專利名稱：蛋白酪氨酸激酶抑制劑在誘導間充質干細胞向心源性細胞分化中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制劑在誘導間充質干細胞向心源性細胞分化中的應用及含有通過PTK抑制劑誘導從間充質干細胞分化的心源性細胞的心臟病治療用醫藥組合物。
背景技術：
許多不同細胞類型曾被考慮為針對缺血性心臟的干細胞治療劑的候選，但是至今還未發現在電機械融合方面理想的細胞類型(Segers, V.F.&Lee, R.T.Nature451, 937-942 (2008))。實際上，純粹的間充質干細胞(mesenchymal stemcells, MSCs)向心肌細胞的分化在人體內以極低的比例觀察到，且移植的干細胞和心肌的電機械融合能力還不確定(Chang, M.G., et al.Circulationll3, 1832-1841 (2006))。事實上，本發明的發明人在此前通過增加間充質干細胞的優點進行了很多研究(Song, S.ff., et al.Stem Cells27,1358-1365(2009);Chang, ff., et al.Stem Cells27, 2283-2292(2009) ; Song, H.，et al.Stem Cells25, 1431-1438(2007))，提高了移植細胞的生存率或梗塞心臟的功能，但是發現間充質干細胞的移植并不能減少梗塞后猝死的發生。在功能提高的情況下仍然無法改善生存率的原因是移植的干細胞和心肌的異源性而無法達到電機械融合
發明內容
發明目的本發明的目的在于，為了將間充質干細胞用作心肌梗塞、心力衰竭、心律失常等的細胞治療劑，提供能夠誘導間充質干細胞向移植后能夠與心肌進行電機械融合的細胞-心源性細胞分化的方法。技術方案為了避免移植細胞和心肌之間的異源性，在將間充質干細胞向梗塞心臟移植之前，可能需要對間充質干細胞的心因性特性進行調節，這會帶來收縮功能和電機械穩定性的改善。從這一點著眼，本發明的發明人對能夠誘導間充質干細胞向心源性細胞分化的方法持續地進行了研究。其結果，發現了蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinase, PTK)抑制劑能夠誘導間充質干細胞向心源性細胞分化。以下實施例中會與純的間充質干細胞進行比較，示出在體外(ex vivo)能夠通過PTK抑制劑誘導大鼠間充質干細胞向心源性細胞分化。從而，本發明提供用于誘導間充質干細胞向心源性細胞分化的PTK抑制劑的用途、包括用PTK抑制劑處理間充質干細胞使間充質干細胞向心源性細胞分化的誘導方法及含有PTK抑制劑的使間充質干細胞向心源性細胞分化的誘導用組合物。
在本發明中，用于誘導間充質干細胞向心源性細胞分化的PTK抑制劑的種類不受特別的限制。根據具體實施方式
，PTK抑制劑可以是化學式I的化合物。化學式I
權利要求
1.誘導間充質干細胞向心源性細胞分化的方法，其特征在于，該方法包括用PTK(蛋白酪氨酸激酶)抑制劑處理間充質干細胞。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述蛋白酪氨酸激酶抑制劑是下列化學式I的化合物， 化學式I
3.根據權利要求2所述的方法，其中，R1^R2> R3、R4、R5及R6分別獨立地為H、C1^4烷基或Cu燒氧基；R7為選自Cu燒基、C^4燒氧基、輕基、竣基及齒素原子組成的組中的一種以上的取代基取代的或未取代的苯基。
4.根據權利要求2所述的方法，其中，R1,R2,R3>R4^R5及R6分別獨立地為H或(^_4烷氧基；R7為選自CV4燒基、Cu燒氧基或齒素原子取代的或未取代的苯基。
5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述PTK抑制劑是N-(3-溴苯)-6，7- 二乙氧基喹唑啉-4-胺。
6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述間充質干細胞是從骨髓、組織、胚胎、臍帶血或體液獲得。
7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述PTK抑制劑的處理是將間充質干細胞在含有PTK抑制劑的培養基中培養而進行的。
8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述培養進行5天至15天。
9.根據權利要求1所述的方法，其中，所述心源性細胞是心肌細胞特異性標記的表達相比間充質干細胞增加的心源性細胞。
10.根據權利要求9所述的方法，其中，所述心肌細胞特異性標記選自由cTnT(心臟肌鈣蛋白T)、MLC (肌球蛋白輕鏈)及MHC (肌球蛋白重鏈)組成的組中。
11.根據權利要求1所述的方法，其中，所述心源性細胞是Cx43(接合素43)的表達相比間充質細胞增加的心源性細胞。
12.根據權利要求1所述的方法，其中，所述心源性細胞是Ca2+增強型關聯蛋白的表達相比間充質干細胞增加的心源性細胞。
13.根據權利要求12所述的方法，其中，所述Ca2+增強型關聯蛋白是SERCA2a或LTCC。
14.含有PTK(蛋白酪氨酸激酶)抑制劑的誘導間充質干細胞向心源性細胞分化的組合物。
15.根據權利要求14所述的組合物，其中，所述PTK抑制劑是化學式I的化合物， 化學式I
16.根據權利要求15所述的組合物，其中，RpRyRyRpR5及R6分別獨立地為烷基或Cu燒氧基；R7為選自Cu燒基、C^4燒氧基、輕基、竣基及齒素原子組成的組中的一種以上的取代基取代的或未取代的苯基。
17.根據權利要求15所述的組合物，其中，RpRyRyRpR5及R6分別獨立地為H或C1^燒氧基；R7為選自CV4燒基、C^4燒氧基或齒素原子取代的或未取代的苯基。
18.根據權利要求14所述的組合物，其中，所述PTK抑制劑是N-(3-溴苯)-6，7- 二乙氧基喹唑啉-4-胺。
19.含有根據權利要求1至13中的任意一項所述的方法誘導由間充質干細胞分化的心源性細胞的用于心臟病治療的醫藥組合物。
20.根據權利要求19所述的醫藥組合物，其中，所述心臟病是心肌梗塞、心力衰竭或心律失常。
全文摘要
本發明涉及PTK抑制劑在誘導間充質干細胞向心源性細胞分化中的應用及含有通過PTK抑制劑誘導從間充質干細胞分化的心源性細胞的用于心臟病治療的醫藥組合物。雖然間充質干細胞向心臟的移植能夠帶來免疫學及功能的改善，但是無法提供電穩定性。然而，用PTK抑制劑處理的間充質干細胞被誘導向心源性細胞分化，從而改善與宿主心臟組織的電機械融合，從而提供電穩定性，因此能夠有效治療心肌梗塞、心力衰竭及心律失常等心臟疾病。
文檔編號C12N5/02GK103140579SQ201180044610
公開日2013年6月5日 申請日期2011年8月17日 優先權日2010年9月16日
發明者黃基喆, 張楊洙 申請人:藥劑細胞株式會社