專利名稱：冷凍干燥粉末狀菌體及其制造方法
技術領域：
本發明涉及冷凍干燥粉末狀菌體及其制造方法，特別是涉及即使在特定的高溫條件下也能夠長期保存的冷凍干燥粉末狀菌體及其制造方法。
背景技術：
近年來，具有益生功能的菌株引起了人們的關注。并且，基于通過攝取這些菌而進行消化道內的改善/正常化以及與此相伴的免疫調整作用的預防醫學盛行。其中，特別是乳酸菌、雙叉乳桿菌等也被稱為益生菌，自古以來就以各種食品的形式進行攝取。最近，其功能開發比以前更為繁盛，并且還進行了組合有新穎的功能性的商品形式的開發。出于上述的進行消化道內的改善/正常化等目的，開發出了大量的含有這些菌類的加工食品組。并且在用于簡便且有效地攝取這些菌類的工作方面仍在研究中。例如，作為這些食品組的通常的一例可以舉出酸奶，但為了進一步易于攝取，也將這些菌類制成粉末狀。該粉末狀菌體也可用作用于簡便地制造應用加工食品的新穎原料，其利用價值高。但是，在將這些菌類制成粉末狀的情況下，如果在攝取時或食品制造時這些菌類未能殘存有必要量以上的活菌，則無法得到這些菌類的效果。因而，希望開發出有效的菌類保存方法、以及用于簡便地制成粉末狀的方法。例如，希望開發出在進行冷凍干燥的情況下提高其存活性的方法。為了達成上述目的，迄今已進行了各種研究。例如，專利文獻1的目的在于，通過對在酸性下或高溫下會被殺滅的乳酸菌、雙叉乳桿菌等有用菌進行被覆造粒來進行保存這樣的意圖而使其不會在胃液中發生溶解而在腸內的可溶性得到提高。具體地說，將生理活性物質通過3層被覆制成造粒物，在其中一層中使用糖類。另外，在專利文獻2中提出了向培養基中添加含有糖類的存活性改善劑以改善雙歧桿菌屬細菌的存活性的方法，所述糖類選自甘油、木糖醇、核糖醇、阿拉伯糖醇、甘露醇。 該方法的目的在于，在好氣條件下或低PH條件下進行保存時，維持存活性和菌數。特別是該技術的主要目的在于提高在培養基系統中的存活率。另外，在專利文獻3中，提供了一種在乳酸菌體粉末中混入有聚甘油脂肪酸酯的長期穩定性優異且耐酸性、腸溶性優異的腸溶性乳酸菌組合物。上述技術主要著眼于在特定條件下的保存性及耐性。另一方面，關于改良菌類的冷凍保存、冷凍干燥保存時的存活性的方面，也開發出了各種技術。例如，在專利文獻4中，為了提供一種在冷凍或冷凍干燥工序中菌體的損傷或死亡少且存活率高的制造方法，公開了一種這樣的冷凍干燥的方法向乳酸菌類的菌體分散液中添加來自魔芋粉的多糖類部分水解物進行冷凍干燥。多糖類部分水解物是通過酶分解而得到的具有特定分子量的物質，制造該水解物需要繁雜的工序。另外，該技術以提高冰凍熔化時的存活率為主要目的，其中對于利用該技術所制造的冷凍干燥粉末狀菌體在保存后的存活率完全沒有暗示或提及。在專利文獻5中，提出了在將冷凍菌解凍后細菌存活率和活性仍良好的保存液。 該細菌用冷凍保存液含有海藻糖和/或聚乙二醇作為有效成分。由此該保存液的特征在于，抑制冷凍時的損害、在解凍后立即可以使用。該技術為含有水分的系統，特別是對于從冷凍到解凍這一過程中的問題進行解決的技術。另外，在專利文獻6中，利用具有淀粉質、糖質的保護膜對發酵乳桿菌進行被覆制成噴霧干燥粉體。該技術是把重點放于提高噴霧干燥時細菌的存活性的技術。進一步地，在專利文獻7中，通過使干燥乳酸菌等干燥微生物與L-精氨酸酸性氨基酸鹽共存來提高干燥狀態下的保存穩定性。該技術的主要目的在于，在將微生物(菌) 制劑化時提高微生物的保存穩定性。另外，其中示出了將用該技術制造的雙叉乳桿菌制劑在40°C保存2周的結果，但其存活率僅為25%左右，并非為可耐受延長至數個月的長期保存的技術。另外，在非專利文獻1中示出了下述研究結果根據該冷凍干燥中的機理分析，已經查明微生物冷凍干燥時的損傷是主要由構成細胞膜的磷脂質的物理狀態的變化以及蛋白質的結構變化造成；基于該發現，在海藻糖或蔗糖存在下對于大腸桿菌等進行冷凍干燥。 但是，其中對于將海藻糖與蔗糖混合使用完全沒有暗示或提及。進一步地，對于具體冷凍干燥物的長期保存以及在特定高溫條件的保存也沒有進行任何相應的研究。進一步地，在非專利文獻2中，出于與上述同樣的目的，進行了關于唾液乳桿菌 (lactobacillus salivarius)的冷凍干燥和保存的研究。在該文獻中，將4%海藻糖；4% 蔗糖；18%脫脂奶粉；4%海藻糖和18%脫脂奶粉；4%蔗糖和18%脫脂奶粉；4%海藻糖和 4%蔗糖；以及4%海藻糖和4%蔗糖及18%脫脂奶粉用作冷凍干燥保護劑，將冷凍干燥粉末狀菌體保存在-85°C，對其存活率進行研究。另外，在冷凍干燥時菌體懸浮液中的糖濃度為約3.2%、脫脂奶粉濃度為14.4%。根據該文獻所公開的結果，記述了利用4%蔗糖不能充分提高冷凍干燥粉末狀菌體在_85°C的保存性，但利用4%蔗糖與18%脫脂奶粉卻能夠提高冷凍干燥粉末狀菌體在_85°C的保存性。進一步記述了單獨利用4%海藻糖提高了冷凍干燥粉末狀菌體在_85°C的保存性的結果。此外示出了將利用4%海藻糖、4%蔗糖以及18%脫脂奶粉的混合溶液進行冷凍干燥所得到的粉末狀菌體于室溫(溫度未記載)下保存7周的結果。在此提到，當保存在特定的濕度條件(濕度2.8 5.6%、以水分活性計 0. 028 0. 056)的環境下時，能夠維持高保存性。但是，在濕度0%和濕度8. 8%的環境下不能維持高保存性(存活率分別為約40%和10% )，將可室溫保存的條件限制在極低的濕度并且濕度范圍非常狹窄，不具有實用性。如此，非專利文獻2的技術示出的是偏離通常生活環境的環境條件下的保存試驗結果，進一步地，對高溫條件下的保存完全沒有暗示或提及，還難以將該技術應用于通常的食品中。現有技術文獻專利文獻專利文獻1 日本特開平5-186337號公報專利文獻2 日本特開平11-137172號公報專利文獻3 日本特開2001-64189號公報專利文獻4 日本特開平7-313140號公報
專利文獻5 日本特開2001-327^0號公報專利文獻6 日本特開2005-52100號公報專利文獻7 國際公開W02006/106806號公報非專利文獻非專利文獻1 =Samuel B. Leslie等，“干燥時利用海藻糖和蔗糖對非損傷細菌的細胞膜禾口蛋白質二者的保護(Trehalose and Sucrose Protect Both Membranes andProteins in IntactBacteria during Drying)，，、IS 用與環境■生物(Applied andEnvironmental Microbiology)，美國，1995 年 10 月，第 3592-3597 頁非專利文獻2 =Gaber Zayed等，“海藻糖和水分含量對于冷凍干燥和保存時的唾液乳桿菌的存活性的影口向(Influence of trehalose and moisture content on survival ofLactobacillus salivarius subjected to freeze—drying and storage)”， Process Biochemistry, 2004 年，第 39 卷，第 1081-1086 頁
發明內容
發明所要解決的問題如上所述，迄今為止，關于有用菌類的保存以及有效形態已經進行了各種研究。特別是對于粉末狀的冷凍干燥菌體或者干燥菌體等，出于其制品形態的簡便性已經進行了各種嘗試，但在菌類的功能維持、長期保存后的存活率方面尚有很大的研究余地。例如，在特定的嘗試中，存在例如僅對特定的菌類有效、或者即使對多種菌類有效但保存條件具有需要超低溫且低濕等顯著限制，因而可以說尚未開發出工業上有效的手段。特別是為了用作可應用于常溫下可長期保存的食品中的粉末狀菌體，需要在假設為通常的生活環境溫度的范圍內的高溫(30 40°C )條件下、而并不限于特殊的保存條件下具有高存活性。不具有這樣的性質的粉末狀菌體其品質無法得到保證，不能確信可將其用作食品的材料。因而，本發明的目的在于提供一種適于長期保存、通過簡便且有效的冷凍干燥而得到的冷凍干燥粉末狀菌體及其制造方法。特別是提供即使在冷凍干燥后進行長期保存， 并且該長期保存即使在并非為超低溫的、據認為對于保存性有很大影響的生活溫度帶(特別是夏期)來進行，也能夠在乳酸菌及雙叉乳桿菌等有用菌的存活率高的狀態下進行保存，在保存后也可以簡便地以粉末的形式直接攝取、或者可有效地用作食品制造中的原料的冷凍干燥粉末狀菌體及其制造方法。進一步地還提供含有所得到的冷凍干燥粉末狀菌體的食品組合物。 解決問題所采用的手段鑒于上述現有的問題，本發明人進行了深入研究，結果發現，通過對將乳酸菌和/ 或雙叉乳桿菌懸浮在糖質溶液中的懸浮液進行冷凍干燥，有用菌(乳酸菌和/或雙叉乳桿菌)的粉末狀菌體的存活性、特別是高溫保存時的存活率得以顯著提高，以至于完成了本發明。根據本發明，提供了適于長期保存、通過簡便且有效的冷凍干燥而得到的冷凍干燥粉末狀菌體。S卩，本發明的一個方面為冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其為對將乳酸菌和/ 或雙叉乳桿菌懸浮在糖質溶液中的懸浮液進行冷凍干燥來得到冷凍干燥粉末狀菌體的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，上述糖質為海藻糖和蔗糖，且冷凍干燥前的上述懸浮液中的海藻糖和蔗糖各自的濃度為4. 5重量％以上。在本發明中，海藻糖和蔗糖各自的濃度優選為4. 5重量％ 15重量％、更優選為
8重量％ 12重量％。在本發明中，海藻糖與蔗糖的重量比優選為5 1 1 5。在本發明中，作為上述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌的優選例，可以舉出屬于雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬的菌類等。作為屬于雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬的菌類的優選例，可以舉出兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)株、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)株等。作為兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)株的優選例，可以舉出兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)0LB6378 株等。作為長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)株的優選例，可以舉出長雙歧桿菌 (Bifidobacterium longum)0LB6001 株等。此外，本發明的其它方面涉及利用上述任意記載的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法制造出的冷凍干燥粉末狀菌體。本發明進一步的其它方面涉及含有有效量的上述冷凍干燥粉末狀菌體的食品組合物。發明效果基于本發明的可長期保存的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法特別是在固體物質/ 粉末狀食品等需要保證長期保存等的情況下特別能夠顯示出其效果。即，由于利用本發明的制造方法制造出的粉冷凍干燥末狀菌體在高溫保存時的存活率得以顯著提高，因而即使在保存后進行使用也能夠獲得有用的乳酸菌和/或雙叉乳桿菌的效果。此外，由于本發明的制造方法為簡便的方法，因而不需要特別的裝置及復雜的工序，也不會導致與此相伴的成本增加。另外，由于利用本發明的制造方法制造出的冷凍干燥粉末狀菌體可以直接使用， 因而在保存后也可以簡便地以粉末的形式直接進行攝取、或者可以有效地用作食品制造中的原料。
圖1是示出了在冷凍干燥前的懸浮液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為6. 6重量％ (作為與菌體混合前的糖溶液，使用分別含有20重量％的海藻糖和蔗糖的糖溶液。) 的條件下所制備出的兩歧雙歧桿菌的冷凍干燥粉末狀菌體在20°C、30°C、40°C的各溫度下的保存試驗結果的曲線圖。圖2是示出了在冷凍干燥前的懸浮液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為10重量％ (作為與菌體混合前的糖溶液，使用分別含有30重量％的海藻糖和蔗糖的糖溶液。) 的條件下所制備出的兩歧雙歧桿菌的冷凍干燥粉末狀菌體在20°C、30°C、4(rC的各溫度下的保存試驗結果的曲線圖。圖3是示出了在冷凍干燥前的懸浮液中的海藻糖濃度與蔗糖濃度分別為6. 7重量％ (作為與菌體混合前的糖溶液，使用分別含有20重量％的海藻糖和蔗糖的糖溶液。)的條件下所制備出的長雙歧桿菌的冷凍干燥粉末狀菌體(圖中的圓圈數字幻以及比較用的冷凍干燥粉末狀菌體(圖中的圓圈數字1)在40°C的溫度下的保存試驗結果的曲線圖。
具體實施例方式下面對本發明進行詳細說明，但本發明并不限于下面敘述的各種方式。作為本發明中使用的乳酸菌及雙叉乳桿菌，可以示例出屬于雙歧桿菌 (Bifidobacterium)屬的菌類，具體可以舉出例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum) 株、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)株、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve) 株、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)株、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)株等。此外還可以示例出屬于乳酸桿菌(LactcAacillus)屬、鏈球菌 (Streptococcus)屬的菌類，具體可以舉出例如加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri) 株、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)株、嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcus thermophilus)株等。但是，本發明并不限于這些菌株，并且對于這些菌株，可以單獨使用或者2種以上組合使用。作為上述菌株中的優選例，可以舉出兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum) 株、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)株等。作為這些優選例的保藏菌株的例子，可以舉出兩歧雙歧桿菌 (Bifidobacteriumbifidum)0LB6378 株、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)0LB6001株等。(A)兩歧雙歧桿菌0LB6378株的保藏本發明中所用的兩歧雙歧桿菌0LB6378株以下述條件進行保藏。(1)保藏機構名稱獨立行政法人制品評價技術基盤機構專利微生物保藏中心(2)聯系方式郵編四2_0818千葉縣木更津市上總鐮足2_5_8電話號碼 0438-20-5580(3)保藏編號NITE BP-3I(4)用于識別的表示 bifidobacterium bifidum 0LB6378(5)原保藏日期平成16年(2004年)10月沈日(6)基于布達佩斯條約的保藏轉移日期2006年1月18日(B)長雙歧桿菌0LB6001株的保藏本發明中所用的長雙歧桿菌0LB6001株以下述條件進行保藏。(1)保藏機構名稱獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心(2)聯系方式郵編305-8566茨城縣筑波市東1_1_1中央第6電話號碼 029-861-6029(3)保藏編號FERM P-13610(4)用于識別的表示 bifidobacterium longum No. 7(5)保藏日期平成5年(1993年)4月20日(6)基于布達佩斯條約的保藏轉移接受日平成22年(2010年)3月2日接受編號FERMABP-11242
本發明中所用的兩歧雙歧桿菌0LB6378株以及長雙歧桿菌0LB6001株具有下述細
菌學性質。兩歧雙歧桿菌0LB6378株為來自人嬰兒糞便的革蘭氏陽性專性厭氧桿菌。若將該菌接種至乳酸菌MRS肉湯(BD)中并在采用Anaerc^ack · KENKI (三菱瓦斯化學社制造) 的厭氧狀態下于37°C培養18小時，則觀察到Y字型的細菌形態。另外，采用兩歧雙歧桿菌 (Bifidobacteirum bifidum)的特異性引物(腸內7 口一” >水。” <y Λ 8(腸內菌叢論文集8)，腸內菌叢的分子生物學檢測·鑒定；光岡知足、松本隆廣)、具體采用16S rDNA的種特異性引物 BiBIF-I =CCA CAT GAT CGC ATG TGA TT 和 BiBIF-2 :CCG AAG GCT TGC TCC CAAA通過PCR觀察到PCR產物。長雙歧桿菌0LB6001株為來自成人糞便的革蘭氏陽性專性厭氧桿菌，其細菌形狀為桿菌或支鏈狀的多形形狀，無芽胞形成、無運動性。若將該菌株涂布在BL瓊脂培養基(榮研)平板上并利用不銹鋼棉法在37°C培養48小時，則形成不透明的圓形半球狀的具有光澤的菌落。該菌株對于阿拉伯糖、木糖、核糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖具有發酵性。作為本發明所用的保護劑的糖質為海藻糖與蔗糖的混合物。從可獲得適于在高溫下長期保存的冷凍干燥粉末狀菌體的方面考慮，冷凍干燥前的懸浮液中的海藻糖與蔗糖各自的濃度為4. 5重量％以上、優選為8重量％以上。從即使過度增大濃度高溫下的長期保存性的效果也相同的方面考慮，該濃度的上限優選為15重量％、更優選為12重量％。對海藻糖與蔗糖的重量比沒有特別限定，但從可獲得適于在高溫下長期保存的冷凍干燥粉末狀菌體的方面考慮，優選為5 1 1 5、更優選為3 1 1 3、特別優選為1 1 1 I0優選的是，將這些糖質以含有糖質的水溶液的形態與培養菌混合，使該菌再懸浮。 通過對如此得到的懸浮液進行冷凍干燥，可得到本發明的冷凍干燥粉末狀菌體。另外，在含有糖質的水溶液中，除了水和糖質外，還可以含有例如乳蛋白質、氨基酸、抗壞血酸等。本發明的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法沒有特別限定，例如由下述步驟構成。1)按照常規方法培養所期望的菌類。2)將含有所培養的菌的培養液直接用于下述幻中，或者將含有所培養的菌的培養液通過離心分離等進行濃縮或者固液分離，得到濃縮的培養液(菌體液)或者以固體成分的形式分離出的菌體，將其用于下述3)中。3)將所得到的菌體液或菌體與含有規定濃度糖質(保護劑)的溶液混合，得到懸浮液后，將該懸浮液冷凍干燥，得到本發明的冷凍干燥粉末狀菌體。作為冷凍干燥的方法，可以舉出使用冷凍干燥機的方法等，例如，可以在低溫(例如-30 -90°C )下急速預冷凍后，在室溫(例如O 20°C )且減壓下(優選為10001 以下、更優選為IOOPa以下的真空度)進行干燥，在維持該真空度的條件下，將冷凍干燥機的溫度上升至例如30 70°C，進一步進行干燥。對于本發明的冷凍干燥粉末狀菌體，由于使用了亦可用作食品添加物的海藻糖與蔗糖，因而可直接攝取；并且也可以將其添加至各種食品組合物中來使用。另外，本發明的冷凍干燥粉末狀菌體即使在長期保存后也顯示出特定的菌存活率，因而也可將其用作發酵牛奶等的種菌等原料。作為食品組合物可以舉出各種飲食品(冷飲、發酵牛奶、酸奶、調整奶粉等)。食品組合物可以直接使用，或者可以按照通常的食品組合物中的常規方法與其他食品或食品成分混合等來使用。并且，食品組合物的性狀可以為通常使用的飲食品的狀態，例如可以為固體狀(粉末、顆粒狀等)、糊狀、液態或懸浮狀的任意狀態。對食品組合物中的其他成分沒有特別限定，可以舉出水、蛋白質、糖質、脂質、維生素類、礦物質類、有機酸、有機堿、果汁、調味料類等。這些成分可以單獨使用1種，或者也可以2種以上組合使用。另外，作為食品組合物中的其他成分，也可以使用合成品和/或含有大量合成品的食品。實施例下面，基于使用了通常難以保存的厭氧菌(雙叉乳桿菌)的實施例對本發明進行說明，但本發明并不限定于此。另外，在本說明書中，對于％的表達，在沒有明示的情況下表示的是重量％。[實驗例1]按照下面所示的步驟，基于本發明的制造方法來制造冷凍干燥粉末狀菌體。1)在酪蛋白分解培養基(以經酶分解的酪蛋白作為蛋白的培養基)中對兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum) 0LB6378 株進行中和培養。2)對320ml培養液進行離心分離(在4°C、以10000G進行20分鐘)去除307. 2ml 上清液，得到菌體沉淀物部分(12.8ml)。3)向菌體沉淀物部分(細1)中添加含有特定濃度糖質的保護劑液0ml)，使菌體懸浮，在-80 V冷凍以進行冷凍干燥。4)冷凍干燥終止后，立即向0. 5g冷凍干燥粉末狀菌體中添加生理食鹽水進行復水，利用BL瓊脂平板培養基測定復水液中的活菌數。5)進一步地，將0. 5g冷凍干燥粉末狀菌體加入至Lami-Zip (注冊商標；塑料袋的商品名)中，對于在20°C或30°C保存53天后的冷凍干燥粉末狀菌體，也同樣地利用BL瓊脂平板培養基來測定活菌數。本實驗例中所用的保護劑液如下述表1所示。[表 1]
權利要求
1.一種冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，該制造方法是對將乳酸菌和/或雙叉乳桿菌懸浮在糖質溶液中所得到的懸浮液進行冷凍干燥來得到冷凍干燥粉末狀菌體的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述糖質為海藻糖和蔗糖，且冷凍干燥前的上述懸浮液中的海藻糖和蔗糖各自的濃度為4. 5重量％以上。
2.如權利要求1所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，冷凍干燥前的上述懸浮液中的海藻糖和蔗糖各自的濃度為4. 5重量％ 15重量％。
3.如權利要求1或2所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，冷凍干燥前的上述懸浮液中的海藻糖和蔗糖各自的濃度為8重量％ 12重量％。
4.如權利要求1 3的任一項所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，海藻糖與蔗糖的重量比為5 1 1 5。
5.如權利要求1 4的任一項所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌為屬于雙歧桿菌(Bifidobacterium)屬的菌類。
6.如權利要求5所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌為兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)株。
7.如權利要求6所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌為兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum) 0LB6378株。
8.如權利要求5所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌為長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)株。
9.如權利要求8所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述乳酸菌和/或雙叉乳桿菌為長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)0LB6001 株。
10.一種冷凍干燥粉末狀菌體，該菌體采用權利要求1 9的任一項所述的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法來制造。
11.一種食品組合物，該食品組合物含有有效量的權利要求10所述的冷凍干燥粉末狀菌體。
全文摘要
本發明提供適于長期保存、通過簡便且有效的冷凍干燥而得到的冷凍干燥粉末狀菌體。本發明的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法為對將乳酸菌和/或雙叉乳桿菌懸浮在糖質溶液中所得到的懸浮液進行冷凍干燥來得到冷凍干燥粉末狀菌體的冷凍干燥粉末狀菌體的制造方法，其中，所述糖質為海藻糖和蔗糖、且冷凍干燥前的上述懸浮液中的海藻糖和蔗糖各自的濃度為4.5重量％以上。海藻糖與蔗糖的重量比優選為5∶1～1∶5。
文檔編號A23L1/30GK102272287SQ201080004172
公開日2011年12月7日 申請日期2010年3月3日 優先權日2009年3月4日
發明者上條政幸, 寺原正樹 申請人:株式會社明治