專利名稱：一種復合微生物菌劑及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種復合微生物菌劑及其用途，屬于應用微生物領域。
背景技術：
近年來，我國大豆種植業有了長足的發展，并刺激了大豆加工業的迅猛發展。豆渣是大豆加工業的主要副產物，是指做豆腐、豆奶等豆制品的下腳料，其營養成分高于眾多糟渣，粗蛋白含量高，干豆渣含粗蛋白質27. 7%，比稻谷多3倍，是豬、雞、鴨等的好飼料。長期以來，豆渣由于口感差、不耐貯藏等特點，目前豆渣尚未得到充分的開發和利用，豆渣大部分作為廢料棄掉，資源浪費極大，同時又造成環境污染。由于豆渣的本身含水量大，且營養豐富，是微生物的良好棲身地，極易腐敗，加工要及時，必須在生產過程中直接加工成食品或干燥后才能保存運輸，因干燥處理費用大，或干燥后作為原料還沒有很好的銷路，這嚴重阻礙了豆渣的綜合利用，造成了資源的白白浪費。另外，豆渣不宜直接作為飼料。數據表明，豆渣營養成分非常豐富，纖維素含量約占豆渣干物質的一半。因此，豆渣中的主要成分為膳食纖維，單純用豆腐渣喂豬，則容易引起豬的消化不良。此外，鮮豆腐渣含粗蛋白質4. 7%，干豆腐渣含粗蛋白質27. 7%，比稻谷多 3倍。但如果單純用豆腐渣喂豬，同樣容易引起豬的消化不良。豆腐渣營養不全，缺乏維生素，礦物質含量也很少，不能滿足生豬生長發育需要。經過飼料發酵助劑的微生物發酵處理，生產微生物菌體蛋白飼料，豆渣中蛋白質能夠得到有效降解，從而使豆渣中氨基酸態氮的含量得以大量提高，并使豆渣異味、口感、 顆粒細度、營養等方面得到改善，這是一種有效利用豆渣的方法。
發明內容
本發明提供了一種復合微生物菌劑，該菌劑由質量百分比40%_60%的枯草芽孢桿 M (.Bacillus仰力ii/is)、質量百分比20-30%的米曲霉Usper^iV^As orj^ae)、質量百分比20-30%的米根霉(脅辦印狀仗尺泌)混合制備而成，具體為豆腐制作中產生的豆渣快速發酵提供微生物菌劑，為解決豆渣微生物發酵處理提供了一種快速、高效發酵的復合微生物菌劑。本發明另一目的是將復合微生物菌劑應用在豆腐制作中產生的豆渣快速發酵中。本發明所述復合微生物菌群的制備方法按照以下的步驟進行
(1)培養基的制備稱取600g豆渣，加入900 ml水，攪拌2_3分鐘，采用2層紗布過濾，收集濾液并加入1.5 g玉米面，并定溶至1000ml，調節pH值至中性，用于制備固
體和液體培養基，制備固體培養基時，添加18 g瓊脂，在121°C條件下滅菌20 min，將滅菌后的培養基分裝制作平板培養基，待用；制備液體培養基時，將液體培養基每IOOml分裝于 250 ml三角瓶中，在121°C條件下滅菌20 min，待用；
(2)枯草芽孢桿菌OfeciBmsubtilis)的制備從枯草芽孢桿菌斜面接一環菌苔至裝有100 ml的液體培養基的三角瓶中，置于控溫搖床培養，以37 °C培養溫度和120 r/min 的轉速，培養36 h，收集培養液并采用8000 r/min的條件離心收集枯草芽孢桿菌的菌體；
(3)米曲霉Us/^r^/BMoryzae)的制備將米曲霉斜面上的菌絲接種(1)中制作的平板培養基上，以37 °C培養溫度培養7 d，采用無菌水將平板上生成的刨子洗脫、收集，采用8000 r/min的條件離心收集孢子；
(4)米根霉(脅辦印狀oryzae^的制備將米根霉斜面上的菌絲接種(1)中制作的平板培養基上，以37 °C培養溫度培養7 d，采用無菌水將平板上生成的刨子洗脫、收集，采用 8000 r/min的條件離心收集孢子。(5)將質量百分比40%_60%的枯草芽孢桿菌菌體、質量百分比20-30%的米曲霉孢子和質量百分比20-30%的米根霉孢子混合制得復合微生物菌劑。本發明具有以下優點1)能快速高效發酵豆渣，降解率高，周期短，適宜條件下僅需8-12天左右；2)蛋白質含量提高達20-61% ；3)可實現豆腐制作中產生的豆渣快速發酵， 提供飼料，豆渣大部分作為廢料棄掉，資源浪費極大，同時又造成環境污染，通過本發明可以為豆渣的資源化利用提供新方法。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明，但本發明保護范圍不局限于所述內容。實施例1 本復合微生物菌劑組成物及質量百分比為40%枯草芽孢桿菌、30%米曲霉、30%米根霉。制備時按以下具體步驟進行
(1)培養基的制備稱取600g豆渣，加入900 ml水，攪拌3分鐘，采用2層紗布過濾， 收集濾液并加入1.5 g玉米面，并定溶至1000ml，調節pH值至中性，用于制備固體和
液體培養基，制備固體培養基時，添加18 g瓊脂，在121°C條件下滅菌20 min，將滅菌后的培養基分裝制作平板培養基，待用；制備液體培養基時，將液體培養基每IOOml分裝于250 ml三角瓶中，在121°C條件下滅菌20 min，待用；
(2)枯草芽孢桿菌UaciBm·5油iihi)的制備從枯草芽孢桿菌接種至裝有100 ml 的液體培養基的三角瓶中，置于控溫搖床培養，以37 °C培養溫度和120 r/min的轉速，培養36 h，收集培養液并采用8000 r/min的條件離心收集枯草芽孢桿菌的菌體；
(3)米曲霉Us/^r^/BMoryzae)的制備將米曲霉接種于步驟(1)中制作的平板培養基上，37 °C培養7 d后，采用無菌水將平板上生成的孢子洗脫、收集，采用8000 r/min的條件離心收集孢子；
(4)米根霉(脅辦印狀oryzae)的制備將米根接種于步驟(1)中制作的平板培養基上，37 °C培養7 d后，采用無菌水將平板培養基上生成的孢子洗脫、收集，采用8000 r/min 的條件離心收集孢子；
(5)將質量百分比40%的枯草芽孢桿菌菌體、質量百分比30%的米曲霉孢子和質量百分比30%的米根霉孢子混合制得復合微生物菌劑。本發明中復合微生物菌劑用于發酵豆渣，將菌劑與豆渣按質量比為1 :500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7個菌體，含水率控制在70%，溫度控制在35°C范圍進行發酵8天，經檢測，豆渣中蛋白質含量由17%提高到40%，膳食纖維由49%下降到25%。實施例2 本復合微生物菌劑組成物及質量百分比為45%枯草芽孢桿菌 {Bacillus sub tills )、25% 米曲霉(Aspergillus oryzae )、30% 米根霉{Rhizopus oryzae )。制備方法中培養基和菌種制備方法同實施例1，最后將質量百分比45%的枯草芽孢桿菌菌體、質量百分比25%的米曲霉孢子和質量百分比30%的米根霉孢子混合制得復合微生物菌劑。本實施例中復合微生物菌劑用于發酵豆渣，將菌劑與豆渣按質量比為1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7個菌體，含水率控制在75%，溫度控制在30°C范圍進行發酵10天，經檢測，豆渣中蛋白質含量由15%提高到35%，膳食纖維由48%下降到28%。實施例3 本復合微生物菌劑組成物及質量百分比為60 %枯草芽孢桿菌 {Bacillus 仰辦ii/is)、20%米曲霉(Aspergillus oryzae)、20%米根霉(Rhizopus oryzae)。制備方法中培養基和菌種制備方法同實施例1，最后將質量百分比60%的枯草芽孢桿菌菌體、質量百分比20%的米曲霉孢子和質量百分比20%的米根霉孢子混合制得復合微生物菌劑。本實施例中復合微生物菌劑用于發酵豆渣，將菌劑與豆渣按質量比為1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7個菌體，含水率控制在72%，溫度控制在20°C范圍進行發酵12天，經檢測，豆渣中蛋白質含量由14%提高到61%，膳食纖維由45%下降到四％。實施例4:本復合微生物菌劑組成物及質量百分比為55 %枯草芽孢桿菌 {Bacillus 仰辦ii/is)、20%米曲霉(Aspergillus oryzae)、25%米根霉(Rhizopus oryzae)。制備方法中培養基和菌種制備方法同實施例1，最后將質量百分比55%的枯草芽孢桿菌菌體、質量百分比20%的米曲霉孢子和質量百分比25%的米根霉孢子混合制得復合微生物菌劑。本實施例中復合微生物菌劑用于發酵豆渣，將菌劑與豆渣按質量比為1:500充分混合，混合后每克堆料中含有IX IO7個菌體，含水率控制在74%，溫度控制在25°C范圍發酵 10天，經檢測，豆渣中蛋白質含量由18%提高到53%，膳食纖維由45%下降到27%。
權利要求
1.一種復合微生物菌劑，其特征在于組成物及質量百分比為40%-60%枯草芽孢桿菌、 20-30%米曲霉、20-30%米根霉。
2.權利要求1所述復合微生物菌劑在發酵豆渣中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種復合微生物菌劑及其用途，具體為豆腐制作中產生的豆渣快速發酵提供微生物菌劑，該復合微生物菌劑由枯草芽孢桿菌菌體(Bacillussubtilis)、米曲霉孢子(Aspergillusoryzae)、米根霉(Rhizopusoryzae)孢子混合組成，能夠快速發酵豆腐制作中產生的豆渣。在豆渣發酵中使用該菌劑，其發酵周期短，僅需8-12d，蛋白質含量提高達20-50%，膳食纖維下降到25-30%，且菌劑的制作方法簡單，易于實施，單位原料中菌群含量大，活性高。
文檔編號C12N1/14GK102424809SQ20111044694
公開日2012年4月25日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者周成, 寧平, 馬艷華, 黃兆林 申請人:昆明理工大學