專利名稱：一種靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種提取物的組合物及其應用，特別是涉及一種靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物及其應用。
背景技術：
羥自由基是一種具有很強的氧化損傷能力的自由基，能使細胞內的一些生物大分子發生氧化而導致膜損傷、酶失活、正常生化反應中止甚至DNA突變。人體在一定的病理條件下會產生較多的羥自由基，多種疾病被證明與機體產生的羥自由基所致的氧化性損傷有關[Schmidt N,Ferger B. Brain Res,2004，1012(1—2) :101-107 ；Wang S, Leonard S S,Ye J, et al.Am J Physiol Cell Physiol, 2000, 279 (3) :C868_C875 ；Chen C L, Chi C W, Liu T Y.J Toxicol Environ Health A，2002，65 (3-4) :327-336]。研究羥自由基清除劑對于從抗氧化角度預防或/和治療多種疾病具有重要意義。靈芝是一種菌類中藥，在中國作藥用和食用已有數千年的歷史，現已在全國各地廣泛栽培。靈芝具有補氣安神，止咳平喘的功效，常用于心神不寧，失眠心悸，肺虛咳喘，虛勞短氣，不思飲食等臨床病癥，在抗衰老、抗腫瘤、降血脂方面也有很多應用。靈芝的化學成分主要為多糖類和三萜類。靈芝多糖是一類葡萄糖通過β -(1 —幻和β -(1 — 6)苷鍵聚合而成的高分子非淀粉多糖；靈芝多糖的主要藥理作用有調節免疫、抗腫瘤、抗衰老、降血糖。靈芝中已發現的三萜類成分有百余種，多為羊毛脂留烷衍生物，根據所含功能團和側鏈的不同可分為靈芝酸類、赤芝酸類、靈芝醇類、靈芝內酯類等，代表性成分如靈芝酸B、赤芝酸Α、靈芝醇D、7 β -羥基-3，11，15-三氧羊毛脂留酮-8-烯- (20)-內酯；靈芝三萜類成分的主要藥理作用有保肝、抗腫瘤、降血糖、抗HIV-1、抗血壓、抑制組胺釋放、抗氧化。苦蕎是一種藥食兩用資源，在四川省涼山彝族自治州有大量栽培并被廣泛食用和藥用。苦蕎具有健脾行滯，理氣止痛，解毒消腫的功效，傳統上用于胃脘脹痛，消化不良，腰腿痛，跌打損傷，癰腫瘡毒等臨床病癥，近年也應用于糖尿病、高血脂、腫瘤等疾病。苦蕎的有效成分主要為黃酮類，代表性成分如蘆丁、槲皮素、山柰酚、槲皮素-3-蕓香糖苷-7-半乳糖苷、槲皮素-3-雙鼠李糖苷、山柰酚-3-0-蕓香糖苷。苦蕎黃酮類成分的主要藥理作用為 降血糖、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗血栓形成、抗氧化、抗腫瘤、抗紫外線作用。目前已有靈芝提取物和苦蕎提取物，但單獨服用靈芝提取物或苦蕎提取物，由于沒有協同效應，其抗氧化性能明顯低于靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物。目前尚無靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物及其制劑的相關報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能有效清除羥自由基、抗氧化能力強的含有靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物。本發明的另一目的在于提供該組合物在制備預防或治療與氧化損傷有關的疾病的藥物或保健品中的應用。
為達到上述目的，本發明提供了一種靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物，該組合物所含靈芝提取物和苦蕎提取物由相同質量的靈芝和苦蕎提取制得，其中靈芝提取物通過如下方法制得(1)先將靈芝粉碎，然后用靈芝質量的5 10倍量體積的70. 0% 95. 0%乙醇 (即Ig靈芝加入5 IOml乙醇)回流提取3次，每次lh，或用靈芝質量的15 25倍量體積的70.0% 95.0%乙醇(即Ig靈芝加入15 25ml乙醇)滲漉提取，將回流提取或滲漉提取的提取液回收乙醇后，上樣于硅藻土柱，所用硅藻土的質量為靈芝質量的1 1.5倍， 然后用4 6倍柱體積的乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，回收乙酸乙脂，得提取物A ； (2)取上述70. 0 % 95. 0 %乙醇提取后的靈芝藥渣，用水煎煮提取2次，每次用靈芝藥渣質量的10 15倍量體積的水(即Ig靈芝藥渣加入10 15ml水)提取lh，將提取液濃縮至相對密度為1. 10 1.20，然后加95.0%乙醇至含醇量為60% 70%，待完全沉淀后，過濾，取濾餅干燥，得提取物B ；(3)合并提取物A與提取物B，并混合均勻，即得靈芝提取物；其中苦蕎提取物通過如下方法制得將苦蕎粉碎，然后用苦蕎質量的5 10倍量體積的70. 0% 95. 0%乙醇(即Ig 苦蕎加入5 IOml乙醇)回流提取3次，每次lh，或用苦蕎質量的15 25倍量體積的 70.0% 95.0%乙醇(即Ig苦蕎加入15 25ml乙醇)滲漉提取，將回流提取或滲漉提取的提取液回收乙醇后，上樣于大孔樹脂柱，所用樹脂質量為苦蕎質量的1. 5 2. 5倍，接著用3 5倍柱體積的水洗去雜質，再用5 10倍柱體積的50. 0% 80. 0%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮、干燥，即得苦蕎提取物。本發明組合物加入藥學上接受的賦型劑可制成膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液或酒劑。本發明組合物可應用于制備預防或治療與氧化損傷有關的疾病的藥物或保健品。本發明組合物所含主要活性物質的重量百分比如下靈芝總三萜3. 0% 8. 0%, 靈芝多糖15. 0% 20. 0%，苦蕎總黃酮18. 0% 25. 0%。上述主要有效成分的含量按如下方法測定⑴靈芝總三萜對照品溶液的制備取熊果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得。 標準曲線的制備精密量取對照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、1. Oml、 1. anl，分別置IOml具塞試管中，水浴蒸干，各加5%香草醛-冰乙酸溶液0. 5ml和高氯酸 1. 0ml，置60°C水浴中保溫15min，取出，冰水冷卻，加冰乙酸至10ml，搖勻，以相應的試劑為空白，于MSnm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。供試品溶液的制備取提取物約lg，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯 90ml，加熱回流至提取液無色，轉移提取液至IOOml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取供試品溶液anl，照標準曲線的制備項下的方法，自“水浴蒸干” 起，依法測定吸光度，按標準曲線計算靈芝總三萜的含量。(2)靈芝多糖
對照品溶液的制備取105°C干燥至恒重的無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每Iml含0. Img的溶液，即得。標準曲線的制備精密量取對照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、1. Oml、 1. 2ml,分別置IOml具塞試管中，加水至2. 0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密稱取蒽酮 0. Ig,加80%的硫酸溶液IOOml使溶液，搖勻)6ml，搖勻，置水浴中加熱15min，取出，放入冰水浴中冷卻15min，以相應的試劑為空白，于625nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。供試品溶液的制備取提取物約lg，精密稱定，置索氏提取器中，加水90ml，用電加熱器加熱回流提取至提取液無色，轉移提取液至IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻；精密量取10ml，加入乙醇150ml，搖勻，4°C放置12h，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解，轉移至50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取供試品溶液anl，置IOml具塞試管中，照標準曲線的制備項下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法測定吸光度，按標準曲線計算靈芝多糖的含量。3、苦蕎總黃酮對照品溶液的制備取在120°C干燥至恒重的蘆丁對照品適量，精密稱定，加10% 甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，即得。標準曲線的制備精密量取對照品溶液Iml、anl JmUml、5ml、6ml，分別置25ml 量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1ml， 搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，于500nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。供試品溶液的制備取提取物約lg，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷 100ml，加熱回流至提取液無色，棄去三氯甲烷液，再加甲醇90ml，加熱回流至提取液無色， 移置IOOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取供試品溶液:3ml，照標準曲線的制備項下的方法，自“加水至 6ml，，起，依法測定吸光度，按標準曲線計算苦蕎總黃酮的含量。下面通過清除羥自由基的抗氧化活性實驗來證明本發明的優點，實驗中所用到的提取物和組合物樣品為實施例1所制得的提取物及其組合物。實驗原理利用i^enton反應產生羥自由基，羥自由基與二甲亞砜反應生成甲醛， 甲醛經2，4- 二硝基苯胼衍生后生成相應的腙(HCH0-DNPH)，通過高效液相色譜法分析反應體系中加或不加待測樣品時HCH0-DNPH峰面積的變化，測得樣品對羥自由基的清除率，以此衡量樣品的抗氧化活性。對照品溶液的制備取甲醛(37% )對照品適量，精密量取，加水制成332. 7nmol/ L的溶液，即得。2，4_ 二硝基苯胼溶液的制備取2，4_ 二硝基苯胼適量，精密稱定，加乙腈制成 10. Ommol/L的溶液，即得。Fe2+溶液的制備取硫酸亞鐵(FeSO4 · 7H20)適量，精密稱定，加水制成2. Ommol/L 的溶液，即得。
過氧化氫溶液的制備取過氧化氫(30% )適量，精密量取，加水制成107. 7nmol/ L的溶液，即得。二甲亞砜溶液的制備取二甲亞砜適量，精密量取，加水制成225. 2nmol/L的溶液，即得。供試品溶液的制備取供試品20mg，精密穩定，置IOOml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置IOml量瓶中，以水稀釋至刻度，搖勻，即得。色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Diamonsil C18(250mmX4. 6mm, 5μπι)；流動相乙腈-水(65 35)；檢測波長:365nm ；流速0. 8mL .mirT1 ；進樣量20μ 1。測定法取甲醛對照品溶液1. 0ml，置具塞試管中，加2，4-二硝基苯胼溶液0. Iml, 置60°C水浴中反應20min，取出，冰浴冷卻，加乙腈使成5. 0ml，搖勻，精密吸取20 μ 1，注入液相色譜儀，測定HCH0-DNPH峰的保留時間，確定峰位置。取供試品溶液1. 0ml，加二甲亞砜溶液、Fe2+溶液、過氧化氫溶液各1. 0ml，搖勻，置37°C水浴中反應30min，取出，加2，4- 二硝基苯胼溶液0. 5ml，置60°C水浴中反應20min，取出，冰浴冷卻，加乙腈使成5. 0ml，搖勻，精密吸取20 μ 1，注入液相色譜儀，測定HCH0-DNPH峰面積(A1)；另取供試品溶液0ml，同法操作，測定HCH0-DNPH峰面積(A2),根據下式計算羥自由基清除率羥自由基清除率(％)= (A2-A1)/A2X 100%。另取清除羥自由基的陽性藥物抗壞血酸，加水制成0.5mg/ml的溶液， 取1. Oml,同法操作、測定并計算其羥自由基清除率，作為參照。表1本發明組合物對羥自由基的清除作用
權利要求
1.一種靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物，其特征在于所含靈芝提取物和苦蕎提取物由相同質量的靈芝和苦蕎提取制得，其中靈芝提取物通過如下方法制得(1)先將靈芝粉碎，然后用靈芝質量的5 10倍量體積的70.0% 95. 0%乙醇回流提取3次，每次Ih，或用靈芝質量的15 25倍量體積的70. 0% 95. 0%乙醇滲漉提取，將回流提取或滲漉提取的提取液回收乙醇后，上樣于硅藻土柱，所用硅藻土的質量為靈芝質量的1 1. 5倍，然后用4 6倍柱體積的乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，回收乙酸乙脂，得提取物A;(2)取上述70.0 % 95. 0 %乙醇提取后的靈芝藥渣，用水煎煮提取2次，每次用靈芝藥渣質量的10 15倍量體積的水提取lh，將提取液濃縮至相對密度為1. 10 1. 20，然后加 95. 0 %乙醇至含醇量為60 % 70 %，待完全沉淀后，過濾，取濾餅干燥，得提取物B ；(3)合并提取物A與提取物B，并混合均勻，即得靈芝提取物；其中苦蕎提取物通過如下方法制得將苦蕎粉碎，然后用苦蕎質量的5 10倍量體積的70. 0% 95. 0%乙醇回流提取 3次，每次lh，或用苦蕎質量的15 25倍量體積的70. 0% 95. 0%乙醇滲漉提取，將回流提取或滲漉提取的提取液回收乙醇后，上樣于大孔樹脂柱，所用樹脂質量為苦蕎質量的 1. 5 2. 5倍，接著用3 5倍柱體積的水洗去雜質，再用5 10倍柱體積的50. 0% 80. 0%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮、干燥，即得苦蕎提取物。
2.根據權利要求1所述的靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物，其特征在于該組合物加入藥學上接受的賦型劑制成膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液或酒劑。
3.如權利要求1所述的靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物在制備預防或治療與氧化損傷有關的疾病的藥物或保健品中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種靈芝提取物和苦蕎提取物的組合物及其應用，該組合物采用相同質量的靈芝和苦蕎提取制得，該組合物中活性物質含量為靈芝總三萜3.0％～8.0％、靈芝多糖15.0％～20.0％、苦蕎總黃酮18.0％～25.0％。該組合物具有很強的抗氧化活性，能有力地清除羥自由基，其作用強于單獨使用靈芝提取物或苦蕎提取物。該組合物可用于制備預防或治療與氧化損傷有關的疾病的藥物或保健品。
文檔編號A23L1/29GK102302560SQ20111025672
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者李德志, 楊文宇 申請人:西華大學, 西昌市元農農業開發有限公司