專利名稱：一種華北白前苷a的提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥化學領域，涉及ー種華北白前苷A的提取エ藝。
背景技術：
華北白前hancockianum(}Aa,rim. )A1. Iljinski 系蘿蘑科鵝絨藤屬多年生草本植物，又名牛心樸、對葉草等。廣泛分布于我國的西北各省區，以內蒙西部居多。該植物藥用全草，具有活血、止痛、消炎之功效，用于治療關節痛、牙痛、禿瘡等。民間用此藥驅殺蚊蟲和治療腫瘤。華北白前主 要化學成分為留體皂苷、生物堿、三萜、單萜及其苷元等。其中華北白前苷A是華北白前的主要活性成分之一，分子式為C44H62O18，分子量為878. 96，婁紅祥通過藥理實驗發現華北白前苷A具有一定的內毒素作用，另有體外抑瘤實驗表明，華北白前苷A可以拮抗TNF (腫瘤壞死因子)的毒副作用。有文獻報道采用95%こ醇回流提取，醇提取物用0. lmol/L鹽酸溶解，濾除不溶物，以氯仿萃取后，加氨水調pH9，再用氯仿萃取，萃取液濃縮，進行硅膠柱層祈，石油醚-こ醚不同比例混合溶劑洗脫，多次柱層析分離得到華北白前苷A，該方法操作繁瑣，樣品損失較大，成本高，不適用于エ業化生產。
發明內容
本發明要解決的技術問題是克服現有技術中的缺陷，提供一種華北白前苷A的提取エ藝，該方法成本低、制備量大，效率高，易于放大生產。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案
一種華北白前苷A的提取エ藝，其特征在于包括以下步驟
(1)將新鮮或干燥的華北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加5-10倍量30-50%甲醇，采用連續逆流超聲提取，在超聲裝置的超聲波作用下，提取時間為50-150min,提取2_4次，提取溫度50-60°C，過濾，得提取液；
(2)提取液經減壓濃縮后加熱水分散，加入大孔吸附樹脂柱吸附，40-90%こ醇溶液洗脫，收集得到洗脫液；
(3)將洗脫液濃縮成浸膏狀，用水飽和正丁醇萃取，萃取物加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物；
(4)沉淀物經高速逆流色譜法分離純化，流出物濃縮、干燥得到華北白前苷A。步驟(I)中所述生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任ー種，用量為原料重量的 0. 05-0. 1%。步驟(I)中所述超聲頻率為40-50KHZ。步驟(4)中所述高速逆流色譜溶劑系統為正庚烷-こ酸こ酯-こ臆-水，其體積比為(5-10) (3-5) (6-8) (4-8)。采用上述技術方案制備華北白前苷A，操作簡單、提取率高、樣品損失少、產品純度高，利于大生產操作。
具體實施例方式下面將結合具體實施方式
進ー步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :
取華北白前根原料粉碎5kg，加2. 5g的纖維素酶混合均勻，酶解5天，酶解原料加40L45%甲醇，采用連續逆流超聲提取，溫度為50°C，提取時間為90min，超聲頻率為40KHz，提取3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮，所得濃縮液加熱水分散后加入AB-8大孔樹脂柱吸附，依次用水、60%こ醇洗脫，收集60%こ醇洗脫液，減壓回收試劑，濃縮成浸膏，加水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物，沉淀再用丙酮洗滌，低溫干燥得華北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按體積比8:4:7:6置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動相，取上述華北白前苷A粗品150mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以2ml/min流速泵入流動相，待平衡后開始連續進樣，轉速為820rpm，收集華北白前苷A流分，濃縮，低溫干燥即得華北白前苷A，經HPLC測定，純度為98. 7%。實施例2:·
取華北白前根原料粉碎5kg，加3. 8g的纖維素酶混合均勻，酶解4天，酶解原料加50L50%甲醇，采用連續逆流超聲提取，溫度為55°C，提取時間為150min，超聲頻率為45KHz，提取3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮，所得濃縮液加熱水分散后加入DlOl大孔樹脂柱吸附，依次用水、45%こ醇洗脫，收集45%こ醇洗脫液，減壓回收試劑，濃縮成浸膏，加水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物，沉淀再用丙酮洗滌，低溫干燥得華北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按體積比10:3:6:8置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動相，取上述華北白前苷A粗品IOOmg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以2ml/min流速泵入流動相，待平衡后開始連續進樣，轉速為820rpm，收集華北白前苷A流分，濃縮，低溫干燥即得華北白前苷A，經HPLC測定，純度為98. 9%。實施例3:
取華北白前根原料粉碎5kg，加5g的果膠酶混合均勻，酶解4天，酶解原料加25L30%甲醇，采用連續逆流超聲提取，溫度為60°C，提取時間為120min，超聲頻率為44KHz，提取2次，過濾，合并提取液，減壓濃縮，所得濃縮液加熱水分散后加入AB-8大孔樹脂柱吸附，依次用水、90%こ醇洗脫，收集90%こ醇洗脫液，減壓回收試劑，濃縮成浸膏,加水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物，沉淀再用丙酮洗滌，低溫干燥得華北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按體積比5:5:8:4置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動相，取上述華北白前苷A粗品200mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動相，待平衡后開始連續進樣，轉速為820rpm，收集華北白前苷A流分，濃縮，低溫干燥即得華北白前苷A，經HPLC測定，純度為98. 4%。實施例4:
取華北白前根原料粉碎5kg，加4. 2g的淀粉酶混合均勻，酶解3天，酶解原料加30L35%甲醇，采用連續逆流超聲提取，溫度為55°C，提取時間為60min，超聲頻率為50KHz，提取4次，過濾，合并提取液，減壓濃縮，所得濃縮液加熱水分散后加入DlOl大孔樹脂柱吸附，依次用水、70%こ醇洗脫，收集70%こ醇洗脫液，減壓回收試劑，濃縮成浸膏，加水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物，沉淀再用丙酮洗滌，低溫干燥得華北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按體積比7:4:6:5置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動相，取上述華北白前苷A粗品250mg溶于15ml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動相，待平衡后開始連續進樣，轉速為820rpm，收集華北白前苷A流分，濃縮，低溫干燥即得華北白前苷A，經HPLC測定，純度為98.3%。
權利要求
1.I、一種華北白前苷A的提取工藝，其特征在于包括以下步驟 (O將新鮮或干燥的華北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加5-10倍量30-50%甲醇，采用連續逆流超聲提取，在超聲裝置的超聲波作用下，提取時間為50-150min,提取2_4次，提取溫度50-60°C，過濾，得提取液； (2)提取液經減壓濃縮后加熱水分散，加入大孔吸附樹脂柱吸附，40-90%乙醇溶液洗脫，收集得到洗脫液； (3)將洗脫液濃縮成浸膏狀，用水飽和正丁醇萃取，萃取物加丙酮至沉淀不再產生，放置沉淀，濾出沉淀物； (4)沉淀物經高速逆流色譜法分離純化，流出物濃縮、干燥得到華北白前苷A。
2.2、如權利要求I所述的一種華北白前苷A的提取工藝，其特征在于步驟(I)中所述 生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的O. 05-0. 1%。
3.3、如權利要求I所述的一種華北白前苷A的提取工藝，其特征在于步驟(I)中所述超聲頻率為40-50KHz。
4.4、如權利要求I所述的一種華北白前苷A的提取工藝，其特征在于步驟(4)中所述高速逆流色譜溶劑系統為正庚烷-乙酸乙酯-乙腈-水，其體積比為(5-10) :(3-5) :(6-8)(4-8)。
全文摘要
本發明涉及一種華北白前苷A的提取工藝，具體包括如下步驟(1)將新鮮或干燥的華北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加甲醇，采用連續逆流超聲提取，得提取液；(2)提取液經減壓濃縮后通過大孔吸附樹脂柱吸附洗脫，得洗脫液；(3)將洗脫液濃縮后用水飽和正丁醇萃取，減壓濃縮萃取液，加丙酮沉淀；(4)沉淀物經高速逆流色譜法分離純化得到華北白前苷A。本發明方法成本低、制備量大，效率高，易于放大生產。
文檔編號C07J17/00GK102850425SQ20121035018
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月20日 優先權日2012年9月20日
發明者劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司