它具有
5序列表SEQ ID NO.l中所述核苷酸序列或其功能等同變異體。
所述基因功能等同變異體為SEQ ID NO. 1的核苷酸序列的突變形式，突變
形式包括缺失、無義、插入、錯義。
所述基因所編碼的蛋白質，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。 一種表達載體，它含有權利要求l所述的基因。 一種宿主細胞，它含有所述表達載體轉化的原核細胞或真核細胞。 所述蛋白質在蔗糖降解和對含蔗糖材料的處理中的應用。 所述編碼蔗糖水解酶的基因眾"(SEQ ID NO. 1)，是從廣西武鳴縣糖廠廢
水污染土壤微生物宏基因組文庫中分離得到。^2"基因的起始密碼子為ATG，
終止密碼子為TAA,由1761個核糖核苷酸組成。
S￡Q ID NO. 2的蛋白質是基因in^編碼的蔗糖酶產物Inv2，由586個氨基
酸組成，自N端的第1 20位氨基酸為信號肽，自N端的第126—549位氨基
酸為家族32糖基水解酶(glycosyl hydrolase)功能域。
基因//7^在大腸桿菌中表達的重組產物Inv2能降解蔗糖。 含有本發明基因的表達載體，用于轉化本發明基因的宿主。 本發明突出的實質性特點在于提供了一種新的蔗糖酶基因，該基因所編碼
的蔗糖酶在蔗糖的降解中具有廣泛的用途。
具體實施例方式
以下通過具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細描述。 提供的實施例是為了更好地理解本發明，而不應該被解釋為限制本發明的 目的。
在本發明的實施例中所用到的材料包括大腸桿菌(^sc/jeric力ia co i) 株系EPI300 (購自Epicentre公司的文庫制備試劑盒CopyControl FosmidLibrary Production Kit (目錄號CCF0S110)的一個組分)；載體為購自 Epicentre公司的柯斯質粒載體CopyControl pCClFOS ;購自Epicentre公司 的文庫制備試劑盒(CopyControl Fosmid Library Production Kit,目錄號 CCF0S110)，購自TaKaRA、 MB1的限制性內切酶、修飾酶等試劑。 實施例的具體描述
1、糖廠廢水污染土壤微生物總DNA的提取
取自廣西武鳴縣糖廠廢水污染的土壤200克，懸浮在100 ml的0. 18 mol/L 磷酸鉀緩沖液(pH 7. 2)中，然后在600轉/分鐘離心力下離心10分鐘收集上清 液。上清中加入40ml聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)溶液，振蕩30秒，再加入200 W 3 mol/L CaCl2溶液，振蕩30秒后，在600轉/分鐘離心力離心5分鐘，收 集上清液于另一個離心管中并用8000轉/分鐘離心力離心15分鐘收集上清液中 的細菌細胞。收集到的菌體沉淀塊懸浮在lmlTE溶液中，并在37"C下加入100 pl溶菌酶作用30分鐘，然后以10000轉/分鐘離心1分鐘再次沉淀細胞，細胞 沉淀塊懸浮在600 pi PUREGENE公司的基因組DNA純化試劑盒(Genomic DNA Purification Kit,目錄號R-5500A)的細胞裂解緩沖液中，置80。C水浴鍋5分 鐘以裂解細胞，待樣品冷卻到室溫后，加入200^1上述試劑盒中的蛋白質沉淀 溶液，充分混勻后13000轉/分鐘離心3分鐘，將上清液轉移到一個新的1.5ml 微量離心管中，加入600 nl 100%異丙醇，充分混勻后即見DNA絮狀沉淀析出， 挑出DNA絮狀沉淀，用70%乙醇洗2次DNA，干燥后將DNA溶于500 pl TE溶 液即得DNA粗提物。
將咖A粗提物加到含有Sephadex G200 (購自Pharmacia公司，目錄號 17-0080-01)和2XPVPP的層析柱(200 mm x 10咖)上，用TE緩沖液洗脫， 按每組分1 ml分部收集洗脫液，每一組分加入100 plL的3 mol/L醋酸鈉溶液及1 ml異丙醇沉淀DNA，把沉淀物溶于TE中，合并所得DNA溶液，0.7%瓊脂 糖凝膠電泳后切下含20 kb以上的DNA的凝膠，用電洗脫法回收純化DNA。 2、構建糖廠廢水污染土壤微生物宏基因組文庫
為了用這些純化的DNA制做基因文庫，首先對這些DNA進行末端修補以產 生平頭末端而和文庫制備試劑盒中已處理好的同樣具平頭末端的CopyControl pCClFOSTM載體相連，依次在冰上向一個新的滅過菌的微量離心管中加入8 pl 末端修補緩沖液，4 pl末端修補酶混合物。室溫下放置45分鐘，再轉移到70°C 水浴鍋放置10分鐘以終止酶反應，1. 0%低熔點瓊脂糖凝膠電泳后切下含25 kb 一45 kb的DNA的凝膠進行DNA回收，為了使回收片段與文庫制備試劑盒中已 處理好的具平頭末端的載體在T4 DNA連接酶的作用下連接起來，依次在冰上向 一個新的滅過菌的微量離心管中加入2 |_11無菌水，1 pl IO倍快速連接緩沖 液，1 pl 10 mmol/L ATP， 1 jil CopyControl pCClFOS 載體，5 pl低熔點 瓊脂糖凝膠回收的25 kb—45 kb的DNA， 1 pl快速連接DNA連接酶，混勻后 在室溫下放置2個小時，再在7(TC放置10分鐘以終止酶反應。為了將連接反 應產物用X包裝提取物(Epicentre公司的文庫制備試劑盒CopyControl Fosmid Library Production Kit的一個組分)包裝，將在冰上剛剛溶化的人包裝提取 物25 pi立即轉移到一個新的滅過菌的微量離心管中并快速置于冰上，再往其 中加入10 (il連接反應產物，充分混勻后置于3(TC 90分鐘后，再往其中加入 25 pi溶化的X包裝提取物，充分混勻后置于30°C 90分鐘，向其中加入935 pi 噬菌體稀釋緩沖液，再將該1 ml包裝反應產物加入到10 ml的0D6Q。=1.0的宿 主大腸桿菌EPI300培養液中，37X:下放置20分鐘讓上述得到的包裝的X噬菌體 吸附和侵染宿主細胞EPI300,在含12. 5 u g/ml氯霉素的培養基平板上篩選 轉化子。結果共獲得約ll萬個轉化子。3、 蔗糖酶基因//7P^序列的測定
用平板影印法將含有氨卞青霉素的LA平板上得到的轉化子分別影印到含 有氨卞青霉素的以蔗糖為唯一碳源的M9基本培養基。M9基本培養基的配方為
每升含七水合磷酸氫二納，12.8g;磷酸二氫納，3g;氯化鈉，0.5g;氯化銨，
lg。將平板倒置于37'C培養箱培養3天。結果篩選到兩個能在以蔗糖為唯一碳
源的基本培養基上生長的克隆，本發明只涉及其中一個克隆。進一步提取該克 隆的質粒DNA并將其命名為pInv,用限制性內切酶5a/rfH酶切plnv后，將獲 得的DNA片段與去磷酸化的經^朋HI酶切的pUC19質粒進行連接。再將連接產 物用氯化鈣轉化法轉化到大腸桿菌菌株JM109中，在含100 y g/ml氨芐青霉素 的培養基平板上篩選轉化子。結果共獲得約320個轉化子，用平板影印法將得 到的轉化子影印到含有氨卞青霉素的以蔗糖為唯一碳源的M9基本培養基的平 板上，將平板倒置于37'C培養箱培養3天。結果篩選到一個能在以蔗糖為唯一 碳源的M9基本培養基上生長的亞克隆。進一步提取該亞克隆的質粒DNA并將其 命名為plrw-2，用限制性內切酶萬rfl完全酶切pInv-2后，進行0.7%瓊脂糖 凝膠電泳分析，結果Plnv-2除有一個2. 7 kb的載體片段外，還給出另外一條 DNA片段，大小為6.9 kb。于是，對plnv-2進行測序。plnv-2送交上海生工 生物工程公司測定DNA核苷酸序列。
4、 蔗糖酶基因2'/7^的核苷酸序列分析
用NCBI (National Center for Biotechnology Information, http:〃爾.ncbi. nlm.nih.gov)上的軟件如0RF finder (http:〃www. ncbi. nlm- nih. gov/gorf/gorf. html),
Blast (http:〃www. ncbi. nlm. nih. gov/BLAST)對DNA序列進行分析。基因 的開放閱讀框由1761個核苷酸組成，序列如SEQ ID NO: 1所示。其中，基因的起始密碼子為ATG，終止密碼子為TAA。
5、 蔗糖酶基因2'/2^編碼的產物Inv2的氨基酸序列分析
蔗糖酶基因i/7"編碼一個含586個氨基酸的蛋白質，用DNAStar軟件預測 該蛋白質的理論分子量大小為66702. 64道爾頓。
使用Blast (http:〃www. ncbi. nlm, nih. gov/BLAST)搜尋GenBank數據庫， 和Irw2催化功能域同源性最高的為牙齦二氧化碳嗜纖維菌(C邵; oc7t印/ 3卵 gjV7^'raJj's JCVIHMP016)的invertase 2的催化功能域(e-值為0.0)，兩者 的相似性為56%、相同性為71%
用簡單組件結構研究工具(http:〃smart. embl-heidelberg. de)分析糖廠 廢水污染土壤微生物中的蔗糖酶Inv2的組件結構，結果是自N端的第l一20位 氨基酸為信號肽，自N端的第126 — 549位氨基酸為家族32糖基水解酶 (glycosyl hydrolase)功能域。
6、 蔗糖酶基因//2V^的克隆和表達
使用上游引物5， - CACTCATGA TGCACCACCACCA CCACCACAATAGACAGATGAATCCAGGTC -3，和下游引物5，-CACCTGCAGACGATGATTTCACAGATGCMGC -3，，通過聚合酶鏈式反應(PCR)擴增 蔗糖酶基因//7《，用限制性內切酶尸a《I和尸Wl酶切蔗糖酶基因&"后，與 經#"1和尸"I酶切的表達載體pSE380進行連接。再將連接產物轉化到大腸 桿菌XL1-Blue中(轉化方法為氯化鈣法)，涂布到含100 u g/ml氨芐青霉素的 培養基平板上篩選克隆。進一步提取該克隆的質粒DNA并將其命名為pSE-i'"W， 用限制性內切酶歷/7dl11酶切pSE-i/7^后，進行0. 7Q/^瓊脂糖凝膠電泳分析， 結果pSE"'/ "除有一個5.1 kb的DNA片段外，還有一條大小為800 bp的DNA 片段。
10將含有質粒pSE-i/7"的重組大腸桿菌XL1-Blue菌株接種到20 mL含氨芐 青霉素的培養基培養基中，37。C振蕩培養，待0D6。。為0.4時，加入IPTG使其終 濃度為0.5mmol/L， 3(TC誘導10小時。11000轉/分鐘離心3分鐘，收集菌體， 用4ml濃度為100mmol/L的磷酸緩沖液重懸菌體，超聲波破胞9分鐘。用12000 轉/分鐘的轉速離心10分鐘，上清即為含有蔗糖酶Inv2的粗酶液。
7、蔗糖酶Inv2酶活的測定
取20 u l蔗糖酶Inv2粗酶液，加入500 ul濃度為IOO mmol/L的磷酸緩沖 液，與480 ul的l^蔗糖溶液混合，在37XM乍用1小時后，加入800 ul DNS溶 液。放置沸水中反應5分鐘，室溫冷卻，用分光光度計測吸光度ODs。。。吸光度測 定值與不同含量的葡萄糖吸光度標準曲線圖作比較計算酶活。DNS試劑配制方法 為，稱取1克氫氧化鈉用約40 ml雙蒸水溶解，再稱取l克二硝基水楊酸、0.2 克苯酚、0.05克無水亞硫酸鈉、20克四水酒石酸鉀鈉，將其溶解于約30 ml雙 蒸水中，兩種溶液混合，定容到IOO ml。序列表
〈110〉廣西科學院
<120〉 一種編碼蔗糖酶的基因及其應用 <160> 2
〈170> Patentln Version 3. 3 <210> 1 <211> 1761 <212> DNA
〈213〉土壤未培養微生物 <220>
<221〉 gene
<222> (1)…(1761)
<223>
〈400〉 1
caatattgctcagtctgcteiattcttgtcatgacgctgtctgcctgtggc60
tg肪tCC3ggtcattacaaag8L8L幼geLtC3ccagtacgt3tctgttgatt120
cccatccaggaggaagccaaacagccttcacgattggc犯caac犯aga^180
acatccaaaaccttctacatCCg8lttggCgtcgattactgggtCEl犯t3C240
gatgtgg鄉cctttaggggc幼aga幼tccaactctcgttcgagggagcCg6LgggttCgl300
atgctgggt￡itcagaeiacatgacaaattcgagttggeigtac犯cgaBccc360
tttcgacctggatttcatttC3CtCCtgElElt3tggttggatgaacgaccccaatgg3ttg420
gtctatctggatggcgagtaccatttgtttatccatacggtaaccgatgg480
ggg肪tatgcattgggggcatgctgtcagtaccgatctcacttcctggacctacttgcct540
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幼tggc犯gttcgaact犯atatgaccatt c犯cgtaaeig atgcceia^gt ttggggcttc1440
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tcgtccgaaatattcatcaatgeLCggag肌acggtgttga ccaacttggt gttcccttcg麵
aaagtctcacgttctttaca gccaataagc catggaacgt tga犯atctg1740
aaaat3ttcgaaatceiaata811761
<210〉 2 <211〉 586 〈212〉 PRT
〈213〉土壤未培養微生物 〈400〉 2
Met Lys Lys Ser lie Leu 1 5 Leu Ser Ala Cys Gly Asn 16 20 Glu Lys lie Thr Ser Thr
13
Leu Ser Leu Leu lie Leu Val Met Thr
10 15 Arg Gin Met Asn Pro Gly His Tyr Lys
25 30 Tyr Leu Leu lie Pro lie Gin Glu Glu31
Alei Lys Glu 46
Thr Ser 61
Tyr Trp 76
Gin Leu 91
Asn lie 106
Phe Arg 121
Asp Pro 136
Tyr Gin 151
Gly His 166
Thr Ala 181
Ala Val 196
Leu lie 211
lie Ala 226
Lys Asn
35 Lys 50 Phe 65 Tyr 80 Glu 95 Ser 110 Phe 125 Leu 140 Pro 155 Ser 170 Pro 186 Ser 200 Tyr 215 lie 230 Leu
lie Lys Thr Ala Phe Thr lie Gly Asn Asn
Lys Thr Phe Tyr lie Arg Leu Ala Glu Asn Lys
Val Lys Tyr Asp Val Glu Ala Phe Arg Gly Lys
Ser Phe Glu Gly Ala Glu Gly Ser Met Leu Gly
Lys Gin Ser Asp Lys Phe Glu Leu Glu Tyr Asn
Pro Gly Phe His Phe Thr Pro Glu Tyr Gly Trp
Asn Gly Uu Val Tyr Uu Asp Gly Glu Tyr His
Tyr Asn Pro Tyr Gly Asn Arg Trp Gly Asn Met
Ala Val Ser Thr Asp Leu Thr Ser Trp Thr Tyr
lie Glu Pro Asp Lys Leu Gly Asp lie Phe Ser
Val Asp Ser Thr Asn Ser Ala Gly Phe Gly Lys
Ala lie Tyr Thr Ala Asn Gly Ala Thr Gin Gin
Tyr Ser lie Asp Lys Gly Arg Thr Phe Thr Lys
Pro Val Leu Pro Asn Pro Gly lie Lys Asp Phe
40 lie 55 Ala 70 Phe 85 Ser 100 Leu 115 Glu 130 Gly 145 Trp 160 Ser 175 Asp 190 Gly 205 Ala 220 Thr 235 lie
45 Lys Glu
60 lie Asp
75 Glu lie
90 lie Arg
105 Glu Pro
120 Met Asn
135 Leu Phe
150 His Trp
165 Leu Pro
180 Gly Ser
195 Asn Ala
210 Gin Cys
225 Tyr Glu
240 Arg Asp241245250 255
ProLys Val His TrpAsn Glu Gin AlaLys Gin Trp Val Met Ala
256260265 270
LeuAla Thr Gin GinThr lie Thr PhePhe Gly Ser Pro Asp Leu
271275280 285
LysAsn Trp ThrArgLeu Ser Glu PheGly Lys Asn Tyr Gly Ala
286290295 300
HisGly Gly ValTrpGlu Cys Pro AspUu Phe Pro Uu Glu Phe
301305310 315
GluGly Lys ThrLysTrp Val Leu LeuVal Ser lie Asn Pro Gly
316320325 330
GlyPro Asn GlyGlySer Ala Thr GinTyr Phe lie Gly Asp Phe
331335340 345
AspGly Lys ThrPheSer Ala Asp ProLeu Pro Tyr Pro Leu Trp
346350355 360
ValAsp Tyr GlyArgAsp Asp Tyr AlaGly Val Thr Phe Ser Asn
361365370 375
lieGly Lys AsnAspGly Arg Arg liePhe Met Gly Trp Met Ser
376380385 390
AsnTrp Asp TyrAlaAsn Asp Val ProThr Lys Ser Phe Arg Asn
391395400 405
AlaMet Thr LeuProArg Glu Leu LysLeu Ala Ser Asn Gly Gin
406410415 420
HisLeu lie LeuThrSer Ala Pro ValSer Glu Val Thr Lys Leu
421425430 435
ArgGly Lys SerGlyGlu Thr lie Asnlie Leu Val Asn Ser Glu
436440445 450
LysSer lie ThrAsnVal Leu Gin AspPhe Asn Gly Lys Phe Glu
15451
Leu Asn Met Thr 466
Gly Leu Lys Asn 481
Trp Glu Gin Lys 496
Lys Glu Phe Ser 511
Ala Lys His Asp 526
Ser Ser Glu lie 541
Uu Val Phe Pro 556
Ala Asn Lys Pro
571
Lys
586
455 460 lie Gin Arg Lys Asp Ala 470 475 Glu I>eu Gly Asp Tyr Leu 485 490 lie Leu Lys Val Asp Arg 500 505 Gin Lys Phe Ala Thr Glu 515 520 Ser Tyr Thr lie Arg Leu 530 535 Phe lie Asn Asp Gly Glu 545 550 Ser Gin Thr Tyr Lys Ser 560 565 Trp Asn Val Glu Asn Leu 575 580
465
Lys Val Trp Gly Phe 480
Asn Phe Thr Phe Asp 495
Arg Asn Thr Gly lie 510
Pro Phe Ala Pro Leu 525
Phe Met Asp Lys Ala 540
Thr Val Leu Thr Asn 555
Leu Thr Phe Phe Thr 570
Lys lie Phe Glu lie 58權利要求
1.一種編碼蔗糖酶的基因，其特征在于，該基因具有SEQ ID NO.1核苷酸序列或其功能等同變異體。
2. 權利要求I所述的基因，其特征在于，所述其功能等同變異體為SEQ ID N0.1的核苷酸序列的突變形式，突變形式包括缺失、無義、插入、錯義。
3. 權利要求1的基因所編碼的蛋白質，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
4. 一種表達載體，其特征在于，它含有權利要求l所述的基因。
5. —種宿主細胞，其特征在于，它含有權利要求4所述表達載體轉化的原 核細胞或真核細胞。
6. 權利要求3所述的蛋白質在蔗糖降解和對含蔗糖材料的處理中的應用。
全文摘要
一種編碼蔗糖酶的基因inv2，它具有序列表SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列或其功能等同變異體編碼的蔗糖酶SEQ ID NO.2。該基因或其功能等同變異體編碼的蔗糖酶在蔗糖的降解中具有廣泛的用途。
文檔編號C12N15/56GK101624597SQ20091011428
公開日2010年1月13日 申請日期2009年8月6日 優先權日2009年8月6日
發明者浩 龐, 黃志民, 黃日波, 黎貞崇 申請人:廣西科學院