本發明屬于醫藥保健領域，具體涉及一種兒童功能飲料。
背景技術：
目前，市場上銷售的兒童飲料大多數不具備保健功能，有些碳酸飲料長期飲用會 對兒童的身體健康造成許多負面的影響。 而如鈣奶類飲品，也主要以補充活性鈣和維生素 A、 C、 D 等為主要目的，其作用效果單一，吸收效果緩慢，在某種程度上還不屬真正意義的保 健功能性飲料。
技術實現要素：
有鑒于此，本發明提供一種兒童功能飲料，本發明的功能飲料營養豐富，口感好，富含人體所需的免疫調節因子，可促進機體生長發育，調節胃腸功能，提高機體免疫力，提神醒腦，增強抗疲勞能力，對心、腦血管及頸椎等疾病具有明顯保健效果。 本發明適合廣大人群特別是少年兒童飲用，對少年兒童生長發育、補充體能起到顯著的促進作用。
本發明的技術方案為：一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 40-50，氯化鉀1-3，木糖醇5-8，檸檬酸鈉2-4，白砂糖10-30，活性組分B 11-15，活性組分 C 9-13，磷酸氫鈉2-6，哈密瓜香精0.3-0.5，葡聚糖3-5，水105-135。
進一步的，所述的兒童，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 43，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 13，活性組分 C 11，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。
進一步的，所述活性組分A為鳳尾魚酶解產物，所述鳳尾魚酶解產物的制備方法為：S1.取鳳尾魚魚糜，使料水比為1:2-1:8(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0-3.5以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為1200-1500U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、100-130 r/min振蕩酶解1.5-2.5 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.0-9.0，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為4500-6000 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為4:1-6:1，所述料水比1:3-1:6，酶解時間為3-4.5 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到鳳尾魚酶解產物。
更進一步的，所述活性組分A為鳳尾魚酶解產物，所述鳳尾魚酶解產物的制備方法為：S1.取鳳尾魚魚糜，使料水比為1:3(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.5以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為1300 U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、110 r/min振蕩酶解2 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.5，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為5200 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為5:1，所述料水比1:4.5，酶解時間為3.5 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到鳳尾魚酶解產物。
進一步的，所述活性組分B為泥蚶酶解產物，所述泥蚶酶解產物的制備方法為：S1.取泥蚶全臟器攪碎成肉糜，使料水比為1:1-1:2(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為800-1000U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、75-105 r/min振蕩酶解1-1.5 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.0-9.0，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為2500-3500 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為6:1-8:1，所述料水比1:2-1:4，酶解時間為2.5-3.5 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到泥蚶酶解產物。
更進一步的，所述活性組分B為泥蚶酶解產物，所述泥蚶酶解產物的制備方法為：S1.取泥蚶全臟器攪碎成肉糜，使料水比為1:1.5(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為880U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、85 r/min振蕩酶解1.3 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.2，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為2900 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為7:1，所述料水比1:2.5，酶解時間為2.8 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到泥蚶酶解產物。
進一步的，所述活性組分C為車前草菌體粗提物，所述車前草菌體粗提物的制備方法為：取新鮮植物的根、莖、葉分別洗凈至沒有明顯的雜質，表面消毒處理后，接種至 PDA（分離內生真菌）和高氏一號培養基（分離內生放線菌）上培養 5-7 d，然后分離獲取菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有 100 mL 發酵培養基的錐形瓶中，置 30℃，150 r/min 搖床振蕩培養3 d；發酵培養物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取 3 次，合并有機相，45 ℃ 減壓濃縮蒸干，即為混合菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量 95%乙醇冷凝回流 3 次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物。
上述技術方案中，所述的運動功能飲料的制備方法為 ：按配比，將各組分混合，攪拌分散均勻后即可得成品。
本發明原材料易于采購，制作簡單 ；并富含豐富的蛋白質、 維生素與礦物質 ；便于攜帶，方便飲用，快速消除饑餓感，口感柔和，味道獨特 ；尤其適合兒童飲用。本發明經驗證，長久飲用可達到增強免疫力和美白的效果，基于本發明中主要活性組分采用模擬人體胃腸消化的方式制得，配合從植物體內提取出的活性菌體成分，活性菌體成分進入腸道內，一方面可以在腸道內定殖，維持腸道微生物菌群的平衡；另一方面是活性菌體成分與鳳尾魚酶解產物以及泥蚶酶解產物共同作用于宿主的免疫系統，誘發腸道免疫，并刺激胸腺，脾臟等免疫器官，促進巨噬細胞活性，通過增強B、T淋巴細胞對抗原刺激的反應性，發揮特異性免疫活性，從而增強機體的免疫功能，易于被人體吸收，條件98%低齡人群長期服用無不適癥狀。
具體實施方式
以下結合具體實施例來對本發明作進一步的描述。
實施例1
一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 43，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 13，活性組分 C 11，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。
進一步的，所述活性組分A為鳳尾魚酶解產物，所述鳳尾魚酶解產物的制備方法為：S1.取鳳尾魚魚糜，使料水比為1:3(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.5以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為1300 U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、110 r/min振蕩酶解2 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.5，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為5200 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為5:1，所述料水比1:4.5，酶解時間為3.5 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到鳳尾魚酶解產物。
進一步的，所述活性組分B為泥蚶酶解產物，所述泥蚶酶解產物的制備方法為：S1.取泥蚶全臟器攪碎成肉糜，使料水比為1:1.5(w/v)，用2 mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現胃部酸堿環境，以酶與底物濃度比為880U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37 ℃、85 r/min振蕩酶解1.3 h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2 mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.2，保持37 ℃酶解溫度，復合酶添加量為2900 U/g， 所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為7:1，所述料水比1:2.5，酶解時間為2.8 h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到泥蚶酶解產物。
進一步的，所述活性組分C為車前草菌體粗提物，所述車前草菌體粗提物的制備方法為：取新鮮植物的根、莖、葉分別洗凈至沒有明顯的雜質，表面消毒處理后，接種至 PDA（分離內生真菌）和高氏一號培養基（分離內生放線菌）上培養 5-7 d，然后分離獲取菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有 100 mL 發酵培養基的錐形瓶中，置 30℃，150 r/min 搖床振蕩培養3 d；發酵培養物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取 3 次，合并有機相，45 ℃ 減壓濃縮蒸干，即為混合菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量 95%乙醇冷凝回流 3 次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物。
實施例2
本實施例提供一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 40，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 11，活性組分 C 9，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。
實施例3
本實施例提供一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 50，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 15，活性組分 C 13，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。
實施例4
本實施例提供一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 50，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 15，活性組分 C 9，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。
本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。
實施例5
本實施例提供一種兒童功能飲料，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A 40，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，白砂糖14，活性組分B 11，活性組分 C 13，磷酸氫鈉4，哈密瓜香精0.4，葡聚糖4，水 118。
本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。
效果實施例
1.增強免疫力效果實驗
將通過實施例1制得的功能飲料濃縮脫水干燥，制備成粉末狀，作為測試樣品。
對照品：天美健牌大豆肽蛋白粉；來源：北京同仁堂健康藥業股份有限公司；成人臨床推薦用量：0.167g.kg-1.d-1。
受試動物品系和級別：BALB/c小鼠，Hartley豚鼠，SPF級；數量及性別：BALB/c 小鼠60只，雄性； Hartley豚鼠6只，均可。購入體重BALB/c小鼠17-19g，Hartley豚鼠250-350g。由廣東省醫學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2013-0002。實驗期間，小鼠自由進食飲水，每天觀察小鼠狀態。
根據樣品的基本情況進行劑量設計，樣品低、中、高按成人臨床用量的5倍、10倍、20倍設計劑量，分別為0.15g.kg-1.d-1、 0.30g.kg-1.d-1 、0.60g.kg-1.d-1；陽性對照組劑量按成人推薦劑量的5倍設計，為0.835g.kg-1.d-1。將60只雄性小鼠隨機各分為5組（陰性對照組、陽性對照組、受試樣品低、中、高劑量組），每組12只，其中2只作為備用動物。各組小鼠每天按0.1mL/10g體重灌胃相應樣品液，陰性對照組給予等量純凈水，每天1次，連續給藥30天。試驗開始、試驗結束均稱量體重1次，試驗期間每周稱量體重1次。
小鼠淋巴細胞轉化實驗
末次給藥1h，無菌取脾置于盛有RPMI-1640培養液的培養皿中，并放置200目篩網，用注射器活塞在其上方研磨制成脾細胞懸液，分裝脾細胞懸液至加有淋巴細胞分離液的離心管中。400g，20℃下離心20min，離心完畢，取出離心管中淋巴細胞層離心管，加入RPMI-1640培養液洗滌數次，250g，4℃下離心10min。洗滌完畢后，棄去上清液，加入完全培養基，吹打均勻，用臺盼蘭染色計數保證95%以上活細胞率，將細胞濃度調整為3×106個/ml。
將每份脾細胞懸液分兩孔加入48孔培養板中，每孔0.5ml，一孔加25 ul ConA液（相當于5ug/ml），另一孔作為對照，置于5%CO2,37℃CO2孵箱中培養48h后每孔輕輕吸去上清液0.3 ml，加入0.3 mlRPMI-1640培養液，同時加入CCK 8 試劑50 ul/孔，繼續培養2 h。結束培養后，吹打均勻，然后分裝到96孔培養板中，每孔作3個平行實驗，用酶標儀測450 nm波長下的光密度值。淋巴細胞的增殖能力由加ConA孔的光密度值與不加ConA 孔的光密度值的差值表示。
小鼠體液免疫功能（血清溶血素）影響
給藥25天，用生理鹽水洗滌(2000r/min，10min)已脫纖維的羊血3次，在壓積SRBC中加入生理鹽水配成2%（v/v）的細胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2ml，第30天時，給藥1h后，稱重，所有小鼠摘除眼球取血0.8ml于離心管，靜置1h，離心2000r/min，10min，收集血清。頸椎脫臼處死小鼠。用SA緩沖液稀釋300倍的血清取1ml置試管內，再一次加入10%（v/v）SRBC0.5ml、用SA緩沖液稀釋9倍的補體1ml，設置對照管（用SA代替血清），37℃恒溫水浴20min，再冰浴，然后離心2000r/min，10min。取上清液1ml于新試管，加3.75ml都氏試劑、0.25ml10%（v/v）SRBC，充分混勻，靜置10min，以對照管為空白，540nm處分別測定各管光密度值，溶血素的量以半數溶血值（HC50）表示。
小鼠體液免疫（抗體生成細胞）的影響
給藥25天，用生理鹽水洗滌已脫纖維的羊血3次，每次離心2000r/min，10min，在壓積SRBC中加入生理鹽水配成2%（v/v）的細胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2ml，第30天時，給藥1h后，稱重。頸椎脫臼處死小鼠后，取出脾臟，置于放有Hank’s液平皿中，經過200目篩網過濾后，再用Hank’s液洗滌兩次，加入到5mL RPMI-1640培養液中將細胞懸浮，計數細胞，且調整細胞濃度為5×106個/mL。
將1g瓊脂糖加雙蒸水至100mL形成的表層培養基加熱溶解后，40-45℃水浴保溫.與PH7.2-7.4、2倍Hank’s液等體積混合，搖勻，每管0.5mL分裝不同的試管，繼續向每管加入用SA緩沖液配制成的10％SRBC(v/v） 50ul和脾細胞懸液 20ul，快速混勻，傾倒于涂有一層薄薄的瓊脂糖的薄片上，做平行片，等到瓊脂糖凝固后，將薄片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養箱培養1-1.5h后，將用SA緩沖液稀釋了9倍的補體加到玻片架的凹槽內，繼續培養1-1.5h，然后計數溶血空斑數。
小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能及免疫器官影響的測定
末次給藥1h，按體重從尾靜脈注射用生理鹽水1:3稀釋的印度墨汁（10mL/kg），待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2、10min，分別從眼眶靜脈叢采血20μL，并立即加到2mL 0.1％Na2CO3溶液中，以Na2CO3溶液作空白對照，用分光光度計在600nm波長處測定光密度值（OD），計算吞噬指數a。
小鼠采血后脫臼處死，解剖取肝臟、脾臟和胸腺，濾紙吸干臟器周圍血液后，精密稱重，計算臟器/體重比值。
NK細胞活性測定
末次給藥1h，無菌取脾，無菌取脾置于盛有RPMI-1640培養液的培養皿中，并放置200目篩網，用注射器活塞在其上方研磨制成脾細胞懸液，分裝脾細胞懸液至加有淋巴細胞分離液的離心管中。400g，20℃下離心20min，離心完畢，取出離心管中淋巴細胞層離心管，加入RPMI-1640培養液洗滌數次，250g，4℃下離心10min。洗滌完畢后，棄去上清液，加入完全培養基，吹打均勻，用臺盼蘭染色計數活細胞數（應在95%以上），最后用RPMI 1640完全培養液調整細胞濃度為2×107個/mL。
按比例將效應細胞和靶細胞（50:1）各100ul加入U型96孔板；靶細胞和培養液各100ul加入靶細胞自然釋放孔；靶細胞和0.25%Triton各100ul加入靶細胞最大釋放孔。每組均設3個平行孔，37℃,5%CO2培養箱培養4h后，離心1500rpm,5min。每孔吸取上清液100ul于平底96孔板，加入LDH基質液100ul/孔，反應3-10min，加入1mol/ml HCL 30ul/孔，酶標490nm測定光密度值。
所有數據采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，測試結果如下表所示。
表1實施例樣品與對照組對小鼠淋巴細胞轉化的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01
表2 實施例樣品與對照組對小鼠抗體水平（血清溶血素）的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01表3實施例樣品與對照組對小鼠溶血空斑數的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01 。
表4 實施例樣品與對照組對小鼠吞噬指數的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01 。
表6 實施例樣品與對照組對小鼠NK細胞活性的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01 。
同樣，對其余實施例和本發明的實施例其余配比進行相同實驗，結果與實施例1的效果類似。
2.抗疲勞效果驗證
將通過實施例1制得的功能飲料濃縮脫水干燥，制備成粉末狀，作為測試樣品。將生理鹽水為空白對照組，以支鏈氨基酸的水溶液為陰性對照組。
實驗對象：選用SD大鼠，由北京實驗動物中心提供，雌雄各 半，180 只，220±18g，約 3 月齡，在實驗室飼養一個月后，經過初步游泳訓練隨機分為空白對照組、陰性對照組和樣品組。
試驗方法
（1) 力竭性試驗 ： 取樣品粉末，用蒸餾水溶解，樣品的濃度分別為分別為0.15g.kg-1.d-1、 0.30g.kg-1.d-1 、0.60g.kg-1.d-1 ，樣品組每天按0.1mL/10g體重灌胃；陰性對照組為支鏈氨基酸 （亮氨酸∶異亮氨酸∶纈氨酸按質量比2：1:1混合后獲得）的水溶液，配成濃0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1mL/10g體重灌胃； 各組末次灌喂 30min 后，進行大鼠負重 （5％體重）游泳試驗至力竭 （力竭標準 ：負重大鼠游泳動作明顯失調，不能再堅持或沉入水底超過 3s 不能回水面為力竭 )。
（2) 血清尿素氮試驗 ：取樣品粉末，用蒸餾水溶解，樣品的濃度分別為分別為0.15g.kg-1.d-1、 0.30g.kg-1.d-1 、0.60g.kg-1.d-1 ，樣品組每天按0.1mL/10g體重灌胃；陰性對照組為支鏈氨基酸 （亮氨酸∶異亮氨酸∶纈氨酸按質量比2：1:1混合后獲得）的水溶液，配成濃0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1mL/10g體重灌胃； 各組連續灌喂 30d 后，進行大鼠游泳試驗（無負重），90min后，拔眼球采血，用尿素氮測定試劑盒（二乙酰肼一肟法，北京化工廠生產）檢測血清尿素氮。
試驗結果
實施例樣品與對照組對大鼠負重游泳時間的影響見表7。
表 7實施例樣品與對照組對大鼠負重游泳時間的影響對比
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01 。
表 8 實施例樣品與對照組對大鼠運動后血清尿素氮含量的影響
注：采用方差分析方法進行統計分析，與陰性對照組比較，”a”: p<0.05;與陽性對照組比較, “b”: p<0.01 。
對于本領域技術人員而言，顯然本發明不限于上述示范性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發明內。
此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。對于本發明中所有未詳盡描述的技術細節，均可通過本領域任一現有技術實現。