專利名稱：一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法
技術領域：
本發明涉及牛奶制品的加工，尤其涉及一種牦牛乳水解乳蛋白的加工方法。
背景技術：
國外只有美國Gibco和Hyclone兩家公司利用牛乳生產水解乳蛋白，產品遠銷歐、 美、亞等國家。國內水解乳蛋白的生產為空白，幾乎所有科研與生產用戶都依賴進口產品， 進口產品價格昂貴，大大增加了運營成本。而且，傳統工藝水解牛乳使用強酸和強堿水解干酪素，一方面酸和堿都是化學物質，造成一定的環境污染，另一方面，強酸和強堿作用強烈，水解程度不易掌握，容易破壞氨基酸，水解率低，失敗率高。
發明內容
本發明要解決的技術問題是克服現有牦牛乳利用的缺陷，提供了一種經濟效益高、方法可操作性強的牦牛乳水解乳蛋白的加工方法。為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案 一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，包括如下步驟
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，脫脂機脫脂，收集牦牛乳；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入氯化鈣溶液，調PH5.5 6. 5，然后放置于35 45°C水浴，加入小牛凝乳酶溶液，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素烘干，粉碎；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4-8%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0 11. 0的水中，加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液PH維持在7. 5 8. 5，按E:S=1: (6 14)比例加入胰蛋白酶，水解，使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達70%。 再將溶液PH調至8. 5 9. 5，按E :S=1: (40 80)比例加入復合酶，水解；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達98%;所述復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、 胰蛋白酶以質量比1 (1 3) (0. 5 1. 5)混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液濾除變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化超濾，收集濾過液；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調節pH值為6.8 7. 2 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在110 150°C下噴霧干燥，水分小于5%，得水解乳蛋白成品。使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度大于90%，即為合格；
優選地，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比0. 0005 0. 0015%，所述胰蛋白酶的加入量標準為E :S=1:10，復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1:2:1混合。本發明水解乳蛋白的方法用時短，使用雙酶水解較酸、堿水解，反應條件溫和，水解徹底，水解率高。本發明的主要目的是充分利用當地牦牛乳資源，對現有牛乳和干酪素產品進行科技創新，產業升級，使用雙酶水解酪蛋白，經并使用生物級的小牛凝乳酶干酪素研制高附加值的水解乳蛋白和細胞用培養基產品。由生物級的凝乳酶干酪素所酶解而得的水解乳蛋白，酶解后所獲得的生物活性肽不僅附加值高，安全性好，工藝簡單，而且容易進行產業化。
具體實施例方式以下結合附圖
對本發明的優選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優選實施例僅用于說明和解釋本發明，并不用于限定本發明。實施例1
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機脫脂，轉速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.01 0. 02mol/ L的氯化鈣，調PH5. 5 6，然后放置于39 41°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 001% (即每100000ml的牛乳中加入Ig小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為200
目；
G)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按6%濃度將凝乳酶干酪素溶于ρΗΙΟ.Ο的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在7. 8 8. 0,溫度55°C，按E S=I: 10比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達70%。再將溶液pH調至9. 0 9. 5，溫度55°C，按E :S=1:60比例加入復合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達98%;復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1:2:1混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸lOmin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調節pH值為7.0 7. 2 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在120 140°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度95%。實施例2
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機脫脂，轉速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.01 0. 02mol/L的氯化鈣，調PH6. 0 6. 5，然后放置于35 40°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 0005% (即每100000ml的牛乳中加入0. 5g小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為200
目；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在7. 5 8. 0,溫度55°C，按E S=I:6比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達70%。再將溶液pH調至8. 5 9. 0，溫度55°C，按E :S=1 40比例加入復合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達96%;復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1:1:1. 5混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸lOmin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調節pH值為6.8 7. O ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在110 130°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度94%。實施例3
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機脫脂，轉速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.Ol 0. 02mol/ L的氯化鈣，調PH6. 1 6. 4，然后放置于41 45°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 0015% (即每IOOOOOml的牛乳中加入1. 5g小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為180
目；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按6%濃度將凝乳酶干酪素溶于pHll.O的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在8. 1 8. 5，溫度55°C，按E S=I: 14比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達70%。再將溶液pH調至8. 7 9. 2，溫度55°C，按E :S=1 80比例加入復合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達99%;復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1:3:0. 5混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸lOmin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調節pH值為6.9 7. 1 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在130 150°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度96%。最后應說明的是以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，脫脂機脫脂，收集牦牛乳；(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入氯化鈣溶液，調PH5.5 6. 5，然后放置于35 45°C水浴，加入小牛凝乳酶溶液，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；(3)、將(2)中凝乳酶干酪素烘干，粉碎；(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4-8%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0 11. 0 的水中，加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液PH維持在7. 5 8. 5，按E:S=1: (6 14) 比例加入胰蛋白酶，水解。
2.再將溶液pH調至8.5 9. 5，按E:S=1: (40 80)比例加入復合酶，水解；所述復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1 :(1 3) :(0. 5 1.5)混合；(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸，滅活酶；(6)、過濾將步驟(5)的料液濾除變性的酶類和未水解的蛋白；(7)、純化超濾，收集濾過液；(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調節pH值為6.8 7. 2 ；(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液噴霧干燥，使水分小于5%，得水解乳蛋白成品。
3.根據權利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比0. 0005 0. 0015%。
4.根據權利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述胰蛋白酶的加入量標準為E :S=1:10。
5.根據權利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述復合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質量比1:2:1混合。
全文摘要
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，屬于牛奶制品加工領域，牦牛乳經脫脂、制備凝乳酶干酪素、烘干粉碎、水解、滅活酶、純化、濃縮、干燥等步驟，得水解乳蛋白成品。本發明水解乳蛋白的方法用時短，使用雙酶水解較酸、堿水解，反應條件溫和，水解徹底，水解率高。
文檔編號A23J1/20GK102150741SQ20111005365
公開日2011年8月17日 申請日期2011年3月7日 優先權日2011年3月7日
發明者喬自林, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬忠仁 申請人:喬自林, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬忠仁