專利名稱：功能型飲料及制備方法
技術領域：
飲料領域，具體涉及一種功能飲料及制備方法。
背景技術：
隨著社會經濟的不斷發展，人們生活水平得到不斷提高，飲料已經成為人們飲食的重要組成部分，目前的飲料大部分含添加劑、含酸并且高糖，這些飲料口感好，但對身體也有很多負面影響。以碳酸飲料為例首先是其對骨骼的影響，碳酸飲料的成分大部分都含有磷酸，而磷酸導致骨質疏松，常喝碳酸飲料骨骼健康就會受到威脅；二是對牙齒的腐蝕； 三是使人容易疲勞，免疫力下降，飲料中添加碳酸、乳酸、檸檬酸等酸性物質較多，又由于近年來人們攝入的肉、魚、禽等動物性食物比重越來越大，許多人的血液呈酸性，如再攝入較多的酸性物質，使血液長期處于酸性狀態，不利于血液循環，人容易疲勞，免疫力下降，各種致病的微生物乘虛而入，人容易感染各種疾病；四是對消化功能的不良影響，大量的二氧化碳在抑制飲料中細菌的同時，對人體內的有益菌也會產生抑制作用，所以消化系統就會受到破壞。特別是年輕人，一下子喝得太多，釋放出的二氧化碳很容易引起腹脹，影響食欲，甚至造成腸胃功能紊亂；五有資料報道碳酸進料還會妨礙神經系統的沖動傳導，容易引起兒童多動癥。事實上目前這種含添加劑、含酸并且高糖的飲料，不僅對人們的健康有上述負面影響，高糖導致人們的血糖高也是不容忽視的，尤其是不適合老人。本發明的目的在于提供一種以天然植物為原料，能增強免疫力，緩解體力疲勞的功能型飲料及其制備方法。本發明提供的這種功能型飲料，按重量份計其原料組份是
蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=(6-12): (0. 4-1.4) (2-8) (2-8) (0. 6-1. 2) (0. 1-0. 5)。本發明飲料的藥理功效
蛹蟲草和冬蟲夏草所含化學成分相似，其活性物質主要有蛋白質、氨基酸類、糖醇類、 核苷類、生物堿類、留醇類、有機酸類以及多種微量元素。糖和SOD等多種生物活性物質的藥用價值最為顯著。蟲草酸(甘露醇)可以顯著地降低顱壓，促進機體新陳代謝，因而使腦溢血和腦血栓病癥得到緩解。蟲草素是一種具有抗菌活性的核苷類物質，對核多聚腺苷酸聚合酶有很強的抑制作用。在DNA轉錄mRNA過程中使mRNA成熟障礙，抑制癌細胞的生長。 并有降血糖的作用。蟲草多糖是一種高度分枝的半乳甘露聚糖，它能促進淋巴細胞轉化，提高血清IgG的抗體含量和機體的免疫功能，增強機體自身抗癌抑癌的能力。SOD (超氧化物歧化酶)可以消除機體內超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。此外，蛹蟲草還含有豐富的硒(Se)，這種微量元素已被大家公認是人體必需的微量元素，是谷胱甘肽過氧化酶的活性中心，以硒半胱氨酸的形式連接在酶蛋白的肽鏈上，保護細胞膜的穩定性的正常的通透性，并刺激免疫球蛋白和抗體的產生，增強機體免疫和抗氧化能力。同時，大量的科學實踐證明硒可以明顯地抑制癌細胞的生長。蟲草素(3'-脫氧腺苷)抗病毒、抗菌、明顯抑制腫瘤生長、干擾人體RNA及DNA合成。蟲草酸(D-甘露醇)預防治療腦血栓、腦溢血、腎功能衰竭，利尿。腺苷抗病毒、抗菌，預防治療腦血栓、腦溢血，抑制血小板積聚防止血栓形成，消除面斑，抗衰防皺。蟲草多糖提高免疫力，延緩衰老，扶正固本，保護心臟、肝臟， 抗痙。麥角留醇抗癌、防衰、減毒。超氧化物歧化酶(SOD):抑制或消除催人衰老的超氧自由基形成及抗癌、防衰、減毒。硒(Se)為國際醫學界公認的抗癌元素，也是重要的抗氧化劑，能增強人體免疫力。金針菇含有的人體必需氨基酸成分較全，其中精氨酸和賴氨酸含量尤為豐富，對增強智力尤其是對兒童的智力發育有良好的作用。硒能抗衰老、增強免疫力，預防心腦血管疾病，金針菇多糖具有抗衰老、抗肝炎、抗癌、提高免疫力等功效，樸菇素有顯著的降低膽固醇和抗癌作用。香菇中含有高蛋白、低脂肪、多糖、多種氨基酸和多種維生素。其中香菇多糖，香菇多糖可提高小鼠腹腔巨噬功能，還可促進T淋巴細胞的產生。延緩衰老，香菇的水提物對過氧化氫自由基有清除作用。防癌抗癌，降血壓、降血脂、降膽固醇，香菇中的嘌呤和膽堿，可預防和治療肝硬化、血管硬化；酪氨酸氧化酶可降低血壓；香蕈太生有較好的降血脂作用； 連續服用對治療動脈硬化、糖尿病、高血壓病有顯著效果。本發明功能飲料以上述天然植物作為原料，經檢測其中的總多糖，主要為真菌多糖，具有增強免疫力、抗腫瘤、強心、降壓、改善內臟循環、抑制血小板聚集、鎮咳、祛痰、平喘、保肝護肝、降血糖、抗炎、抗損傷、抗衰老、抗突變、抗輻射、抗病毒、鎮靜、鎮痛等作用。本發明功能飲料中含有的蟲草素是一種具有抗菌活性的核苷類物質，對核多聚腺苷酸聚合酶有很強的抑制作用。在DNA轉錄mRNA過程中使mRNA成熟障礙，抑制癌細胞的生長。蟲草素具有抗病毒、抗菌、明顯抑制腫瘤生長、干擾人體RNA及DNA合成。并有降血糖的作用。 經動物實驗證明a、經口給予小鼠30天的喂養，分5. 0ml/kg · bwUO. 0ml/kg · bw、20. Oml/ kg-bw三個實驗組與對照組比較能提高小鼠的半數溶血值、抗體生成細胞數、單核-巨噬細胞碳廓清、遲發型變態反應的能力。對小鼠體重增長、腺體體重比值、ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化能力、小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力、NK細胞的活性均無明顯影響。結果表明有增強免疫力的保健功能；b、經口給予小鼠30天的喂養，分5. Oml/kg · bwUO. Oml/ kg · bw、20. Oml/kg · bw 三個實驗組與對照組比較，10. Oml/kg · bw、20. Oml/kg · bw 劑量組能明顯延長小鼠的負重游泳時間(P < 0. 05) ；10. Oml/kg · bw劑量組能顯著降低小鼠運動后的血清尿素水平、降低運動后小鼠血乳酸曲線下面積(P < 0. 05)。結果表明有緩解體力疲勞的保健功能；c、表觀吸收率大大高于對照組，說明吸收效果好。因此本發明功能型飲料具有緩解體力疲勞、增強人體免疫力之功效，并且口感好、 能消暑解渴是一種老少皆宜的飲料。本發明還提供了上述功能飲料的制備方法，包括以下步驟
(1).按照所述原料重量份比，蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸= (6-12) (0.4-1.4): (2-8) (2-8) (0.6-1.2): (0. 1-0. 5)，對各原料稱重； (2).對步驟(1)稱量好的香菇、金針菇、蛹蟲草、甘草、山楂洗凈，并破碎；
(3).將步驟(2)破碎好的各原料放入提取罐中，加水浸泡，然后煎提，過濾備用；
(4).將甜菊糖和檸檬酸與步驟(3)的濾液混勻；
(5).將步驟(4)混勻后的濾液用高速管式離心機離心；
(6).將離心后的上清液用濾芯過濾，然后檢測、裝罐、滅菌。
本發明方法能保證本功能飲料的有效成分和功效，使人們長期飲用本飲料能達到緩解疲勞，增強免疫力的預期效果。
具體實施例方式本發明功能型飲料在原料組分為如下范圍內的任意配比均可制得
蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=(6-12): (0. 4-1.4) (2-8) (2-8) (0. 6-1. 2) (0. 1-0. 5)。以下給出了六個實施方式，用于詳細說明本發明功能飲料及其制備方法。實施方式一
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=6:1. 4:8: 6:1:0. 2的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在100°C下，煎提1. 5小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45μπι)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. 2mg/mL ；蟲草素為1. 6mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。實施方式二
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=6:0. 4:8: 6:1:0. 2的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在90°C下，煎提2小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌 15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45μπι)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. 25mg/mL ；蟲草素為0. 6mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。實施方式三
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=6:0. 4:8: 2:0.6:0. 1的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm 每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在110°C下，煎提1. 5小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌 15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45 μ m)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. lmg/mL ；蟲草素為1. 8mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。實施方式四
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=10:1:6:2:0. 6:0. 1的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在100°C下，煎提1. 0小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌 15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45μπι)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. 2mg/mL ；蟲草素為1. 6mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。實施方式五
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=12:0. 4:2:8:1. 2:0. 5的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm 每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在100°C下，煎提1. 0小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌 15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45μπι)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. lmg/mL ；蟲草素為1. 8mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。
實施方式六
(1).原料準備精選蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，切掉金針菇的培養基部分。按照蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=12:1. 4:8:6:1:0. 2的配比，稱量蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂，并洗凈；將香菇破碎成l_2cm每塊備用，金針菇切成2cm每段備用，蛹蟲草切成2cm每段備用，甘草切成2cm每段備用，山楂切成片狀備用；
(2).將步驟(1)中切好備用的蛹蟲草、香菇、金針菇、甘草、山楂放入提取罐中，加原料 8倍水浸泡1小時，然后在100°C下，煎提1. 0小時，過濾備用；
(3).將甜菊糖和檸檬酸先用步驟(2)獲得的濾液5升溶解，然后加入所述濾液中攪拌 15min，充分混勻；
(4).將步驟(3)混勻的濾液用高速管式離心機離心(離心速度為16000r/min)；
(5).將步驟(4)離心后的上清液濾芯(孔徑0.45μπι)過濾。濾液按中間品質量標準進行檢測，檢測其真菌多糖為0. 2mg/mL ；蟲草素為1. 6mg/mL ；
(6).將檢測后的濾液分裝到經超聲波洗瓶機洗凈、170°C烘干、滅菌的鋁制易拉罐中； (7).高壓蒸汽滅菌(0. 14Mpa, 121°C，30min)，即得所需產品。以下是從幾個方面對本發明功能飲料的增強免疫力的效果評價的實驗實驗一
1材料和方法
1. 1樣品由湖南森康生物技術有限公司提供，為棕色飲料，人口服推薦量為60ml/人/天。1. 2實驗動物與分組湖南師大生命科學院實驗動物養殖場提供的清潔級昆明種雄性小鼠120只，體重為18g 22g，實驗動物生產許可證號為SCXK (湘》003_0003。每40 只分為1組，共三組。免疫I組，進行碳廓清實驗；免疫II組，進行臟體比值測定、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、遲發型變態反應實驗、半數溶血值(HC5tl)的測定和抗體生成細胞數的測定；免疫III組，進行ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗、NK細胞的活性測定。1. 3實驗環境條件溫度23°C 25°C，濕度54% 68%，實驗動物使用許可證號為 SYXK (湘)2003-0002。1. 4劑量選擇及樣品處理據人體口服推薦量，相當于每日1. 0ml/kg · bw，設森康牌本發明功能型飲料低、中、高劑量分別為5. Oml/kg · bwUO. Oml/kg · bw、20. Oml/kg · bw (分別相當于人體推薦劑量的5、10、20倍)。取樣品加蒸餾水配至所需濃度，對照組予以等體積的蒸餾水，分別給予受試動物灌胃，每天灌胃一次，灌胃體積為0. 2ml/10g *bw，連續30天。1. 5主要儀器與試劑動物臺秤、分析天平、潔凈工作臺、二氧化碳培養箱、離心機、722分光光度計、恒溫水浴箱、液體閃爍儀、酶標儀、顯微鏡等。無菌手術器械、游標卡尺、微量注射器、細胞計數器、M孔和96孔平底細胞培養板，96孔U型細胞培養板、玻璃平皿、紗布、試管、玻片架、200目篩網、計時器、血色素吸管、 載玻片等。綿羊紅細胞(SRBC)、生理鹽水、Hank's液(pH7. 2-7. 4)、RPMI1640培養液、小牛血清、青鏈霉素、ConA, 1%冰醋酸，lmol/L的HCL溶液酸性異丙醇(96mL異丙醇加lmol/L的 HCL溶液細1)、補體(豚鼠血清)、SA緩沖液、其瓊脂糖、都氏試劑、YAC-I細胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶1、0. 2mol/L的1Tris-HCL緩沖液、1%的NP40、 印度墨汁、0. 1%的碳酸鈉、雞紅細胞、甲醇、Giemsa染液等。1. 6實驗方法
1.6. 1臟器/體重比值測定稱重后處死小鼠，取出脾臟和胸腺，在電子分析天平上稱重，計算臟/體比值。1.6.2遲發型變態反應(DTH)(足跖增厚法)
小鼠腹腔注射洲(v/v) SRBC (O.aiil/每鼠)致敏后4天，測量左后足跖厚度，然后在測量部位皮下注射20% (v/v)SRBC (20ul/每鼠)，于注射后24h測量左后足跖部厚度，同一部位測量三次，取平均值。以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度。1. 6. 3 ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗(MTT法)
無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’ s液的小平皿中，制成細胞懸液，經200目篩網過濾。用Hank’ s液洗3次，每次離心10分鐘(lOOOrpm)。然后將細胞懸浮于2mL完全培養液中，計數活細胞數，用RPMI1640培養液調整細胞濃度為5 X IO6個/mL。再將細胞懸液分兩孔加入M孔培養板中，每孔lmL，在其中一孔加50μ ΧοηΑ液(相當于5Pg/mL)，另一孔作為對照，置5% 二氧化碳，37°C培養72h。培養結束前4h，每孔輕輕吸去上清液0. 7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培養液，同時加入MTT (5mg/mL)5(^L/孔，繼續培養4h。培養結束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解。然后將此液體用酶標儀測定，波長570nm。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表不。1. 6. 4抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法)
取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心(2000r/min)10min，將壓積SRBC用生理鹽水配成洲(￥八)的細胞懸液，每鼠腹腔注射O.aiil。將免疫后4天的小鼠處死，取脾，輕輕撕碎， 用Hank’ s液制成細胞懸液，200目篩網過濾，洗滌、離心2次，最后將細胞懸浮在5ml Hank's 液中。將表層培養基加熱溶解后與等量的PH7. 4、2倍濃度的Hank’ s液混合，分裝小試管， 每管0. 5ml，再向管內加入用SA液配置的10%SRBC50ul (v/v)、20ul脾細胞懸液，迅速混勻后傾倒于已刷薄層瓊脂糖的玻片上，待瓊脂糖凝固后將玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養箱中溫育1.5h，然后用SA液稀釋的補體(1:10)加入到玻片凹槽內，繼續溫育 1. 后計數溶血空斑數。1.6.5半數溶血值(HC5tl)的測定
取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經腹腔注射m (ν/ν,用生理鹽水配制)壓積 RBC0. 2mL進行免疫。5天后，摘除眼球取血于離心管內，放置約lh，將凝固血與管壁剝離，使血清充分析出，2000rpm離心lOmin，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為200倍，取ImL 置試管內，依次加入10% (v/v，用SA緩沖液配制)壓積SRBCO. 5mL,補體ImL (用SA緩沖液按1:10稀釋)。另設不加血清的對照管(以SA緩沖液代替)。置37°C恒溫水浴中保溫30min 后，冰浴終止反應。2000rpm離心lOmin，取上清lmL，加都氏試劑3mL。同時取10%(v/v，用 SA緩沖液配制)壓積SRBCO. 25mL，加都氏試劑至4mL于另一試管中，充分混勻，放置IOmin 后，與MOnm處以對照管作空白，分別測定各管光密度值。溶血素的量以半數溶血值(HC5tl) 表示，按下式計算
半數溶血值(HC5tl)=樣品光密度值/SRBC半數溶血時的光密度值X稀釋倍數1.6.6小鼠碳廓清實驗
小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0. ImL,墨汁注入后立即計時，于注入墨汁后第2、10min，分別從內眥靜脈叢取血20ul，加入到^iil Na2CO3溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白對照，用722型分光光度計在600nm波長處比色側光密度值 (OD)0將小鼠處死，取肝、脾，稱重，計算吞噬指數a。1.6.7小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(半體內法)
小鼠腹腔注射20%(￥八，用生理鹽水配制)壓積的雞紅細胞(2000印111，IOmin)懸液lmL， 間隔30min，頸椎脫臼處死，取腹腔巨噬細胞洗液lmL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以甲醇丙酮(1:1)固定，4% (v/v) Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計數，每片計數100個巨噬細胞，按下式計算吞噬率和吞噬指數
吞噬率％ =吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/計數的巨噬細胞數X 100 吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/計數的巨噬細胞數 1. 6. 8 NK細胞活性的測定(同位素3H-TdR測定法)
取傳代后24h生長良好的YAC-I細胞(存活率> 95%)按IX 106mL YAC-I細胞懸液加 3H-TdRlOP Ci進行標記，于37°C，5% 二氧化碳培養箱中培養2h，每30min振蕩1次，標記后的細胞用培養液洗滌3次，重懸于培養液中，使細胞濃度為IXlO5個/mL。受試小鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，制成脾細胞懸液，用Hank’ s液洗3次，每次IOOOrpm離心lOmin，再用 2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養液懸浮，用臺酚蘭染色計數(活細胞數應在95%以上)，調整細胞濃度為IX IO7個/mL。在96孔板中每孔加ΙΟΟμ L標記的靶細胞，試驗孔加 100μ L效應細胞，空白對照孔加100μ L培養液，最大釋放孔加100μ LTriton X-IOO0每個樣品設3個復孔，置5% 二氧化碳，37°C培養4h。用多頭細胞取集器取集于玻璃纖維濾紙上， 用液閃儀測定每分鐘脈沖數(cpm)。NK細胞活性=(1-實驗孔cpm/ (空白對照孔cpm-最大釋放孔cpm)) X 100%
1.7實驗數據統計用Excel、Spss軟件進行統計分析。2 結果
2.1本發明功能型飲料對小鼠體重的影響，見表1-表4 _表1各組小鼠的初始體重(χ 士幻
權利要求
1.一種功能型飲料，按重量份計其原料組份是蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=(6-12): (0. 4-1.4) (2-8) (2-8) (0. 6-1. 2) (0. 1-0. 5)。
2.根據權利要求1所述的功能飲料，其特征在于按重量份計其原料組份是 蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=10:1:6:6:1:0. 2。
3.—種權利要求1所述功能型飲料的制備方法，包括以下步驟(1).按照所述原料重量份比，蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸= (6-12) (0.4-1.4): (2-8) (2-8) (0.6-1.2): (0. 1-0. 5)，對各原料稱重；(2).對步驟(1)稱量好的香菇、金針菇、蛹蟲草、甘草、山楂洗凈，并破碎；(3).將步驟(2)破碎好的各原料放入提取罐中，加水浸泡，然后煎提，過濾備用；(4).將甜菊糖和檸檬酸與步驟(3)的濾液攪拌混勻；(5).將步驟(4)混勻后的濾液用高速管式離心機離心；(6).將離心后的上清液用濾芯過濾，然后檢測、裝罐、滅菌。
4.根據權利要求3所述功能型飲料的制備方法，其特征在于步驟(3)加原料8倍水浸泡1小時，然后在90-110°C下，煎提1-2小時，過濾備用。
5.根據權利要求3所述功能型飲料的制備方法，其特征在于步驟(4)的攪拌時間為 15min，步驟(5)的離心機得離心速度為16000r/min，步驟(6)采用的濾芯孔徑0. 45 μ m。
全文摘要
本發明公開了一種功能型飲料及其制備方法，所述功能型飲料按重量份計其原料組份是蛹蟲草香菇金針菇甘草甜菊糖山楂檸檬酸=(6-12):(0.4-1.4):(2-8):(2-8):(0.6-1.2):(0.1-0.5)。制備方法主要是煎提、過濾、分裝、滅菌。本發明功能型飲料具有緩解體力疲勞、增強人體免疫力之功效，并且口感好、能消暑解渴是一種老少皆宜的飲料。
文檔編號A23L2/38GK102318865SQ20111022202
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月4日 優先權日2011年8月4日
發明者劉安球, 張國洪, 張志光, 張景元, 李政委, 楊大偉, 謝偉岸, 鐘麗萍, 陳作紅, 黃紹均 申請人:湖南森康生物技術有限公司