耐受除草劑的植物的制作方法

專利名稱：耐受除草劑的植物的制作方法
耐受除草劑的植物
背景技術：
水稻是世界上(特別是亞洲)最重要的糧食作物之一。稻米是由稻屬(Oryza)的植物產生的谷粒。兩種最常栽培的物種是稻(Oryza sativa)和光稃稻(Oryzaglaberrima)，其中稻是最常栽培的馴化水稻。除了這兩種馴化物種外，稻屬還包括超過20種野生物種。這些野生物種之一，普通野生稻(Oryza rufipogon)( “紅稻”,其也稱為稻紅芒亞種(Oryza sativa subsp. rufipogon)),在商業栽培中具有一個主要問題。紅稻產生紅色的被覆種子。在收獲后，碾磨水稻種子以除去其谷殼。在碾磨后，馴化水稻是白色的，而野生紅稻看起來脫了色。脫色的種子的存在降低了水稻作物的價值。由于紅稻屬于與栽培 水稻(稻(Oryza sativa))相同的物種，因此它們的遺傳組成是非常相似的。該遺傳相似性使紅稻的除草劑控制變得困難。已經開發了耐受咪唑啉酮類除草劑的馴化水稻，并且目前以商品名CLEARFIELD 進行銷售。咪唑啉酮類除草劑抑制植物的乙酰羥酸合酶(AHAS)。當栽培CLEARFIELD 水稻時，可以通過施用咪唑啉酮類除草劑來控制紅稻和其他雜草。不幸的是，已經產生了耐受咪唑啉酮類除草劑的紅稻。乙酰輔酶A羧化酶(ACCase ；EC 6. 4. I. 2)合成丙二酸單酰CoA作為植物葉綠體中脂肪酸從頭合成途徑的起始。禾草葉綠體中的ACCase是多功能的、由核基因組編碼的、非常大的單多肽，其經由N-末端轉運肽而被運輸到質體中。禾草葉綠體中的活性形式為同聚體蛋白質，可能是同源二聚體。禾草中的ACCase被三種類別的除草活性成分所抑制。兩種最普遍的類別是芳氧苯氧丙酸酯類(“F0P類(FOPs) ”)和環己烯酮類(“DM類(DIMs)”)。除了這兩種類別夕卜，還已經描述了第三種類別，苯基吡唑啉類(“DEN類(DENs) ”)。在展示出對于一種或多種DM或FOP除草劑的耐受性的單子葉雜草物種中已經發現了眾多的ACCase抑制劑耐受性(AIT)突變。而且，已經由BASF銷售了 AIT玉米。所有此類突變均在ACCase的羧基轉移酶結構域中被發現，并且這些突變看起來位于底物結合口袋中，從而改變了對催化位點的接近。DIMs和FOPs是重要的除草劑，并且如果能夠提供展現出對這些類別的除草劑的耐受性的水稻，那將是有利的。目前，這些類別的除草劑在稻作農業中具有有限的價值。在一些情況下，誘導除草劑耐受性的突變在耐受性植物中產生嚴重的適合度懲罰(fitnesspenalty)。因此,在本領域中仍然存在有對于還不展示出適合度懲罰的AIT水稻的需要。這一需要和其他需要通過本發明而得到滿足。發明簡述本發明涉及耐受除草劑的植物，以及產生和處理耐受除草劑的植物的方法。在一個實施方案中，本發明提供了水稻植物，所述水稻植物耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。一般地，本發明的耐受除草劑的水稻植物表達這樣的乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰輔酶A羧化酶中的氨基酸序列不同于野生型水稻植物的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列。按照慣例，單子葉植物ACCase氨基酸殘基中的突變通常根據其在大穗看麥娘(Alopecurus myosuroides)(黑草)質體的單體ACCase序列(Genbank CAC84161. I)中的位置來稱呼，并用(Am)標示。在其之處本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶不同于相應野生型植物的乙酰輔酶A羧化酶的這樣的氨基酸位置的實例包括但不限于下列位置中的一個或多個1781(Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039 (Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、2074(Am)、2075 (Am)、2078 (Am)、2079 (Am)、2080 (Am) ,2081 (Am) ,2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或 2O98 (Am)。在這些氨基酸位置處的差異的實例包括但不限于下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為除 了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為除了絲氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)處的氨基酸為除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在一些實施方案中，本發明提供了水稻植物，所述水稻植物表達包含這樣的氨基酸序列的乙酰輔酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。本發明還提供了產生耐受除草劑的植物的方法，和通過此類方法產生的植物。通過本發明的方法產生的植物的實例為耐受除草劑的水稻植物，其耐受處于通常會抑制所述植物生長的除草劑水平的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑，其中所述耐受除草劑的植物通過下述方式來產生a)從不耐受所述除草劑的植物獲得細胞；b)使所述細胞與包含一種或多種乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的培養基相接觸；和c)從所述細胞產生耐受除草劑的植物。通過本發明的方法產生的耐受除草劑的植物包括但不限于，通過施行上述a)、b)和c)而產生的耐受除草劑的植物，和通過施行上述a)、b)和c)而產生的植物的后代。在一個實施方案中，用于實施該類型的方法的細胞將以愈傷組織的形式存在。本發明提供了植物，所述植物表達包含確定的氨基酸序列的乙酰輔酶A羧化酶。例如，本發明提供了水稻植物，其中所述水稻植物的基因組中的一個或多個編碼這樣的蛋白質，所述蛋白質包含SEQ ID NO :2和3之一或兩者的經修飾形式，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的 氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸 為脯氨酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。下面的

圖19提供了大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶序列(SEQID NO:”、秈稻(印度稻)(Oryza sativa Indica)乙酰輔酶A羧化酶序列(SEQ ID NO 2)和粳稻(日本稻)(Oryza sativa Japonica)乙酰輔酶A羧化酶序列(SEQ ID NO 3)的比對，其中顯示了這樣的位置的實例，在所述位置處野生型序列可不同于所示的本發明序列。在另一個實施方案中，本發明包括根據布達佩斯條約保藏在可接受的保藏單位的種子，源自此類種子的細胞，從此類種子和源自此類種子的細胞生長出的植物，從此類種子生長出的植物的后代，以及源自此類后代的細胞。一般地，從所保藏的種子產生的植物和此類植物的后代的生長將會耐受處于通常會抑制相應野生型植物生長的除草劑水平的抑制乙酰輔酶A羧化酶的除草劑。在一個實施方案中，本發明提供了從由下述植物產生的種子生長出的水稻植物品系0sHPHI2、OsARffIU OsARff 13, OsARffI8或OsHPHNI中任一個品系的植物，每個品系的代表性種子樣品已經分別以專利保藏指定編號PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570或PTA-10571保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)(10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209,美國)，其中 PTA-IO267的保藏日期為 2009 年 8 月 11 H ;PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 和 PTA-10571 的保藏 日期為2010年I月7日。本發明還包括從品系0sHPHI2、OsARffIU OsARff 13, OsARffI8或OsHPHNI中任一個品系的植物制備的突變體、重組體和/或基因工程衍生物，每個品系的代表性種子樣品已經分別以專利保藏指定編號PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570或 PTA-10571 保藏于 ATCC ;以及從品系 0sHPHI2、0sARWIl、0sARWI3、0sARWI8 或 OsHPHNI 中任一個品系的植物生長或繁育出的植物的任何后代，每個品系的代表性種子樣品已經分別以專利保藏指定編號 PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 或 PTA-10571 保藏于ATCC，只要此類植物或后代具有從品系OsHPHI2、OsARWII、OsARWI3、OsARWI8或OsHPHNI中任一個品系的植物生長出的植物的除草劑耐受性特征，每個品系的代表性種子樣品已經分別以專利保藏指定編號 PTA-10267、PTA-10568、PTA-10569、PTA-10570 或 PTA-10571 保藏于ATCC。本發明還包括從此類種子培養出的細胞，和從所述培養的細胞產生的植物及其后代。本發明的耐受除草劑的植物可以是稻這一物種的成員。一般地，本發明的耐受除草劑的植物耐受處于通常會抑制相應野生型植物(例如，水稻植物)生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。在一些實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物不是GMO植物。本發明還提供了經誘變的耐受除草劑的植物，例如經誘變的水稻植物。本發明還包括源自上面所描述的耐受除草劑的植物的植株和種子的細胞。·
本發明提供了用于控制雜草生長的方法。在一個實施方案中，本發明提供了在水稻植物附近控制雜草生長的方法。此類方法可以包括向雜草和水稻植物施用一定量的抑制乙酰輔酶A羧化酶的除草劑(其抑制天然出現的乙酰輔酶A羧化酶活性)，其中所述水稻植物包含經改變的乙酰輔酶A羧化酶活性，從而所述水稻植物耐受所施用的量的除草劑。本發明的方法可以用任何干擾乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑來實施，所述除草劑包括但不限于芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本發明提供了用于在水稻植物附近控制雜草生長的方法。此類方法的一個實例可以包括以通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平向所述雜草和向所述水稻植物施用一種或多種除草劑，其中至少一種除草劑抑制乙酰輔酶A羧化酶活性。此類方法可以用任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑來實施。可以在控制雜草的方法的實施中使用的除草劑的合適實例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本發明包括用于控制雜草生長的方法。此類方法的一個實例可以包括(a)使耐受除草劑的水稻植物與其他水稻種質雜交，并且收獲所得到的雜種水稻種子；(b)種植所述雜種水稻種子；和(C)以通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平，向所述雜種水稻和向處于所述雜種水稻附近的雜草施用一種或多種抑制乙酰輔酶A羧化酶的除草劑。此類方法可以用任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑來實施。可以在控制雜草的方法的實施中使用的除草劑的合適實例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。在另一個實施方案中，本發明包括用于選擇耐受除草劑的水稻植物的方法。此類方法的一個實例可以包括(a)使耐受除草劑的水稻植物與其他水稻種質雜交，并且收獲所得到的雜種水稻種子；(b)種植所述雜種水稻種子；和(C)以通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平，向所述雜種水稻施用一種或多種除草劑，其中所述除草劑中的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶；和(d)從向其已施用了除草劑的水稻植物收獲種子。此類方法可以用任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑來實施。可以在控制雜草的方法的實施中使用的除草劑的合適實例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本發明還包括用于使耐受除草劑的水稻植物生長的方法。此類方法的一個實例包括(a)種植水稻種子；(b)讓所述水稻種子發芽；(C)以通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平，向所述水稻籽苗施用一種或多種除草劑，其中所述除草劑中的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶。此類方法可以用任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑來實施。可以在控制雜草的方法的實施中使用的除草劑的合適實例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。在一個實施方案中，本發明提供了耐受除草劑的水稻植物的種子。此類種子可以用于生長出耐受除草劑的水稻植物，其中從所述種子生長出的植物耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。從本發明的種子生長出的植物所將會耐受的除草劑的實例包括但不限于，芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環 己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。在另一個實施方案中，本發明提供了水稻植物的種子，其中從所述種子生長出的植物表達這樣的乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰輔酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一個或多個位置處不同于野生型水稻植物的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、
2080(Am) ,2081 (Am) ,2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或 2O98 (Am)。在這些氨基酸位置處的差異的實例包括但不限于下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為除了絲氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)處的氨基酸為除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在一些實施方案中，從所述種子生長出的植物表達包含這樣的氨基酸序列的乙酰輔酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置
2074(Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。本發明包括特別的耐受除草劑的栽培種的種子。此類種子的一個實例是水稻栽培種Indical的種子，其中所述栽品種的代表性種子樣品以ATCC登錄號PTA-10267、PTA-10568,PTA-10569或PTA-10570進行了保藏。此類種子的另一個實例是耐受除草劑的Nipponbare栽品種的種子，其中所述栽品種的代表性種子樣品以ATCC登錄號PTA-10571進 行了保藏。本發明還包括通過使所述種子生長而產生的水稻植物或其部分，以及從所述種子產生的細胞的組織培養物。細胞的組織培養物可以從種子直接產生，或者從由種子生長出的植物的部分產生，例如從葉、花粉、胚、子葉、下胚軸、分生細胞、根、根尖、雌蕊、花藥、花和/或莖產生。本發明還包括從細胞的組織培養物產生的植物及其后代。一般地，此類植物將會具有栽品種Indical的所有形態學和生理學特征。本發明還提供了用于產生水稻種子的方法。此類方法可以包括使耐受除草劑的水稻植物與其他水稻種質雜交；并且收獲所得到的雜種水稻種子，其中所述耐受除草劑的水稻植物耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本方法還包括產生Fl雜種水稻種子的方法。此類方法可以包括使耐受除草劑的水稻植物與不同的水稻植物雜交；并且收獲所得到的Fl雜種水稻種子，其中所述耐受除草劑的水稻植物耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草齊U、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本方法還包括產生Fl雜種植物的方法。此類方法可以包括使耐受除草劑的植物與不同的植物雜交；并且收獲所得到的Fl雜種種子并使所得到的Fl雜種植物生長，其中所述耐受除草劑的植物耐受處于通常會抑制植物生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合。本發明還提供了產生可以還包含轉基因的耐受除草劑的水稻植物的方法。此類方法的一個實例可以包括用轉基因轉化水稻植物的細胞，其中所述轉基因編碼乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶賦予對至少一種選自芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合的除草劑的耐受性。在本發明的方法的實施中可以使用任何合適的細胞，例如，所述細胞可以以愈傷組織的形式存在。在一些實施方案中，所述轉基因可以包含這樣的核酸序列，所述核酸序列編碼包含SEQ ID NO :2和3之一或兩者的經修飾形式的氨基酸序列，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置
1785(Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處 的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。本發明還包括通過此類方法產生的植物。產生包含轉基因的耐受除草劑的植物的方法的另一個實例可以包括用編碼賦予除草劑耐受性的酶的轉基因轉化水稻植物的細胞，其中所述細胞產生自表達乙酰輔酶A羧化酶的水稻植物或其種子，所述乙酰輔酶A羧化酶賦予對至少一種選自芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合的除草劑的耐受性。在本發明的方法的實施中可以使用任何合適的細胞，例如，所述細胞可以以愈傷組織的形式存在。本發明還包括通過此類方法產生的耐受除草劑的植物。在一個實施方案中，本發明包括產生重組體植物的方法。用于產生重組體水稻植物的方法的一個實例可以包括用轉基因轉化水稻植物的細胞，其中所述細胞產生自表達乙酰輔酶A羧化酶的水稻植物,所述乙酰輔酶A羧化酶賦予對至少一種選自芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合的除草劑的耐受性。在本發明的方法的實施中可以使用任何合適的細胞，例如，所述細胞可以以愈傷組織的形式存在。用于在本發明的方法中使用的轉基因可以包含任何所希望的核酸序列，例如，所述轉基因可以編碼蛋白質。在一個實例中，所述轉基因可以編碼酶，例如，改變脂肪酸代謝和/或碳水化合物代謝的酶。合適的酶的實例包括但不限于，果糖基轉移酶、果聚糖蔗糖酶、α-淀粉酶、轉化酶和淀粉分支酶，或編碼硬脂酰-ACP去飽和酶的反義的酶。本發明還包括通過本發明的方法產生的重組體植物。本發明的方法可以用于產生具有任何所希望的性狀的植物，例如水稻植物。此類方法的一個實例包括(a)使耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合的水稻植物與包含所希望的性狀的另一水稻栽品種的植物雜交，以產生后代植物；(b)選擇一個或多個具有所希望的性狀的后代植物，以產生經選擇的后代植物；(C)使所選擇的后代植物與耐受除草劑的植物雜交，以產生回交后代植物；(d)選擇具有所希望的性狀和除草劑耐受性的回交后代植物；和(e)相繼地重復步驟(C)和(d)三次或更多次，以產生經選擇的包含所希望的性狀和除草劑耐受性的第四代或更高代的回交后代植物。使用本發明的方法，可以引入任何所希望的性狀。可以希望的性狀的實例包括但不限于，雄性不育，除草劑耐受性，干旱耐受性，昆蟲抗性，改變的脂肪酸代謝，改變的碳水化合物代謝，和對于細菌性疾病、真菌性疾病或病毒性疾病的抗性。用于產生雄性不育水稻植物的方法的一個實例可以包括用賦予雄性不育的核酸分子轉化水稻植物，所述水稻植物耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。本發明還包括通過此類方法產生的雄性不育植物。本發明提供了包含植物細胞(例如來自水稻植物的細胞)的組合物。此類組合物的一個實例包含水稻植物的一個或多個細胞；和水性培養基，其中所述培養基包含抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的化合物。在一些實施方案中，所述細胞可以源自耐受處于通常會抑制水稻植物生長的除草劑水平的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑或其組合的水稻植物。在本發明的組合物中可以使用任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的化合物，例如芳氧苯氧丙酸酯類除草劑、環己烯酮類除草劑、苯基吡唑啉類除草劑和其組合中的一種或多種。
本發明包括編碼乙酰輔酶A羧化酶的全部或部分的核酸分子。在一些實施方案中，本發明包括編碼水稻乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)的重組的、經誘變的、合成的和/或分離的核酸分子，在所述水稻乙酰輔酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一個或多個位置處不同于野生型水稻植物的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am) ,1785 (Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027 (Am),2039(Am),2041 (Am)、2049 (Am)、2059(Am)、2074 (Am)、2075 (Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081 (Am)、2088 (Am) ,2095 (Am) ,2096 (Am)或2098 (Am)。在這些氨基酸位置處的差異的實例包括但不限于下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置
2074(Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為除了絲氨酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)處的氨基酸為除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在一些實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼包含這樣的氨基酸序列的乙酰輔酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。在一些實施方案中，本發明包括重組的、經誘變的、合成的和/或分離的核酸，其編碼這樣的蛋白質，所述蛋白質包含SEQ ID NO :2和3之一或兩者的經修飾形式的全部或部分，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為 纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明提供了耐受除草劑的BEP進化枝(clade)植物。一般地，此類植物是具有相比于該植物的野生型品種而言增加的對ACCase抑制劑(ACCI)的耐受性的植物。此類植物可以通過包含下列步驟的過程來產生(I)要么，下述步驟(a)提供具有第一的、零或非零的ACCI耐受性水平的BEP進化枝植物細胞；(b)在與培養基接觸下使所述細胞生長以形成細胞培養物；(c)使所述培養物的細胞與ACCI相接觸；(d)使來自步驟(C)的與ACCI接觸的細胞生長以形成這樣的培養物，所述培養物包含具有大于步驟(a)的第一水平的ACCI耐受性水平的細胞；和(e)從步驟(d)的耐受ACCI的細胞產生具有大于該植物的野生型品種的ACCI耐受性水平的植物；(II)要么，下述步驟(f)提供第一的耐受除草劑的BEP進化枝植物(具有相比于該植物的野生型品種而言增加的對ACCase抑制劑(ACCI)的耐受性)，所述耐受除草劑的植物已經通過包括步驟(a)-(e)的過程而產生；和(g)從第一植物產生第二的耐受除草劑的BEP進化枝植物，其保留了第一植物的增加的除草劑耐受性特征；由此獲得耐受除草劑的BEP進化枝植物。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的BEP進化枝植物是BET亞進化枝(subclade)植物。
在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的BET亞進化枝植物是BET作物植物。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物可以是竹亞科(Bambusoideae)-稻亞科(Ehrhartoideae)亞進化枝的成員。在本發明的實施中可以使用任何合適的用于使植物細胞生長的培養基。在一些實施方案中，所述培養基可以包含誘變齊U，而在其他實施方案中，所述培養基不包含誘變劑。在一些實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物可以是稻亞科的成員。在本發明的實施中可以使用任何合適的細胞，例如，所述細胞可以以愈傷組織的形式存在。在一些實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物可以是稻屬的成員，例如可以是稻這一物種的成員。本發明包括通過上述方法產生的耐受除草劑的BEP進化枝植物。此類耐受除草劑的植物可以表達這樣的乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)，所述乙酰輔酶A羧化酶中的氨基酸序列在下列位置中的一個或多個位置處不同于相應野生型BEP進化枝植物的乙酰輔酶A 羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am) ,1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am),2027 (Am),2039(Am),2041 (Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075 (Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081(Am)、2088(Am)、2095(Am)、2096(Am)或 2098(Am)。在這些氨基酸位置處的差異的實例包括但不限于下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置1824(Am)處的氨基酸為除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為除了谷氨酸之外的其他氨基酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2049 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為除了丙氨酸之外的其他氨基酸；在位置2074(Am)處的氨基酸為除了色氨酸之外的其他氨基酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為除了天冬氨酸之外的其他氨基酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為除了絲氨·酸之外的其他氨基酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2081(Am)處的氨基酸為除了異亮氨酸之外的其他氨基酸；在位置2088 (Am)處的氨基酸為除了半胱氨酸之外的其他氨基酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為除了賴氨酸之外的其他氨基酸；在位置2096(Am)處的氨基酸為除了甘氨酸之外的其他氨基酸；或者在位置2098(Am)處的氨基酸為除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在一些實施方案中，本發明的耐受除草劑的BEP進化枝植物可以表達包含這樣的氨基酸序列的乙酰輔酶A羧化酶，所述氨基酸序列包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸或色氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明還包括由于相比于相應野生型ACCase而言在其質體ACCase中具有僅一個置換而耐受ACCase抑制劑的水稻植物。在另外一個實施方案中，本發明包括由于相比于相應野生型ACCase而言在其質體ACCase中具有兩個或更多個置換而耐受ACCase抑制劑的水稻植物。在一個實施方案中，本發明提供了由于相比于相應野生型ACCase而言在其質體ACCase中具有兩個或更多個置換而耐受ACCase抑制劑的水稻植物，其中所述置換處于選 自下列的氨基酸位置處1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am) ,1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999(Am)、2027 (Am)、2039(Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、2074(Am)、2075(Am)、2078(Am),2079(Am),2080(Am),2081(Am),2088(Am),2095(Am),2096 (Am)或 2098(Am)。在一個實施方案中，本發明提供了水稻植物，其中所述水稻植物包含不是轉基因的質體ACCase。在一個實施方案中，本發明提供了植物，其中所述植物包含是轉基因的水稻質體 ACCase。在一個實施方案中，本發明提供了用于在本文所描述的水稻植物附近控制雜草生長的方法，其包括向所述雜草和水稻植物施用一定量的抑制乙酰輔酶A羧化酶的除草劑(其抑制天然出現的乙酰輔酶A羧化酶活性)，其中所述水稻植物包含經改變的乙酰輔酶A羧化酶活性，從而所述水稻植物耐受所施用的量的除草劑。在一個實施方案中，本發明提供了用于產生種子的方法,其包括(i)種植從本發明的植物產生的種子，(ii)使來自所述種子的植物生長，和(iii)從所述植物收獲種子。本發明還包括通過下述過程而產生的耐受除草劑的BEP進化枝植物(a)使從如上面所描述那樣產生的耐受除草劑的BEP進化枝植物的種子生長出的植物與其他種質雜交或回交；(b)在至少一種通常抑制乙酰輔酶A羧化酶的除草劑以通常會抑制植物生長的除草劑水平存在下，使由所述雜交或回交而得到的植物生長；和(c)選擇進一步的由所述雜交或回交而得到的繁殖植物，其中所選擇的植物是在所述除草劑存在下生長而沒有顯著損傷的植物。本發明還包括重組的、經誘變的、合成的和/或分離的核酸分子，其包含編碼在禾本科(Poaceae) BEP進化枝中的植物的經誘變的乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列，其中所述經誘變的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列在下列位置中的一個或多個位置處不同于相應野生型植物的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am)、2027 (Am)、2039(Am)、2041 (Am)、2049(Am)、2059(Am)、
2074(Am)、2075(Am)、2078(Am)、2079(Am)、2080(Am)、2081 (Am)、2088(Am)、2095(Am)、2096(Am)或2098 (Am)。此類核酸分子可以通過包含下列步驟的過程來產生(I)要么，下述步驟(a)提供具有第一的、零或非零的ACCase抑制劑(ACCI)耐受性水平的BEP進化枝植物細胞；(b)在與培養基接觸下使所述細胞生長以形成細胞培養物；(c)使所述培養物的細胞與ACCI相接觸；(d)使來自步驟(C)的與ACCI接觸的細胞生長以形成這樣的培養物，所述培養物包含具有大于步驟(a)的第一水平的ACCI耐受性水平的細胞；和(e)從步驟(d)的耐受ACCI的細胞產生具有大于該植物的野生型品種的ACCI耐受性水平的植物；(II)要么，下述步驟(f)提供第一的耐受除草劑的BEP進化枝植物(具有相比于該植物的野生型品種 而言增加的對ACCase抑制劑(ACCI)的耐受性)，所述耐受除草劑的植物已經通過包括步驟(a)-(e)的過程而產生；和(g)從第一植物產生第二的耐受除草劑的BEP進化枝植物，其保留了第一植物的增加的除草劑耐受性特征；由此獲得耐受除草劑的BEP進化枝植物；并且從所述耐受除草劑的BEP進化枝植物中分離核酸。在一個實施方案中，本發明包括篩選、分離、鑒定和/或表征單子葉植物質體ACCase中的耐受除草劑的突變的方法。在一個實施方案中，本發明包括愈傷組織或植物細胞系的用途。在其他實施方案中，本發明包括在組織培養環境中進行植物材料或細胞的培養。在另外其他實施方案中，本發明包括在組織培養環境中尼龍膜的存在。在其他實施方案中，所述組織培養環境包括液相培養基，而在其他實施方案中，所述環境包括半固體培養基。在另外其他實施方案中，本發明包括在液體培養基中在除草劑(例如，噻草酮)存在下培養植物材料，隨后為在具有除草劑的半固體培養基中進行培養。在另外其他實施方案中，本發明包括在半固體培養基中在除草劑存在下培養植物材料，隨后為在具有除草劑的液體培養基中進行培養。在一些實施方案中，本發明包括直接施用致死劑量的除草劑(例如，噻草酮)。在其他實施方案中，本發明包括從亞致死劑量開始，逐步增加除草劑劑量。在其他實施方案中，本發明在一個步驟中或者同時地包括至少一種，至少兩種，至少三種，至少四種，至少五種，至少六種，至少七種，至少八種或更多種除草劑。在其他實施方案中，通過將突變型耐受除草劑的克隆的數目除以在實驗中所使用的獨個愈傷組織的數目來決定突變頻率。在一些實施方案中，本發明包括至少O. 03%或更高的突變頻率。在一些實施方案中，本發明包括至少O. 03%，至少O. 05%，至少O. 10%，至少O. 15%，至少O. 20%，至少O. 25%，至少O. 30%，至少O. 35%，至少O. 40%或更高的突變頻率。在其他實施方案中，本發明包括這樣的突變頻率，其為其他的篩選、分離、鑒定和/或表征單子葉植物質體ACCase中的耐受除草劑的突變的方法的至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少6倍，至少7倍，至少8倍，至少9倍，至少10倍或更高。在一些實施方案中，本發明的方法包括鑒定ACCase中的耐受除草劑的突變。在進一步的實施方案中，本發明包括在單子葉植物細胞中重演所述耐受除草劑的突變。在一些實施方案中，本發明包括分離的細胞或組織，所述具有植物來源的細胞或組織具有a)源自宿主ACCase (B卩，內源的)基因的ACCase活性的缺陷；和b)來自源于單子葉植物的質體ACCase基因的ACCase活性。
ACCase的單子葉植物來源在其他實施方案中，本發明包括來自本文所描述的單子葉植物科植物的質體ACCase或其部分。在其他實施方案中，本發明包括在宿主植物細胞中篩選單子葉植物質體ACCase的耐受除草劑的突變體。在其他實施方案中，本發明包括使用所制備的宿主細胞來篩選單子葉植物質體ACCase的耐受除草劑的突變體。在一些實施方案中，本發明提供了沒有質體ACCase活性的宿主細胞。在其他實施方案中，本發明的宿主細胞表達對除草劑敏感的單子葉植物質體ACCase0在其他實施方案中，本發明的方法包括由于基因組質體ACCase基因的突變而在ACCase活性方面缺陷的宿主細胞，所述突變包括單點突變、多點突變、部分缺失、部分敲除、完全缺失和完全敲除。在另一個實施方案中，使用其他分子生物學技術(例如RNAi、siRNA·或反義RNA)來降低或消除基因組質體ACCase活性。此類分子生物學技術是本領域眾所周知的。在另外其他實施方案中，可以通過ACCase的代謝抑制劑來降低或消除源于基因組ACCase的活性。在一些實施方案中，所述宿主細胞是單子葉植物宿主細胞。在另外其他實施方案中，本發明包括制備轉基因植物細胞的方法，其包括a)分離具有單子葉植物來源的細胞；b)使至少一個拷貝的基因組ACCase基因失活；c)給所述細胞提供源于單子葉植物的質體ACCase基因；d)分離包含所述源于單子葉植物的質體ACCase基因的細胞；和任選地，e)使至少另外拷貝的基因組ACCase基因失活，其中所述細胞在由基因組ACCase基因所提供的ACCase活性方面是缺陷的。在一個實施方案中，耐受噻草酮的突變頻率大于O. 03%。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中耐受噻草酮的植物細胞或組織還耐受其他ACCase抑制劑。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中耐受噻草酮的植物細胞或組織包含僅一個在除草劑存在下進行培養之前在該單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中耐受噻草酮的植物細胞或組織包含兩個或更多個在除草劑存在下進行培養之前在該單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中噻草酮以亞致死劑量存在。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中在噻草酮存在下進行的培養在逐步或逐漸增加噻草酮濃度的情況下施行。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法,其中所述方法包括在膜上培養細胞。在優選的實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其包括在尼龍膜上培養細胞。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選耐受噻草酮的植物細胞的方法，其中細胞的培養在液體培養基或半固體培養基中進行。
在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中所述方法還包括鑒定至少一個在噻草酮存在下進行培養之前在外源單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中所述單子葉植物是水稻。在一個實施方案中，本發明提供了用于篩選的方法，其中所述外源單子葉植物ACCase來自水稻。附圖簡述圖I為柱狀圖，其顯示了在不同的除草劑選擇水平存在下生長的源自秈稻的水稻愈傷組織的相對生長。圖IA顯示了用吡喃草酮獲得的結果，圖IB顯示了用烯禾定獲得的結果，和圖IC顯示了用噻草酮獲得的結果。圖2為用于產生耐受除草劑的水稻植物的選擇過程的圖解。
圖3顯示了在用除草劑處理后一周獲取的植物的照片。圖4顯示了在用除草劑處理后兩周獲取的植物的照片。圖5提供了來自大穗看麥娘的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(GenBank登錄號CAC84161)。圖6提供了編碼來自大穗看麥娘的乙酰輔酶A羧化酶的mRNA (GenBank登錄號AJ310767 區域157. · 7119) (SEQ ID NO 4)。圖7A提供了秈稻和粳稻乙酰輔酶A羧化酶基因的基因組核苷酸序列(SEQ ID NO 5)。圖7B提供了編碼秈稻和粳稻乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 6)。圖7C提供了秈稻乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO :3)。圖8A提供了編碼玉蜀黍(Zea mays)乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 11)。圖8B提供了玉蜀黍乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID N0:12)。圖9A提供了編碼玉蜀黍乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 13)。圖9B提供了玉蜀黍乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID N0:14)。圖IOA提供了編碼普通小麥(Triticum aestivum)乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 15)。圖IOB提供了普通小麥乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 16)。圖IlA提供了編碼小米(Setaria italica)乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQID NO 17)。圖IlB提供了小米乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 18)。圖12A提供了編碼小米乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 19)。圖12B提供了小米乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 20)。圖13A提供了編碼小米乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 21)。圖13B提供了小米乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 22)。圖14A提供了編碼大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 23)。圖14B提供了大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 24)。圖15A提供了編碼節節麥(Aegilops tauschii)乙酰輔酶A羧化酶的核苷酸序列(SEQ ID NO 25)。
圖15B提供了節節麥乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列(SEQ ID NO 26)。圖16提供了單突變體和雙突變體的比較。圖17提供了圖，其顯示了突變型水稻對于各種ACCase抑制劑的結果。圖18提供了大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶氨基酸序列(GenBank登錄號CAC84161)。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中可以改變的氨基酸以粗體雙下劃線標示出。圖19提供了與大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶相比對的野生型稻乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列，其中標明了一些關鍵殘基。發明詳述定義 如本文中所使用的，“耐受…的”或“耐受除草劑的”是指在通常在非耐受性(例如，野生型)植物或其部分中引起生長抑制的除草劑量存在下能夠生長的植物或其部分。通常抑制非耐受性植物生長的除草劑水平是已知的，并且可由本領域技術人員容易地確定。實例包括由制造商推薦用于施用的量。最大比率是通常會抑制非耐受性植物生長的除草劑量的實例。如本文中所使用的，“重組體”是指具有來自不同來源的遺傳物質的生物。如本文中所使用的，“經誘變的”是指具有相比于相應野生型生物而言經改變的遺傳物質的生物，其中所述遺傳物質的改變通過人工作用來進行誘導和/或選擇。可以用于產生經誘變的生物的人工作用的實例包括但不限于在亞致死濃度的除草劑(例如，乙酰輔酶A羧化酶抑制劑例如噻草酮或烯禾定)中進行植物細胞(例如，愈傷組織)的組織培養；用化學誘變劑處理植物細胞，并隨后用除草劑(例如，乙酰輔酶A羧化酶抑制劑例如噻草酮或烯禾定)進行選擇；或者用X-射線處理植物細胞，并隨后用除草劑(例如，乙酰輔酶A羧化酶抑制劑例如噻草酮或烯禾定)進行選擇。可以使用本領域中已知的任何方法來誘導突變。誘導突變的方法可以在遺傳物質的隨機位置處誘導突變，或者可以在遺傳物質的特定位置處誘導突變(即，可以為定向誘變技術)。如本文中所使用的，“基因改造生物”(GMO)是其遺傳特征已經通過插入來自另一來源生物的遺傳物質而被改變的生物，或者保留了所插入的遺傳物質的其后代。來源生物可以為不同的生物類型(例如，GMO植物可以包含細菌的遺傳物質)，或者來自相同的生物類型(例如，GMO生物可以包含來自另一植物的遺傳物質)。如本文中所使用的，“重組體”和“GM0”被認為是同義詞，并且表明來自不同來源的遺傳物質的存在；然而，“經誘變的”表明經改變的來自相應野生型生物的遺傳物質，而不是來自另一來源生物的遺傳物質。如本文中所使用的，“野生型”或“相應野生型植物”表示生物或其遺傳物質的典型形式，正如它通常出現的那樣，其區別于經誘變的和/或重組的形式。對于本發明，術語“耐受除草劑的”和“抗除草劑的”可互換使用，并且意在具有相等的含義和相等的范圍。類似地，術語“除草劑耐受性”和“除草劑抗性”可互換使用，并且意在具有相等的含義和相等的范圍。類似地，術語“耐受…的”和“抗…的”可互換使用，并且意在具有相等的含義和相等的范圍。如本文中關于在其各種實施方案中有用的除草劑而使用的，諸如生長素除草劑(auxinic herbicide)、AHAS抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)抑制劑、PPO抑制劑、EPSPS抑制劑、咪唑啉酮類、磺酰脲類等的術語，是指那些在本領域中認可的在農藝學上可接受的除草劑活性成分(A. I.)。類似地，諸如殺真菌劑、殺線蟲劑、殺蟲劑等的術語，是指其他在本領域中認可的在農藝學上可接受的活性成分。當關于特定的突變型酶或多肽進行使用時，諸如“耐受除草劑的(HT) ”和“除草劑耐受性”的術語是指此類酶或多肽在通常會使所述酶或多肽的野生型(非突變型)形式的活性失活或抑制所述酶或多肽的野生型(非突變型)形式的活性的除草劑A. I.量存在下執行其生理學活性的能力。例如，當特別地關于AHAS酶或AHASL多肽進行使用時，它特別地是指耐受AHAS抑制劑的能力。AHAS抑制劑的類別包括，磺酰脲類、咪唑啉酮類、三唑并嘧啶類、磺酰基氨基羰基三唑啉酮類和嘧啶基氧基[硫代]苯甲酸酯類。如本文中所使用的，“后裔(descendant) ”是指任何代的植物。如本文中所使用的，“后代(progeny) ”是指第一代的植物。植物 本發明提供了耐受除草劑的禾本科(Poaceae)的單子葉植物。可以將禾本科分為兩個主要的進化枝，包括竹亞科(Bambusoideae)、稻亞科(Ehrhartoideae)和早熟禾亞科(Pooideae)的進化枝(BEP進化枝)；和包括黍亞科(Panicoideae)、蘆竹亞科(Arundinoideae)、虎尾草亞科(Chloridoideae)、假淡竹葉亞科(Centothecoideae)、Micrairoideae、三芒草亞科(Aristidoideae)和扁芒草亞科(Danthonioideae)的進化枝(PACCMAD進化枝)。竹亞科包括稻族(Oryzeae)。本發明涉及BEP進化枝的植物，特別是竹亞科和稻亞科的植物。一般地，本發明的植物由于表達下面所描述的本發明的乙酰輔酶A羧化酶而耐受至少一種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。BET進化枝包括竹亞科，稻亞科，和小麥組(Triticodae)，但不包括其他的早熟禾亞科的組。BET作物植物是作為BET亞進化枝的成員的為了糧食或飼草而培植的植物，例如大麥、玉米等。本發明還提供了商業上重要的耐受除草劑的單子葉植物，包括甘蔗(甘蔗屬物種(Saccharum spp.),以及草坪草,例如草地早熟禾(Poa pratensis)(藍草)、剪股穎屬物種(Agrostis spp.)(剪股穎)、黑麥草屬物種(Lolium spp.)(黑麥草)、羊茅屬物種(Festucaspp.)(羊茅)、結縷草屬物種(Zoysia spp.)(結縷草)、狗牙根屬物種(Cynodon spp.)(百慕大草)、側鈍葉草(Stenotaphrum secunda turn)(圣奧古斯丁草)、雀稗屬物種(Paspalumspp.)(巴哈草)、假儉草(Eremochloa ophiuroides)(百足草)、地經草屬物種(Axonopusspp.)(地毪草)、指形垂穗草(Bouteloua dactyloides)(野牛草)和垂穗草屬變種物種(Bouteloua var. spp.)(格蘭馬草)。在一個實施方案中，本發明提供了耐受除草劑的竹亞科植物。一般地，此類植物耐受一種或多種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。耐受除草劑的竹亞科植物的實例包括但不限于，青籬竹屬(Arundinaria)、箣竹屬(Bambusa)、丘斯夸竹屬(Chusquea)、瓜多竹屬(Guadua)和倭竹屬(Shibataea)的那些。在一個實施方案中，本發明提供了耐受除草劑的稻亞科植物。一般地，此類植物耐受一種或多種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。耐受除草劑的稻亞科植物的實例包括但不限于，皺稃草屬(Ehrharta)、假稻屬(Leersia)、Microlaena、稻屬(Oryza)和郝屬(Zizania)的那些。在一個實施方案中，本發明提供了耐受除草劑的早熟禾亞科植物。一般地，此類植物耐受一種或多種抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。耐受除草劑的早熟禾亞科植物的實例包括但不限于，小麥族(Triticeae)、燕麥族(Aveneae)、早熟禾族(Poeae)這些屬的那些。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物是水稻植物。兩種水稻物種是最常栽培的，稻(Oryza sativa)和光稃稻(Oryza glaberrima)。稻的許多亞種是商業上重要的，包括秈稻(稻印度亞種)(Oryza sativa subsp. indica)、粳稻(稻日本亞種)(Oryzasativa subsp. japonica)、稻爪卩圭亞種(Oryza sativa subsp. javanica)、稻粘性亞種(Oryza sativa subsp. glutinosa)(糯稻)、香稻組(Oryza sativa Aromatica group)(例如，巴斯馬蒂(basmati))和稻(浮稻組)。本發明包括耐受除草劑的在所有上面提及的物種和亞種中的植物。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物是小麥植物。兩種小麥物種是最常栽培的，普通小麥(Triticum aestivum)和圓錐小麥(Triticum turgidum)。許多其他物種是商業上重要的，包括但不限于，提莫非維小麥(Triticum timopheevii)、一粒小麥(Triticum monococcum)、苑可夫斯基小麥(Triticum zhukovskyi)和烏拉爾圖小麥(Triticum urartu)以及其雜種。本發明包括耐受除草劑的在所有上面提及的 物種和亞種中的植物。在本發明中所包括的普通小麥的亞種的實例為，普通小麥(原亞種)(Triticum aestivum subsp. aestivum)、密穗小麥(Triticum aestivum subsp.compactum)、馬卡小麥(Triticum aestivum subsp. macha)、瓦維洛夫小麥(Triticumaestivum subsp. vavilovii)、斯佩爾特小麥(Triticum aestivum subsp. spelta)和球粒小麥(Triticum aestivum subsp. sphaerococcum)。在本發明中所包括的圓維小麥的亞種的實例為，圓錐小麥(原亞種)(Triticum turgidum subsp. turgidum)、波斯小麥(Triticumturgidum subsp. carthlicum)、雙粒小麥(Triticum turgidum subsp. dicoccon)、硬粒小麥(Triticum turgidum subsp. durum)、Triticum turgidum subsp. paleocolchicuna、波蘭小麥(Triticum turgidum subsp. polonicum)、東方小麥(Triticum turgidum subsp.turanicum)和野生二粒小麥(Triticum turgidum subsp. dicoccoides)。在本發明中所包括的一粒小麥的亞種的實例為，一粒小麥(原亞種)(Triticum monococcum subsp.monococcum)矛口擬山羊草小麥(Triticum monococcum subsp. aegilopoides)。在本發明的一個實施方案中，小麥植物是普通小麥物種的成員，并且更特別地，是CDC Teal栽培種。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物是大麥植物。兩種大麥麥物種是最常栽培的，大麥(Hordeum vulgare)和亞利桑那大麥(Hordeum arizonicum)。許多其他物種是商業上重要的，包括但不限于，布頓大麥草(Hordeum bogdanii)、短藥大麥(Hordeumbrachyantherum)、短芒大麥(Hordeum brevisubulatum)、球莖大麥(Hordeum bulbosum)、叢毛大麥(Hordeum comosum)、平展大麥(Hordeum depressum)、短尾大麥(Hordeumintercedens)、芒穎大麥(Hordeum jubatum)、海濱大麥(Hordeum marinum)、海濱大麥(Hordeum marinum)、巾白氏大麥(Hordeum parodii)、小大麥(Hordeum pusillum)、草地大麥(Hordeum secalinum)和純稃野大麥(Hordeum spontaneum)。本發明包括耐受除草劑的在所有上面提及的物種和亞種中的植物。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物是黑麥植物。商業上重要的物種包括但不限于，野黑麥(Secale sylvestre)、勁直黑麥(Secale strictum)、黑麥(Secalecereale)、瓦維洛夫黑麥(Secale vavilovii)、非洲黑麥(Secale africanum)、纖毛穎黑麥(Secale ciliatoglume)、古黑麥(Secale ancestrale)和山黑麥(Secale montanum)。本發明包括耐受除草劑的在所有上面提及的物種和亞種中的植物。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物是草坪植物。草坪草的許多商業上重要的物種包括，結縷草(Zoysia japonica)、匍匍剪股穎(Agrostis palustris)、草地早熟禾(Poa pratensis)、早熟禾(Poa annua)、馬唐(Digitaria sanguinalis)、香附子(Cyperus rotundus)、短葉水娛蟻(Kyllinga brevifolia)、阿穆爾莎草(Cyperusamuricus)、力口拿大飛蓬(Erigeron canadensis)、天古月荽(Hydrocotyle sibthorpioides)、雞眼草(Kummerowia striata)、地錦(Euphorbia humifusa)和耕地堇菜(Violaarvensis)。本發明包括耐受除草劑的在所有上面提及的物種和亞種中的植物。除了能夠耐受抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑外，本發明的植物還能夠耐受作用于其他生理學過程的除草劑。例如，本發明的植物可以耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑，并且還耐受其他除草劑，例如酶抑制劑。本發明的植物可以耐受的其他酶抑制劑的實例包括但不限于，5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的抑制劑例如草甘膦，乙酰羥酸合 酶(AHAS)的抑制劑例如咪唑啉酮類、磺酰脲類和磺酰胺類除草劑，以及谷氨酰胺合酶的抑制劑例如草銨膦。除了酶抑制劑外，本發明的植物還可以耐受具有其他作用方式的除草劑，例如，生長素除草劑例如2，4-D或麥草畏，葉綠素/類胡蘿卜素色素抑制劑例如羥基苯基丙酮酸雙加氧酶(HPPD)抑制劑或八氫番茄紅素去飽和酶(ros)抑制劑，原卟啉原-IX氧化酶抑制劑，細胞膜破壞劑，光合作用抑制劑例如溴苯腈或碘苯腈，細胞分裂抑制劑，根抑制齊U，芽抑制劑，以及其組合。因此，可以使耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的本發明的植物耐受多種類別的除草劑。例如，在一些實施方案中，耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑例如“dim類”(例如，噻草酮、烯禾定、烯草酮或吡喃草酮)、“fop類”(例如，炔草酸、禾草靈、吡氟禾草靈、吡氟氯禾靈或喹禾靈)和“den類”(例如，唑啉草酯(pinoxaden))的本發明的植物可以耐受生長素除草劑；耐受EPSPS抑制劑，例如草甘膦；耐受PPO抑制劑，例如，嘧啶二酮類，例如苯嘧磺草胺(saflufenacil)，三唑啉酮類，例如甲磺草胺、唑草酯，丙炔氟草胺，二苯醚類，例如三氟羧草醚、氟磺胺草醚、乳氟禾草靈、乙氧氟草醚，N-苯基酞酰亞胺類，例如氟烯草酸，CGA-248757 ;和/或耐受GS抑制劑，例如草銨膦。除了這些類別的抑制劑外，耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的本發明的植物還可以耐受具有其他作用方式的除草劑，例如葉綠素/類胡蘿卜素色素抑制劑、細胞膜破裂劑、光合作用抑制劑、細胞分裂抑制劑、根抑制劑、芽抑制劑以及其組合。此類耐受性性狀可以例如表現為突變型EPSPS蛋白或突變型谷氨酰胺合成酶蛋白；或者表現為突變型原生的、近交的或轉基因的芳氧基鏈烷酸雙加氧酶(AAD或DHT)、鹵芳基腈水解酶(BXN)、2，2-二氯丙酸脫鹵素酶(DEH)、草甘膦-N-乙酰轉移酶(GAT)、草甘膦脫羧酶(GDC)、草甘膦氧化還原酶(GOX)、谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)、膦絲菌素乙酰轉移酶(PAT或bar)、或具有除草劑降解活性的細胞色素P450 (CYP450)蛋白。在此的耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的植物還可以疊加有其他性狀，包括但不限于殺蟲性狀，例如BtCry和其他對于鞘翅類、鱗翅類、線蟲類或其他害蟲具有殺蟲活性的蛋白質；營養或營養藥用(nutraceutical)性狀，例如改變的油含量或油譜性狀、高蛋白質或高氨基酸濃度性狀，和其他本領域中已知的性狀類型。進一步地，還涵蓋了這樣的植物，所述植物除了能夠耐受抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑外，還通過使用重組DNA技術而能夠合成一種或多種殺昆蟲蛋白，尤其是已知的來自芽孢桿菌屬(Bacillus),特別是來自蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)的那些，例如 δ -內毒素，例如 CryIA (b)、CryIA (c)、CrylF、CryIF (a2)、CryIIA (b)、CryIIIA, CryIIIB (bl)或 Cry9c ;植物殺昆蟲蛋白(VIP)，例如 VIP1、VIP2、VIP3 或 VIP3A ；在線蟲中建群的細菌例如光桿狀菌屬物種(Photorhabdus spp.)或致病桿菌屬物種(Xenorhabdus spp.)的殺昆蟲蛋白；由動物產生的毒素，例如蝎毒素、蜘蛛毒素、黃蜂毒素或其他昆蟲特異性神經毒素；由真菌產生的毒素，例如鏈霉菌毒素；植物外源凝集素，例如豌豆或大麥外源凝集素；凝集素；蛋白酶抑制劑，例如胰蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制齊U、patatin、半胱氨酸蛋白酶抑制劑或木瓜蛋白酶抑制劑；核糖體失活蛋白(RIP)，例如蓖麻毒蛋白、玉米-RIP、相思豆毒蛋白、軟瓜蛋白、肥皂草毒蛋白或異株瀉根毒蛋白；類固醇代謝酶，例如3-羥基-類固醇氧化酶、蛻皮類固醇-IDP-糖基-轉移酶、膽固醇氧化酶、蛻皮素抑制劑或HMG-CoA-還原酶；離子通道阻斷劑，例如鈉或鈣通道的阻斷劑；保幼激素酯酶；利尿激素受體(helicokinin受體)；芪合酶，聯芐合酶，殼多糖酶或葡聚糖酶。在本發明的范圍內，這些殺昆蟲蛋白或毒素也明確地被理解為前毒素、雜合蛋白、截短的或經其他修飾的蛋白質。雜合蛋白的特征在于蛋白質結構域的重新組合(參見例如WO 02/015701)。此 類毒素或者能夠合成此類毒素的基因改造植物的進一步實例公開在例如EP-A 374753、WO93/007278、WO 95/34656、EP-A 427 529、EP-A 451 878、WO 03/18810 和 WO 03/52073 中。用于產生此類基因改造植物的方法通常是本領域技術人員已知的，并且例如描述在上面提及的出版物中。包含在基因改造植物中的這些殺昆蟲蛋白賦予產生這些蛋白質的植物以對來自所有節肢動物分類群的有害害蟲的耐受性，尤其是對甲蟲類(鞘翅目(Coleoptera))、雙翅昆蟲類(雙翅目(Diptera))和蛾類(鱗翅目(Lepidoptera))以及對線蟲(線蟲動物門(Nematoda))的耐受性。進一步地，在一個實施方案中，還涵蓋了這樣的植物，所述植物例如通過使用重組DNA技術和/或通過育種和/或以其他方式就此類性狀進行選擇，而能夠合成一種或多種蛋白質以增加那些植物對于細菌性、病毒性或真菌性病原體的抗性或耐受性。用于產生此類基因改造植物的方法通常是本領域技術人員已知的。如本文所描述的那樣而產生的植物也可以疊加有其他性狀，包括但不限于，抗病性、提高的礦物質譜、提高的維生素譜、提高的油譜(例如，高油酸含量)、氨基酸譜(例如，高賴氨酸玉米)，和其他本領域中已知的性狀類型。進一步地，在一個實施方案中，還涵蓋了這樣的植物，所述植物例如通過使用重組DNA技術和/或通過育種和/或通過其他選擇方式，而能夠合成一種或多種蛋白質以增加生產力(例如，生物量生產、谷粒產量、淀粉含量、油含量或蛋白質含量)，對于干旱、鹽度或其他限制生長的環境因素的耐受性，或者對于那些植物的害蟲和真菌性、細菌性或病毒性病原體的耐受性。進一步地，在一個實施方案中，還涵蓋了這樣的植物，所述植物例如通過使用重組DNA技術和/或通過育種和/或通過其他選擇方式，而包含經改變的量的內含物物質或新的內含物物質，特別地用于改善人或動物的營養。進一步地，還涵蓋了這樣的植物，所述植物通過使用重組DNA技術而包含經改變的量的內含物物質或新的內含物物質，特別地用于改善原材料生產。
進一步地，在一些實施方案中，還涵蓋了這樣的本發明的植物，所述植物例如通過使用重組DNA技術和/或通過育種和/或以其他方式就此類性狀進行選擇，而被改變以包含增加的量的維生素和/或礦物質，和/或改善的營養藥用化合物譜。在一個實施方案中，耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的本發明的植物相對于野生型植物而言包含增加的量的選自下列的化合物或者改善的選自下列的化合物譜芥子油苷類(例如，蘿卜苷(4-甲基亞硫酰基丁基芥子油苷)、蘿卜硫烷、3-吲哚基甲基-芥子油苷(蕓苔葡糖硫苷)、I-甲氧基-3-吲哚基甲基-芥子油苷(新蕓苔葡糖硫苷))；酚類(例如，類黃酮(例如，槲皮素、山奈素)、羥基肉桂酰基衍生物(例如，1，2，2'-三芥子酰基龍膽二糖、1，2_ 二阿魏酰基龍膽二糖、1，2' - 二芥子酰基-2-阿魏酰基龍膽二糖、3-0-咖啡酰基-奎尼酸(新氯原酸)))；以及維生素和礦物質(例如，維生素C、維生素E、胡蘿卜素、葉酸、煙酸、核黃素、硫胺素、鈣、鐵、鎂、鉀、硒和鋅)。在另一個實施方案中，耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的本發明的植物相對于野生型植物而言包含增加的量的選自下列的化合物或者改善的選自下列的化合物譜甲狀腺腫素原(piOgoitrin);異硫氰酸鹽類；吲哚類(芥子油苷水解的產物)；谷胱甘肽；類胡蘿卜·素，例如，胡蘿卜素，番茄紅素，和葉黃素類胡蘿卜素例如葉黃二醇和玉米黃素；酚類，包括類黃酮例如黃酮醇類(例如，槲皮素、蕓香苷)，黃烷類/單寧類(例如，原花青素類，包括香豆素，原花色素類，兒茶素類，和花色素苷類)；黃酮類；植物雌激素類，例如，香豆雌素類(coumestans)，木脂素類，白藜蘆醇，異黃酮類例如染料木黃酮，大豆黃素，和黃豆黃素；雷瑣酸內酯類；有機硫化合物；植物留醇類；類萜，例如鼠尾草酚、迷迭香酸、甘草皂苷和皂苷類；葉綠素；葉綠酸，糖類，花色素苷類和香夾蘭。在其他實施方案中，耐受乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的本發明的植物相對于野生型植物而言包含增加的量的選自下列的化合物或者改善的選自下列的化合物譜長春花新堿、長春花堿、紫杉烷類(例如，紫杉醇(紅豆杉醇)、漿果赤霉素IIIUO-去乙酰漿果赤霉素III、10-去乙酰紫杉醇、木糖基紫杉醇、7-表紫杉醇、7-表漿果赤霉素III、10-去乙酸二尖杉寧喊、表二尖杉寧喊、泰素帝、二尖杉寧喊、木糖基二尖杉寧喊、紫杉吉吩(taxagifine)、8_苯甲酰氧基紫杉吉吩、9-乙酰氧基紫杉素、9_輕基紫杉素、taiwanxam、紫杉烷la、紫杉烷lb、紫杉烷Ic、紫杉烷IcUGMP紫杉醇、9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素III、10-去乙酰-7-表紫杉醇、四氫大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、染料木黃酮、大豆黃素、可待因、嗎啡、奎寧、紫草素、阿馬里新、蛇根堿等。本發明還包括本發明的植物的后代，以及源自本發明的耐受除草劑的植物的種子和源自本發明的耐受除草劑的植物的細胞。在各種實施方案中，在此的植物可以用于產生植物產品。因此，用于制備后裔種子的方法包括種植能夠產生此處的植物的種子，使所得到的植物生長，并且收獲其后裔種子。在一些實施方案中，此類方法可以進一步包括向所得到的植物施用抑制ACCase的除草劑組合物。類似地，用于產生來自此處的植物的衍生產品的方法可以包括加工其植物部分以獲得衍生產品。在一些實施方案中，此類方法可以用于獲得衍生產品，其是例如草料、飼料、種子磨粉、油或種子處理包衣種子中的任一種。通過此類方法獲得的種子、經處理的種子和其他植物產品是可以商業化的有用產品。在各種實施方案中，本發明提供了來自本文所描述的任何植物的食品、消費產品、工業產品和獸醫學產品的生產。乙酰輔酶A羧化酶本發明提供了表達乙酰輔酶A羧化酶的植物，所述乙酰輔酶A羧化酶所具有的氨基酸序列不同于在相應野生型植物中發現的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列。為了易于理解，本文所使用的氨基酸編號系統將是用于來自大穗看麥娘[Huds.](也稱為黑草)的乙酰輔酶A羧化酶的編號系統。編碼大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶的mRNA序列在GenBank登錄號AJ310767處可得到，并且蛋白質序列在GenBank登錄號CAC84161處可得到，兩者均通過提及而特別地引入本文。所提及的氨基酸的編號將跟隨有(Am)，以指明該氨基酸所對應的大穗看麥娘序列中的氨基酸。圖18提供了大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶氨基酸序列(GenBank登錄號CAC84161)。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中可以改變的氨基酸以粗雙下劃線標示出，并且圖19描繪了與大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶相比對的野生型稻乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列，其中標明了一些關鍵殘基。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1781(Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1781 (Am)處具有異亮氨酸(11781)。本發明的1781 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了異亮氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，亮氨酸(I1781L)、纈氨酸(I1781V)、蘇氨酸(I1781T)和丙氨酸(I1781A)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1785(Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1785 (Am)處具有丙氨酸(A1785)。本發明的1785 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，甘氨酸(A1785G)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置
1785(Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1786 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1786 (Am)處具有丙氨酸(A1786)。本發明的1786 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，脯氨酸(A1786P)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置
1786(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1811 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置ISll(Am)處具有異亮氨酸(11811)。本發明的1811 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了異亮氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，天冬酰胺(I1811N)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1824(Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1824 (Am)處具有谷氨酰胺(Q1824)。本發明的1824(Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了谷氨酰胺之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，脯氨酸(Q1824P)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1824(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1864(Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1864 (Am)處具有纈氨酸(V1864)。本發明的1864 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，苯丙氨酸(V1864F)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1864(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1999(Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置1999 (Am)處具有色氨酸(W1999)。本發明的1999 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了色氨酸之外 的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，半胱氨酸(W1999C)和甘氨酸(W1999G)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2027 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2027 (Am)處具有色氨酸(W2027)。本發明的2027 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了色氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，半胱氨酸(W2027C)和精氨酸(W2027R)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2039 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2039 (Am)處具有谷氨酸(E2039)。本發明的2039 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了谷氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，甘氨酸(E2039G)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2041 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸(12041)。本發明的2041 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了異亮氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，天冬酰胺(I2041N)或纈氨酸(I2041V)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2049 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2049 (Am)處具有纈氨酸(V2049)。本發明的2049 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，苯丙氨酸(V2049F)、異亮氨酸(V2049I)和亮氨酸(V2049L)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2059 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2059 (Am)處具有丙氨酸(A2059)。本發明的2059 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了丙氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，纈氨酸(A2059V)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2074 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2074(Am)處具有色氨酸(W2074)。本發明的2074 (Am) ACCase突變體將在該位置處具有除了色氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，亮氨酸(W2074L)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。
在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2075 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2075 (Am)處具有纈氨酸(V2075)。本發明的2075 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，甲硫氨酸(V2075M)、亮氨酸(V2075L)和異亮氨酸(V2075I)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸。在一些實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將具有在位置2075(Am)處的纈氨酸，和緊在位置2075 (Am)之后且在位置2076 (Am)處的纈氨酸之前的額外的纈氨酸，即可以在野生型酶具有兩個纈氨酸之處具有三個連續的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2078 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2078 (Am)處具有天冬氨酸(D2078)。本發明的2078 (Am) ACCase突變體將在該位置處具有除了天冬氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，賴氨酸(D2078K)、甘氨酸(D2078G)或蘇氨酸(D2078T)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2079 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2079 (Am)處具有絲氨酸(S2079)。本發明的2079 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了絲氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，苯丙氨酸(S2079F)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2080 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2080 (Am)處具有賴氨酸(K2080)。本發明的2080 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了賴氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，谷氨酸(K2080E)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2080 (Am)處具有谷氨酸。在另一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶通常將具有該位置的缺失(Λ 2080)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2081 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2081 (Am)處具有異亮氨酸(12081)。本發明的2081 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了異亮氨酸之外的其他氨基酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶通常將具有該位置的缺失(Δ2081)。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2088 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2088 (Am)處具有半胱氨酸(C2088)。本發明的2088 (Am) ACCase突變體將在該位置處具有除了半胱氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，精氨酸(C2088R)、色氨酸(C2088W)、苯丙氨酸(C2088F)、甘氨酸(C2088G)、組氨酸(C2088H)、賴氨酸(C2088K)、絲氨酸(C2088S)、蘇氨酸(C2088T)、亮氨酸(C2088L)或纈氨酸(C2088V)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2095 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2095 (Am)處具有賴氨酸(Κ2095)。本發明的2095 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了賴氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，谷氨酸(Κ2095Ε)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2096 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2096 (Am)處具有甘氨酸(G2096)。本發明的2096 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了甘氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，丙氨酸(G2096A)或絲氨酸(G2096S)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2098 (Am)處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。野生型大穗看麥娘乙酰輔酶A羧化酶在位置2098 (Am)處具有纈氨酸(V2098)。本發明的2098 (Am)ACCase突變體將在該位置處具有除了纈氨酸之外的其他氨基酸。在本發明的乙酰輔酶A羧化酶中在該位置處可以發現的氨基酸的合適實例包括但不限于，丙氨酸(V2098A)、甘氨酸(V2098G)、脯氨酸(V2098P)、組氨酸(V2098H)、絲氨酸(V2098S)或半胱氨酸(V2098C)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸。在一個實施方案中，本發明包括本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶，其在下列位置中的僅一個位置處不同于相應野生型植物的乙酰輔酶A羧化酶1781(Am)、1785(Am)、1786(Am)、1811(Am)、1824(Am)、1864(Am)、1999(Am),2027(Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、2080 (Am)、2081 (Am)、2088 (Am)、2095 (Am)、2096 (Am)或 2098 (Am)。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同2078 (Am) ,2088 (Am)或2075 (Am)。在優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同2039 (Am)、2059 (Am)、2080 (Am)或2095(Am)。在更優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、2041 (Am) ,2049 (Am) ,2074 (Am) ,2079 (Am) ,2081 (Am) ,2096 (Am)或 2098 (Am)。在最優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同1781 (Am), 1999 (Am) ,2027 (Am) ,2041 (Am)或 2096 (Am)。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將具有下列置換中的僅一個置換在位置2075 (Am)處的異亮氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸，或在位置2088 (Am)處的精氨酸。在優選的實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將具有下列置換中的僅一個置換在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2075 (Am)處的甲硫氨酸，位置2075 (Am)的重復(即，在位置2074 (Am)和2075 (Am)之間插入纈氨酸，或在位置 2075(Am)和2076 (Am)之間插入纈氨酸)，氨基酸位置2080 (Am)的缺失，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，位置2081 (Am)的缺失，或在位置2095 (Am)處的谷氨酸。在更優選的實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將具有下列置換中的僅一個置換在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置2075 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的甲硫氨酸，在位置2078 (Am)處的蘇氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2096 (Am)處的絲氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸，在位置2098 (Am)處的丙氨酸，在位置2098 (Am)處的甘氨酸，在位置2098 (Am)處的組氨酸，在位置2098 (Am)處的脯氨酸，或在位置2098 (Am)處的絲氨酸。在最優選的實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將具有下列置換中的僅一個置換在位置1781(Am)處的亮氨酸，在位置1781 (Am)處的蘇氨酸，在位置1781 (Am)處的纈氨酸，在位置1781 (Am)處的丙氨酸，在位置1999 (Am)處的甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2027 (Am)處的精氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2041 (Am)處的纈氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸，和在位置2096 (Am)處的絲氨酸。在一個實施方案中，以轉基因方式使用編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽具有下列置換中的僅一個置換在位置2075 (Am)處的異亮氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸，或在位置2088 (Am)處的精氨酸。在另一個實施方案中，用包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的表達載體構建體轉化單子葉植物細胞，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽具有下列置換中的僅一個置換在位置2075 (Am)處的異亮氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸，或在位置2088 (Am)處的精氨酸。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的水稻植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在僅一個上面所描述的氨基酸位置處具有置換。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的BEP進化枝植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在僅一個上面所描述的氨基酸位置處具有置換。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的BET亞進化枝植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在僅一個上面所描述的氨基酸位置處具有置換。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的BET作物植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在僅一個上面所描述的氨基酸位置處具有置換。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在僅一個上面所描述的氨基酸位置處具有置換。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在氨基酸位置1781 (Am)處具有置換，其中在位置1781 (Am)處的氨基酸不同于野生型的那種并且不是亮氨酸。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在氨基酸位置1999 (Am)處具有置換，其中在位置1999 (Am)處的氨基酸不同于野生型的那種并且不是半胱氨酸。··
在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2027 (Am)處具有置換，其中在位置2027 (Am)處的氨基酸不同于野生型的那種并且不是半胱氨酸。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2041 (Am)處具有置換，其中在位置2041 (Am)處的氨基酸不同于野生型的那種并且不是纈氨酸或天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明提供了包含編碼乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸的單子葉植物，所述乙酰輔酶A羧化酶多肽在氨基酸位置2096 (Am)處具有置換，其中在位置2096 (Am)處的氨基酸不同于野生型的那種并且不是丙氨酸。本發明還包括乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶所具有的氨基酸序列在超過一個氨基酸位置處不同于在相應野生型植物中發現的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列。例如，本發明的乙酰輔酶A羧化酶可以在2個、3個、4個、5個、6個或7個位置處不同于在相應野生型植物中發現的乙酰輔酶A羧化酶的氨基酸序列。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1781 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1785(Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1811(Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1824(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、亮氨酸或異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸·或丙氨酸，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2074(Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺,和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1785(Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824(Am)處的脯氨酸，在位置1864(Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081(Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處 的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785(Am)處具有甘氨酸，和在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸,和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置1864(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置
1785(Am)處具有甘氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸,和在位置2059 (Am)處具有纟顏氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785(Am)處具有甘氨酸，和在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785(Am)處具有甘氨酸，和在位置
2081(Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸,和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1785 (Am)處具有甘氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。
在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1786(Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸或缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786(Am)處具有脯氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置
1786(Am)處具有脯氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2079(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置
1786(Am)處具有脯氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786(Am)處具有脯氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中,本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1786 (Am)處具有脯氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1811 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙 酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811(Am)處具有天冬酰胺，和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2074(Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺，和在位置2095(Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置·1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1824(Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1824(Am)處具有脯氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1864 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824(Am)處的脯氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置1999(Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨·酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2059 (Am)處具有半胱氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999(Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2079(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999(Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2081 (Am) 處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2027 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075(Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1864(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2049(Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置 2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2079(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2039 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置
2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2041 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在 位置1786(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1864(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸，和在位置2095(Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2049 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位·置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸,和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049(Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置
2078(Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，和在位置 2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2059 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2059 (Am)處具有纈氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2074 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824(Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1785(Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1811(Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1824(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1864(Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2039 (Am)處具有甘氨·酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、亮氨酸或異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2059(Am)處具有纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸,和在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2081 (Am)處具有缺失。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸,和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074 (Am)處具有亮氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2074(Am)處具有亮氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2075 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置
2095(Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔 酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置1785(Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置
2096(Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2078 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078(Am)處具有甘
氨酸或蘇氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078(Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078(Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078(Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2078(Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。 在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2079 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078(Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2080 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2080 (Am)處具有谷氨酸或缺失。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2081(Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2081 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2081 (Am)處具有缺失。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的·甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824(Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置
2080(Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2088 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有 精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置1786(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2074(Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。
在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2095 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2095 (Am)處具有谷氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824(Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078(Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。
在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2096 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078(Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置1781 (Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置1785(Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置1786 (Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置ISll(Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096(Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2049(Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2074 (Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸，和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶在氨基酸位置2098 (Am)處和在一個或多個額外的氨基酸位置處不同于相應野生型乙酰輔酶A羧化酶。一般地，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸。此外，該實施方案的酶將還包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨·酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置1824 (Am)處的脯氨酸，在位置1864 (Am)處的苯丙氨酸，在位置1999 (Am)處的半胱氨酸或甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸，在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2074(Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸，在位置2078 (Am)處的甘氨酸或蘇氨酸，在位置2079 (Am)處的苯丙氨酸，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸，在位置2095 (Am)處的谷氨酸，和在位置2096 (Am)處的丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置1781(Am)處具有亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置1785 (Am)處具有甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置1786(Am)處具有脯氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置1811 (Am)處具有天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置1999 (Am)處具有半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2041 (Am)處具有異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2074(Am)處具有亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2075(Am)處具有亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098(Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸或蘇氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2088 (Am)處具有精氨酸或色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。在一個實施方案中，本發明的乙酰輔酶A羧化酶將在位置2098 (Am)處具有丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸、半胱氨酸或絲氨酸，和在位置2096 (Am)處具有丙氨酸或絲氨酸。在一個實施方案中，本發明包括在位置2075(Am)處具有異亮氨酸和在位置1999 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2075 (Am)處具有甲硫氨酸和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2075 (Am)處具有甲硫氨酸和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位 置2041 (Am)處具有纟顏氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2039(Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有半胱氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有絲氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2059 (Am)處具有纟顏氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置
2079(Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；和在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶。在優選的實施方案中，本發明包括在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2027 (Am)處具有精氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；和位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶。在更優選的實施方案中，本發明包括在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2049 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有組氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有組氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有絲氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088(Am)處具有纈氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有半胱氨酸和在位置2088 (Am)處具有色氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置2098 (Am)處具有絲氨酸和在位置2088 (Am)處具有色氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；和在位置2080 (Am)處具有缺失和在位置
2081(Am)處具有缺失的乙酰輔酶A羧化酶。在最優選的實施方案中，本發明包括在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781(Am)處具有亮氨酸和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2098 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和具有位置
2075(Am)的重復的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有異亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶；和在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶。核酸分子本發明還包括編碼上面所描述的乙酰輔酶A羧化酶的全部或部分的核酸分子。本發明的核酸分子可以包含這樣的核酸序列，其編碼包含SEQ ID NO :2和3之一或兩者的經修飾形式的氨基酸序列，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864(Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸或額外的纈氨酸；在位置2078(Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸；以及與所述編碼序列的全部或部分互補的核酸分子。在一些實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，其具有多個上面所描述的與野生型乙酰輔酶A羧化酶的差異。
在一個實施方案中，本發明包括編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰輔酶A羧化酶在下列位置中的僅一個位置處不同于相應野生型植物的乙酰輔酶A羧化酶1781 (Am)、1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、1999 (Am) ,2027 (Am)、2039(Am),2041(Am),2049(Am),2059(Am),2074(Am),2075(Am),2078(Am),2079(Am)、2080 (Am)、2081 (Am)、2088 (Am)、2095 (Am)、2096 (Am)和 2098 (Am)。在一個實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同2078 (Am) ,2088 (Am)或2075 (Am)。在優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同2039 (Am)、2059 (Am)、2080 (Am)或2095(Am)。在更優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同1785 (Am)、1786 (Am)、1811 (Am)、1824 (Am)、1864 (Am)、2041 (Am) ,2049 (Am) ,2074 (Am) ,2079 (Am) ,2081 (Am)、2096 (Am)或 2098 (Am)。在最優選的實施方案中，本發明的耐受除草劑的植物的乙酰輔酶A羧化酶將在下列位置中的僅一個位置處不同1781 (Am), 1999 (Am) ,2027 (Am) ,2041 (Am)或 2096 (Am)。
在一個實施方案中，本發明包括編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰輔酶A羧化酶具有下列置換中的僅一個置換在位置2075(Am)處的異亮氨酸,在位置2078 (Am)處的甘氨酸，或在位置2088 (Am)處的精氨酸。在優選的實施方案中，本發明包括編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰輔酶A羧化酶具有下列置換中的僅一個置換在位置2039 (Am)處的甘氨酸，在位置2059 (Am)處的纈氨酸，在位置2075 (Am)處的甲硫氨酸，位置2075 (Am)的重復(即，在2074 (Am)和2075 (Am)之間插入纈氨酸，或在位置
2075(Am)和2076 (Am)之間插入纈氨酸)，氨基酸位置2088 (Am)的缺失，在位置2080 (Am)處的谷氨酸，位置2088 (Am)的缺失，或在位置2095 (Am)處的谷氨酸。在更優選的實施方案中，本發明包括編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰輔酶A羧化酶具有下列置換中的僅一個置換在位置1785 (Am)處的甘氨酸，在位置1786 (Am)處的脯氨酸，在位置1811 (Am)處的天冬酰胺，在位置2075 (Am)處的亮氨酸，在位置2075 (Am)處的甲硫氨酸，在位置2078 (Am)處的蘇氨酸，在位置2080 (Am)處的缺失，在位置2081 (Am)處的缺失，在位置2088 (Am)處的色氨酸，在位置2096 (Am)處的絲氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸，在位置2098 (Am)處的丙氨酸，在位置2098 (Am)處的甘氨酸，在位置2098 (Am)處的組氨酸，在位置2098(Am)處的脯氨酸，或在位置2098 (Am)處的絲氨酸。在最優選的實施方案中，本發明包括編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子，所述乙酰輔酶A羧化酶具有下列置換中的僅一個置換在位置1781 (Am)處的亮氨酸，在位置1781 (Am)處的蘇氨酸，在位置1781 (Am)處的纈氨酸，在位置1781 (Am)處的丙氨酸，在位置1999 (Am)處的甘氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸，在位置2027 (Am)處的精氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，在位置2041 (Am)處的纈氨酸，在位置2096 (Am)處的丙氨酸，和在位置2096 (Am)處的絲氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置1999(Am)處的半胱氨酸或甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2027 (Am)處的半胱氨酸或精氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2041 (Am)處的天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781(Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2049 (Am)處的苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2075 (Am)處的亮氨酸或異亮氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781(Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2078 (Am)處的甘氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781(Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2088 (Am)處的精氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2096 (Am)處的丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，和在位置2098 (Am)處的丙氨酸。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781 (Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨·酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸，和在位置2041 (Am)處的天冬酰胺。在一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所述乙酰輔酶A羧化酶包含在位置1781(Am)處的亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸，在位置2027 (Am)處的半胱氨酸，在位置2041 (Am)處的天冬酰胺，和在位置2096 (Am)處的丙氨酸。在一個實施方案中，本發明包括編碼在位置2075(Am)處具有異亮氨酸和在位置1999 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2075 (Am)處具有甲硫氨酸和在位置2080 (Am)處具有谷氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置
2075(Am)處具有甲硫氨酸和在位置2095 (Am)處具有谷氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2041 (Am)處具有繳氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078(Am)處具有甘氨酸和在位置2039 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有半胱氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有絲氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2059 (Am)處具有纈氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2079 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2079 (Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；或者編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子。在優選的實施方案中，本發明包括編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置1824 (Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2027 (Am)處具有精氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；或者編碼在位置2078 (Am)處具有甘氨酸和在位置1824(Am)處具有脯氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子。在更優選的實施方案中，本發明包括編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2049 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2049 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有組氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有賴氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有丙氨酸和在位置2088 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具
有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有組氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098(Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有絲氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有蘇氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有甘氨酸和在位置2088 (Am)處具有纈氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有半胱氨酸和在位置2088 (Am)處具有色氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置2098 (Am)處具有絲氨酸和在位置2088 (Am)處具有色氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；或者編碼在位置2080 (Am)處具有缺失和在位置2081 (Am)處具有缺失的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子。在最優選的實施方案中，本發明包括編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2041 (Am)處具有天冬酰胺的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2027 (Am)處具有半胱氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和在位置2098 (Am)處具有甘氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1781 (Am)處具有亮氨酸和位置
2075(Am)的重復的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置1864 (Am)處具有苯丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2049 (Am)處具有異亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；編碼在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2075 (Am)處具有亮氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子；或者編碼在位置1999 (Am)處具有甘氨酸和在位置2098 (Am)處具有丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子。在一個實施方案中，本發明提供了水稻植物，其包含上面所描述的編碼具有一個或多個置換的乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸。在一個實施方案中，本發明提供了 BEP進化枝植物，其包含上面所描述的編碼具有一個或多個置換的乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸。在一個實施方案中，本發明提供了 BET亞進化枝植物，其包含上面所描述的編碼具有一個或多個置換的乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸。在一個實施方案中，本發明提供了 BET作物植物，其包含上面所描述的編碼具有一個或多個置換的乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸。在一個實施方案中，本發明提供了單子葉植物，其包含上面所描述的編碼具有一個或多個置換的乙酰輔酶A羧化酶多肽的核酸。本發明的核酸分子可以是源自基因組DNA或cDNA的DNA，或者RNA。本發明的核酸分子可以是天然出現的，或者可以是合成的。本發明的核酸分子可以是分離的、重組的和/或經誘變的。在一個實施方案中，本發明的核酸分子編碼其中在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸或丙氨酸的乙酰輔酶A羧化酶，或者與此類核酸分子互補。此類核酸分子包括但不限于用作用于初級RNA轉錄的模板的基因組DNA，編碼乙酰輔酶A羧化酶的質粒分子，以及編碼此類乙酰輔酶A羧化酶的mRNA。本發明的核酸分子可以包含非編碼序列，其可以被轉錄或可以不被轉錄。可以在本發明的核酸分子中包括的非編碼序列包括但不限于，5'和3' UTR、多腺苷酸化信號和控制基因表達的調節序列(例如，啟動子)。本發明的核酸分子還可以包含編碼轉運肽、蛋白酶切割位點、共價修飾位點等的序列。在一個實施方案中，除了編碼乙酰輔酶A羧化酶的序列外，本發明的核酸分子還編碼葉綠體轉運肽序列。在另一個實施方案中，本發明的核酸分子可以編碼這樣的乙酰輔酶A羧化酶，所·述乙酰輔酶A羧化酶與SEQ ID N0:2和3之一或兩者的經修飾形式具有至少50%、60%、70%,75%,80%,85%,90%,95%或更高的序列同一性，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸或異亮氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074 (Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨酸或額外的纈氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置
2080(Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸；以及與所述編碼序列的全部或部分互補的核酸分子。如本文中所使用的，“序列同一性百分比) ”被定義為在將序列進行比對和引入缺口(如有必要，以達到最大序列同一性百分比，如用設置為缺省值的搜索參數通過在http://blast. ncbi. nlm. nih. gov/Blast. cgi 處可得的BLAST程序所產生的)后，與在目標序列(或其特定部分)中的核苷酸或氨基酸相同的在候選衍生序列中的核苷酸或氨基酸的百分比。本發明還包括與編碼本發明的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子雜交的核酸分子，以及與編碼本發明的乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子的反向互補物(reverse complement)雜交的核酸分子。在一個實施方案中，本發明的核酸分子包括這樣的核酸分子，其與編碼SEQID NO 2和3之一或兩者的經修飾形式中的一個或多個的核酸分子雜交，其中所述序列經修飾，從而所編碼的蛋白質包含下列中的一個或多個在位置1781 (Am)處的氨基酸為亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸或丙氨酸；在位置1785 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置1786 (Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1811 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置1824(Am)處的氨基酸為脯氨酸；在位置1864 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置1999 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或甘氨酸；在位置2027 (Am)處的氨基酸為半胱氨酸或精氨酸；在位置2039 (Am)處的氨基酸為甘氨酸；在位置2041 (Am)處的氨基酸為天冬酰胺；在位置2049 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸；在位置2059 (Am)處的氨基酸為纈氨酸；在位置2074(Am)處的氨基酸為亮氨酸；在位置2075(Am)處的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或甲硫氨 酸或額外的纈氨酸；在位置2078 (Am)處的氨基酸為甘氨酸或蘇氨酸；在位置2079 (Am)處的氨基酸為苯丙氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2080 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2081 (Am)處的氨基酸是缺失的；在位置2088 (Am)處的氨基酸為精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或纈氨酸；在位置2095 (Am)處的氨基酸為谷氨酸；在位置2096 (Am)處的氨基酸為丙氨酸或絲氨酸；或者在位置2098 (Am)處的氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、組氨酸或絲氨酸；以及與所述編碼序列的全部或部分互補的核酸分子，或此類核酸分子的反向互補物(在嚴緊條件下)。雜交的嚴緊度可以通過在雜交和洗滌期間的溫度、離子強度、PH和變性試劑(例如，甲酰胺)的存在來控制。可以使用的嚴緊條件包括，在Current Protocols in Molecular Biology,第 I 卷，第 2. 10 章,John Wiley & Sons, Publishers (1994)和 Sambrook 等人，MolecularCloning, Cold Spring Harbor (1989)中所定義的那些,這些文獻特別地引入本文，因為它們涉及教導嚴緊條件。可以將在組合有目的基因的質粒中的任何上面所描述的突變體用于轉化。在一個實施方案中，本發明提供了表達載體，其包含編碼任何上面所描述的ACCase突變體的核酸分子。在一個實施方案中，本發明提供了上面所描述的突變型ACCase核酸和由此類突變型ACCase核酸編碼的蛋白質作為選擇標記的用途。在一個實施方案中，本發明的核酸分子包括可以用作雜交探針、測序引物和/或PCR引物的寡核苷酸。此類寡核苷酸可以例如用于確定在編碼乙酰輔酶A羧化酶的核酸分子中在特定位置處的密碼子序列，例如，通過等位基因特異性PCR。此類寡核苷酸的長度可以為大約15至大約30個核苷酸，大約20至大約30個核苷酸，或大約20-25個核苷酸。關于雙突變型ACCase基因的測試“DBLM測定法”(I)在(例如，至少12株植物，和優選地至少20株植物的)受試群體中，包含I或2個拷貝的編碼“至少雙突變型ACCase”的轉基因的ACCase基因(即，待測試的轉基因的ACCase基因的最少I個和最多2個染色體插入)的整株水稻植物，
其中所述水稻植物為TO ( “T-零”)再生體(regenerant),并且平行地，具有用作未處理的校驗(check)植物的此類植物的對照群體；(2)以200L/ha的噴灑體積向受試群體施用包含吡喃草酮(Al)和I %作物油濃縮物(Crop Oil Concentrate, C0C)的組合物，以提供等價于50g/ha的卩比喃草酮(Al)的Al施用率；(3)測定每株受試植物和校驗植物的植物毒性得分，基于傳統的植物損傷評定體系(例如，評價除草劑灼傷、葉形態學改變、萎蔫、黃化和其他形態學特征的目視證據，優選地根據典型的、至少5級的損傷評定量表)；(4)分析所收集的數據，以確定是否受試群體中至少75%的植物展示出平均植物毒性，即小于10%的相對于校驗植物而言損傷的增加；和
(5)將如此確定的正向結果鑒定為證明了所述雙突變型ACCase提供可接受的AIT。除草劑本發明提供了耐受通常抑制野生型植物生長的除草劑濃度的植物，例如水稻植物。一般地，所述植物抗干擾乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑。可以將任何抑制乙酰輔酶A羧化酶活性的除草劑與本發明的植物相結合地使用。合適的實例包括但不限于，環己烯酮類除草劑、芳氧苯氧丙酸酯類除草劑和苯基吡唑啉類除草劑。在一些控制雜草和/或使耐受除草劑的植物生長的方法中，至少一種除草劑選自烯禾定、噻草酮、吡喃草酮、吡氟氯禾靈、精吡氟氯禾靈或這些除草劑中任一種的衍生物。表I提供了環己烯酮類除草劑(DMs，也稱為環己烯肟類、環己烯酮肟類；和CHD)的列表，所述環己烯酮類除草劑干擾乙酰輔酶A羧化酶活性并且可以與本發明的耐受除草劑的植物相結合地使用。本領域技術人員將會認識到，存在有在該類別中的其他除草劑并且它們可以與本發明的耐受除草劑的植物相結合地使用。表I中還包括芳氧苯氧丙酸酯類除草劑(也稱為芳氧基苯氧基丙酸酯類；芳氧基苯氧基鏈烷酸酯類；羥苯氧基類(oxyphenoxy) ；APP ；A0PP ；APA ；APPA ;F0P，注意這些有時書寫為帶有后綴‘-oic’ )的列表，所述芳氧苯氧丙酸酯類除草劑干擾乙酰輔酶A羧化酶活性并且可以與本發明的耐受除草劑的植物相結合地使用。本領域技術人員將會認識到，存在有在該類別中的其他除草劑并且它們可以與本發明的耐受除草劑的植物相結合地使用。表I
權利要求
1.用于篩選單子葉植物質體ACCase的耐受除草劑的突變體的方法，其包括 a.提供來自單子葉植物的植物細胞或組織；和 b.在噻草酮存在下培養所述植物細胞或組織； 其中所述植物細胞或組織由于于在噻草酮存在下進行培養之前在該單子葉植物質體ACCase中不存在的突變而是耐受性的。
2.用于篩選單子葉植物質體ACCase的耐受除草劑的突變體的方法，其包括 a.提供在內源的質體ACCase活性方面缺陷的單子葉植物宿主細胞或組織，所述宿主細胞包含外源的源自單子葉植物的質體ACCase ;和 b.在噻草酮存在下培養所述宿主細胞或組織； 其中所述外源的源自單子葉植物的質體ACCase由于于在噻草酮存在下進行培養之前在該外源的單子葉植物質體ACCase中不存在的突變而對噻草酮是耐受性的。
3.權利要求2的方法，其中所述單子葉植物宿主細胞或組織由于內源的ACCase活性的失活而在內源的質體ACCase活性方面是缺陷的。
4.權利要求3的方法，其中內源的ACCase活性的失活歸因于基因敲除。
5.權利要求I至4中任一項的方法，其中耐受噻草酮的突變頻率大于O.03%。
6.權利要求I至4中任一項的方法，其還包括 a.在其他ACCase抑制劑存在下培養所述對噻草酮耐受的宿主細胞或組織；和 b.選擇對噻草酮和其他ACCase抑制劑耐受的植物細胞或組織。
7.權利要求6的方法，其中所述在其他ACCase抑制劑存在下的培養以逐步增加噻草酮濃度的方式來進行。
8.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述在噻草酮存在下的培養以逐步增加其他除草劑濃度的方式來進行。
9.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述耐受性植物細胞或組織包含僅一個于在除草劑存在下進行培養之前在該單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。
10.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述耐受性植物細胞或組織包含兩個或更多個于在除草劑存在下進行培養之前在該單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。
11.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述方法包括在膜上的細胞培養。
12.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述的細胞培養在半固體培養基上進行。
13.權利要求2至4中任一項的方法，其中所述方法還包括鑒定所述至少一個于在噻草酮存在下進行培養之前在該外源的單子葉植物質體ACCase中不存在的突變。
14.權利要求I至4中任一項的方法，其中所述單子葉植物是水稻。
15.權利要求14的方法，其中所述外源的單子葉植物質體ACCase來自水稻。
16.權利要求I或2中任一項的方法，其中所述方法包括從經歷噻草酮處理后存活的植物細胞再生出植物的步驟。
17.通過權利要求16的方法產生的植物的后代或后裔。
18.通過權利要求16的方法產生的植物的植物部分。
19.通過權利要求16的方法產生的植物的種子。
20.通過權利要求16的方法產生的植物的植物細胞。
21.處理通過權利要求16的方法產生的植物的方法，其包括使所述植物與農藝學上可接受的組合物相接觸。
22.育種方法，所述方法包括 a.用第二植物來使通過權利要求16的方法產生的植物進行繁育，以獲得后代植物；和 b.確定所述后代植物是否表達耐受除草劑的突變型ACCase； 其中所述耐受除草劑的突變型ACCase賦予所述后代植物以相比于所述第二植物而言增加的除草劑耐受性。
23.核酸分子，其中所述核酸分子編碼在權利要求I或2中任一項之中所描述的耐受除草劑的突變型ACCase。
24.權利要求22的核酸作為選擇標記的用途。
25.用于選擇經轉化的植物細胞的方法，所述方法包括 a.將權利要求23的核酸分子引入植物細胞中；和 b.使所述植物細胞與ACCase抑制劑相接觸以鑒定經轉化的植物細胞，其中所述ACCase展示出相比于相應野生型ACCase而言增加的對所述ACCase抑制劑的除草劑耐受性。
26.育種方法，所述方法包括 a.用第二植物來使包含權利要求25的細胞的植物進行繁育，以獲得后代植物；和 b.確定所述后代植物是否表達所述突變型ACCase； 其中所述突變型ACCase賦予所述后代植物以相比于所述第二植物而言增加的除草劑耐受性。
全文摘要
本發明提供了耐受除草劑的植物。本發明還提供了用于通過施用本發明的耐受除草劑的植物對其耐受的除草劑來控制雜草生長的方法。本發明的植物可以表達對乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的作用耐受的乙酰輔酶A羧化酶。
文檔編號C12N15/82GK102946714SQ201080047090
公開日2013年2月27日 申請日期2010年9月1日 優先權日2009年9月1日
發明者S·L·曼金, A·R·文克, H·洪 申請人:巴斯夫農業化學產品公司