專利名稱：一種蛇毒蛋白的提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種蛇毒蛋白的提取工藝，具體涉及一種蛇毒蛋白分離純化出具有酪 蛋白水解活性的蛋白酶。
背景技術：
現有蛇毒蛋白提取中化學成份復雜，具有其他蛋白質和多肽的混合物，做為進一 步研究有局限。本發明提取出具有酪蛋白水解物活性的物質，使分子量在50000的蛋白質 組分得到最多。
發明內容
本發明目的是針對現有蛇毒蛋白提取的存在的不足，提供一種簡單有效的方法， 使從蛇毒分離提取出一種具酪蛋白水解物活性蛋白，本發明目的是這樣實現的一)制取粗毒，(二)應用DEAE-S^hadex A-50，用含NaCl的緩沖液進行梯度洗脫，分離蛇毒； DEAF-SephadEx A-50，Sephadex G-75，Pharmacia 產品，三羥甲基氨基甲烷(Tris), *，丙 烯酞胺和十二烷基硫酸鈉(SDS)系，Ampboline系瑞典LKB公司產品，酪蛋白系中國醫藥公 司產品，SDS-N烯酞胺凝膠電泳測蛋白質分子量所用的標準蛋白為瑞典LKB公司產品(19， 300-71，500)，牛血清白蛋白(電泳純)系中國科學院生物物理所生化廠生產，均為電泳 純。。，用含NaCl的Tris-Hpl-7緩沖液進行直絳梯度洗脫，分離蝮蛇蛇毒。3g粗毒溶于15ml。· lmol/L，PH7. 5的緩沖液中，于IOOOOrpm冷凍離心110分鐘， 取上清液上樣，柱層析純化3，1.柱層析。(三)將分離出的粗毒用PH7.5的Tris-HCl緩沖液中于IOOOOOrpm冷凍離心，取得上清液。(四)上述上清液用kphadexG-75柱層析，在吸光度為240nm，收集蛋白峰，經超 濾濃縮，冷凍干燥得到蛇毒蛋白。4.根據權利要求3所述的蛇毒蛋白的制作方法，其特征在于，分離出蛇毒蛋白中 與酪蛋白相近分子量的蛇毒蛋白，其紫外吸收光譜表明在277nm有最大吸收，為以后蛇毒 蛋白的進一步純化有了基礎。5，以上蛇毒蛋白以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，以標閃準的蛋白分子量對其電泳 相對遷移率作圖，得到分子量為68000。
權利要求
1.一種蛇毒蛋白的提取方法，其特征在于，包含從腹蛇蛇毒中分離純化出具有酪蛋 白水解活性的蛋白酶。
2.—種蛇毒蛋白的提取方法，根據權利要求1所述的純化蛇毒的制作方法包含以下步驟(一)制取粗毒，(二)應用DEAE-S^hadexA-50，用含NaCl的緩沖液進行梯度洗脫，分離蛇毒；(三)將分離出的粗毒用PH7.5的Tris-HCl緩沖液中于IOOOOOrpm冷凍離心，取得上清液。(四)上述上清液用kphadexG-75柱層析，在吸光度為MOnm，收集蛋白峰，經超濾濃 縮，冷凍干燥得到蛇毒蛋白。
3.根據權利要求3所述的蛇毒蛋白的制作方法，其特征在于，分離出蛇毒蛋白中與酪 蛋白相近分子量的蛇毒蛋白，其紫外吸收光譜表明在277nm有最大吸收，為以后蛇毒蛋白 的進一步純化有了基礎。
4.以上蛇毒蛋白以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，以標閃準的蛋白分子量對其電泳相對 遷移率作圖，得到分子量為68000。
全文摘要
本發明涉及提供一種蛇毒蛋白的提取方法，現有蛇毒蛋白提取中化學成份復雜，具有其他蛋白質和多肽的混合物，做為進一步研究有局限。本發明提取出具有酪蛋白水解物活性的物質，采用NaCl緩沖溶液梯度洗脫，10000RPM冷凍離心，提取上清液，冷凍干燥使分子量在50000的蛋白質組分得到最多。
文檔編號C12N9/64GK102041253SQ20091019766
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月26日 優先權日2009年10月26日
發明者張新鼎 申請人:上海優博生物技術有限公司