專利名稱：薩能羊早期胚胎性別鑒定方法
技術領域：
本發明提供一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，屬于胚胎工程技術領域。
背景技術：
人們對哺乳動物性別的決定及控制進行了長期的研究和探索，并由理論逐步走向了實踐應用。性別鑒定對于哺乳動物發育生物學，生殖生物學，進化生物學，遺傳學和瀕危物種的保存是相當重要的。目前研究顯示哺乳動物性別控制主要體現在對牛的性別鑒定上，在羊上報道的相對較少，而且是以體內生產性控胚胎為主，體內生產性控胚胎主要是通過應用流式細胞儀對精子進行分離和分子生物學方法-PCR擴增法來生產性控胚胎。從目前X、Y精子分離技術的發展來看，雖然使用流式細胞分類儀已成功分離了 X、Y精子，但其成本高，分離效率低，一時還很難在生產中應用推廣。但PCR法還存在著準確性不高、方法不夠成熟，取樣過程造成胚胎損傷，使妊娠率和產羔率下降等問題，因此進行早期性別鑒定就顯得非常重要。采用分子生物學方法對薩能羊進行性別鑒定，對其他哺乳動物的胚胎性別鑒定提供可靠的依據，對人類和動物尤其是家畜的育種和生產有著深遠的意義。國內外進行胚胎性別鑒定的研究已經有很多報道，運用的分子生物學方法有很多種，如常規PCR方法、巢式PCR方法、復合PCR方法等，但運用HOT-Mart PCR方法還鮮有報道。發明人將本發明的方法在數據庫進行搜尋比較，未發現有相同的方法進行早期胚胎性別鑒定。
發明內容
本發明的目的在于提供一種鑒定結果好，靈敏度和準確性高的薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法。本發明用HOT-Mart PCR方法對薩能奶山羊早期胚胎性別進行鑒定，具體步驟如下a.用手術法對供體羊進行沖胚，獲取胚胎；b.取6 7d的A、B級桑椹胚和早期囊胚，進行冷凍或直接在實驗室對其進行顯微取樣鑒定；c.用吸取法對b.步驟得到的桑椹胚和早期囊胚進行顯微取樣，對胚胎取不同的細胞數，將取樣細胞放入PCR反應管中，準備進行DNA的提取及鑒定；取樣后的胚胎進行發育潛能培養實驗；d. PCR引物設計及模板DNA的制備根據GeneBank收錄的綿羊的基因序列，依據綿羊Y染色體特異重復序列(Z3(^65) 設計兩對引物，同時根據綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453M8)設計兩套對照引物，其基因序列和引物序列如下綿羊Y染色體特異重復序列(Z3(^65)
1 atgaatagaa cggtgcaatc gtatgcttct gctatgttca gagtattgaa agacgatgtt61 tacagtccag cggtggtaca gcaacaaaat actttcgcct ttgggaaaac ctcttccttg121 tgcacagaca atcatagcgc aaacgatcag cgtgaaaggg gggaaaatgt tagggagagc181 agccagaacc acgtcaagcg acccatgaac gccttcattg tgtggtctcg tgaacgaaga241 cgaaaggtgg ctctagagaa tcccaaactg caaaactcag agatcagcaa gcagctggga301 tacgagtgga aaaggcttac agatgctgaa aagcgcccat tctttgagga ggcacagaga361 ctactagcta tacaccgaga caaatacccg ggctataaat atcgacctcg tcggaaggcc421 aagaggccac agaaatccct tgctgcagac tcttcaatac tatgcaacca gatggatgca481 gagacattgc accccttcac atacagggac gattgtgcca agaccacaca ctcacaaatg541 gaaagccaat taagccgctc acagtccgtg attataacga attcacttct gcaaaaggag601 catcacagca gctggacaaa cctgggccac gatagggtaa cattggcttc acgaatttcc661 gcggactttc ccttttacca aagcttagag cctggacttt cttgcgctta tgttcaatat721 tga綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453M8)序列1 ctacaagctt gtccacctcc agggctttga gccgccaggc tacgagcggg ctgagctcag61 cctgagccct gaggctcgag tgccccttga agacaagggt ctggggcctg cggagcactg121 cccgggccag tgcctgccgt gggcgtgtaa ggtgtgtaag aggaagtcgg tgtctgtgga181 ccggcggcgc gccgccacgc tgagagagaa gcgcagactc aagaaggtga atgaagcctt241 cgaggccctc aagaggagca ccctgctcaa ccccaaccag aggctgccca aagtggagat301 cctgtgcagc gccatccagt acatagagcg cctgcaggcc ctgctcagct ccctcaacca361 ggaggagcgt gatctccgct accgaggtgg gggcggaccc cagccagggg taagtggcca421 ccccacccgc ctgcccgggg aggggggcac aggaggcatc tggacagcct caggggaccc481 atcgtgggct cagtcagatg gctggagcag gagccaggca gggtcttagg aggctgcagg541 atgcctttcc tttgttacag ctggaccgcc cagctgacct cctgtgtccc cgtgtccttt601 ccagacaaga caaaggcaac tgggaggaga ggcatgtgga ggggggtggc acaggcctga661 aggaggggtc cagaagcaag tccagagtca tctggatgag gaggaaggtt aaccccagcg721 tctggcctta gggcctcaaa ggcaaggtca agcgtaccta agaagactga ttcgcccctt781 agtcaacccc atcctgggta tggcgagcag agaggaaacc cactcagcct ccctcatgca841 accccaacag gcctgcacag aagtgggccc ggttgggcca gacactctgc ctccttcacc901 cctatcccag agtcaggaaa ccacagagca ctctttaggg gcagaatcac cccaggatgg961 gtgctgggaa aggccctgaa gcaggggttc tgtggccaaa ttaagagagg taattttgaa1021 gattctgaaa taggggctgt gctaggctgg agggctgcag cttgtgagcc tccctccaac1081 cccaccacag gcacttctgg ccactgggac tggacaaaag agacactacc aagaatggtg1141 gtgccctaat ccagggcctc cattctgtct tgcaggtgcc cagtgaatgc agctcccata1201 gtgcctcctg cagtccacag tggggcagcg cactggagtt tggccccaac ccagggggta1261 agtgagacca ggaccctgct tgctttgact caaatcacgc agtctgtctc taggcccagt1321 tcttccctct tcccttattc cctgctccag tacttttccc tcagcctctc taggaggtgt1381 ttgaaactag ggccccacat ggtgggctag aaggccctgt gcctctctga cgctttgacc1441 cgctaaggag ttgtctaggc ctcctgcaac agcccggctg ctgcctggtg gctgaccttc
1501cccacagagaggacagtgtccctgctctgggaattgctgagtcaatgctg
1561cagcaaagggcagttccagtctcccaggatacagtattctggctctacct
1621gcttccaaattctaactacaccggggatttcagagggcacactggtgttc
1681acacacacgtgtgcacctagcattaggaaaggcatgggctgtggagtaga
1741tttctcatccatctgtcctggaaaacctgtgctactccaaagctgactcc
1801tcctttcaccaaccaggtaacatcttcctaccttctccttatagatcatc
1861ggaccctacagacgcccacaatct
綿羊SRY基因和myogenin基因的引物序列
權利要求
1. 一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，其特征在于該方法用HOT-Mart PCR方法對薩能羊早期胚胎性別進行鑒定，具體步驟如下a.用手術法對供體羊進行沖胚，獲取胚胎；b.取6 7d的A、B級桑椹胚和早期囊胚，進行冷凍或直接在實驗室對其進行顯微取樣鑒定；c.用吸取法對b.步驟得到的桑椹胚和早期囊胚進行顯微取樣，對胚胎取不同的細胞數，將取樣細胞放入PCR反應管中，準備進行DNA的提取及鑒定；取樣后的胚胎進行發育潛能培養實驗；d.PCR引物設計及模板DNA的制備根據GeneBank收錄的綿羊的基因序列，依據綿羊Y染色體特異重復序列(Z3(^65)設計兩對引物，同時根據綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453M8)設計兩套對照引物，其引物序列為
全文摘要
本發明提供一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，屬于胚胎工程技術領域。本發明的薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，用HOT-Start PCR方法對薩能奶山羊早期胚胎性別進行鑒定，具體步驟包括胚胎的獲取、胚胎的質量鑒定、胚胎的顯微取樣、DNA提取、設計引物，利用PCR方法擴增，及電泳檢測鑒定。本發明的方法具有實用性強、操作方便、準確性高的優點，且也能為其他家畜提供見解。
文檔編號C12Q1/68GK102304582SQ20111025667
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者蘇雷, 賈銀海 申請人:云南中科胚胎工程生物技術有限公司