專利名稱：一種組織培養器皿與組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種專門用于組織培養的培養器皿以及使用該培養器皿進行組織培養的方法。
背景技術：
組織工程是當前生命科學研究的前沿學科，人類身體健康離不開組織工程科學的發展和完善。傳統機體修復多采用自體組織移植手術，雖然可以取得滿意療效，但它是以犧牲自體健康組織為代價，挖東墻補西墻的保守辦法，最終會導致很多并發癥及附加二次損傷。最重要的是，一些人體重要的組織在機體內是獨一無二的，例如，眼角膜。在眼角膜受到 傷害之后，機體內沒有可以替代的組織，只能采用其他供體的或者人造的。但是，目前人體捐獻的供體眼角膜來源十分有限，許多病人的健康恢復無法得到保障。從而，組織工程為眾多的組織缺損的病人治療帶來了曙光。組織培養是組織工程得以發展和組織產品能夠快速應用的重要技術基礎。目前，組織培養研究較為迅速和成熟的是有關皮膚、眼角膜和卵巢組織的培養或再造等方面。通過體外培養角膜，再移植回人體，讓因為角膜缺失或損壞而失明的人士恢復視力。對于被燒傷、炎癥等因素損害的皮膚，通過體外培養皮膚組織移植人體，達到修復皮膚的外形和功能的目的。通過卵巢組織的培養，能夠實現卵巢內遺傳資源的開發和利用，對于現代畜牧業的遺傳育種、新品種培育和瀕臨滅絕野生動物的保護具有著重要的意義。由于組織培養不同于細胞培養，組織培養需要有一個氣液共存的培養環境。而目前常規的細胞培養器皿的結構無法提供理想的氣液共存的培養環境，不能滿足組織培養的需要。因此目前缺乏專用于組織培養的培養器皿。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種專門用于組織培養的培養器皿。本發明要解決的另外一個技術問題是提供一種使用上述培養器皿的組織培養方法。對于組織培養器皿，本發明采用的技術方案是一種組織培養器皿，包括底壁與至少一個側壁以限定出的內腔的培養皿，培養皿包括蓋子，內腔中還包括至少一個碗狀容器，碗狀容器包括半球形的碗底與開口，開口處設有與碗狀容器側壁垂直的邊擋，邊擋的內緣直徑小于開口，外緣直徑大于開口 ；碗狀容器底部與培養皿底壁連接。作為改進，邊擋外緣與培養皿的側壁連接。更進一步的改進，多個碗狀容器的邊擋相互連接。另外一個改進是，碗狀容器由塑料制成。還有一個改進是，碗狀容器與培養皿由透明塑料一體制成。
對于組織培養方法，本發明采用的技術方案是一種使用上述的組織培養皿的組織培養方法，包括以下步驟
(1)在組織培養前，使用親水性較強的無菌的明膠溶液對所述碗狀容器進行包被；
(2)將所述組織培養皿正置，使碗狀容器開口朝上，添加組織培養液于明膠溶液包被過的碗狀容器內，培養液以添加到所述碗狀容器邊擋的下緣為宜；
(3)切割培養組織塊，使培養組織塊的體積為0.f Imm3 ;把培養組織塊放入添加培養液的碗狀容器內；
(4)合上組織培養器皿蓋子，將組織培養皿整體倒置，使碗狀容器開口朝下，然后放入培養箱中培養。上述步驟(I)先將組織培養器皿的碗狀容器使用親水性試劑明膠溶液進行包被， 是為了使組織培養器皿的碗狀容器在倒置時能夠牢固含住培養液。明膠是水溶性蛋白質混合物，皮膚、韌帶、肌腱中的膠原經酸或堿部分水解或在水中煮沸而產生，作為親水性材料目前已廣泛用于食品和制作的粘合劑。本發明的有益效果是
通過在普通培養皿的內腔設置碗狀容器，營造了組織培養所需要的氣液共存的培養環境，使得所培養的組織在該環境中既能接觸空氣，又能保持營養供給。其使用方便、成本低廉、培養效果好，能夠有效解決當前組織培養專業器皿的缺乏問題。本發明非常適合組織體積較小和密度較大的組織塊的培養。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。圖I是本發明組織培養器皿實施例的主視圖。圖2是本發明組織培養器皿實施例的俯視圖。圖3是本發明組織培養器皿實施例的使用狀態圖。圖中，I-外壁，101-蓋子，2-碗狀容器，201-邊擋，3-培養液。
具體實施例方式圖2是一種方形組織培養器皿，由底壁與4個側壁構成培養皿的正方形的外壁I,外壁I所圍成了培養皿的內腔，外壁I的開口處以蓋子101將培養皿的內腔封閉。內腔設有4個開口直徑約Icm的碗狀容器2，碗狀容器2具有半球形的碗底與邊擋201。在圖I中，邊擋201垂直于碗狀容器的側壁，邊擋201的內緣直徑小于碗狀容器的開口，邊擋的外緣直徑則大于開口。邊擋201內徑較碗狀容器開口小，有利于當碗狀容器倒置后，容器內液體不會從開口處向外流出。為使得碗狀容器2能夠穩穩固定在培養皿中，將碗狀容器2底部與培養皿底壁連接，將邊擋201的外緣與培養皿的側壁連接，將4個碗狀容器的邊擋相互連接。本實施例中，碗狀容器2與培養皿外壁I都是用透明塑料一體制成的。使用時，先將組織培養皿正置，使碗狀容器2開口朝上，再將直徑不大且開口處更小的碗狀容器2盛滿培養液3并放入要培養的組織塊，然后合上蓋子101將培養皿內腔封閉，再將整個培養皿倒置，使碗狀容器2開口朝下(圖3)，由于碗狀容器出口處的液體表面張力使得容器內液體不會流出而含在碗狀容器中并倒懸在培養皿的半空，使培養液中所培養的組織塊既能得到培養液供給的營養，又能與培養皿內腔的空氣接觸，由此營造了一個氣液共存的良好的組織培養環境。為了使用效果更好，可在放入培養液和組織塊之前先用親水性試劑明膠溶液對組織培養器皿的碗狀容器2進行包被。本實施例適合用于培養組織體積較小和密度較大的組織塊，如生殖細胞來源的卵巢組織和睪丸組織。以上所述的本發明實施方式，并不構成對本發明保護范圍的限定。任何在本發明 的精神和原則之內所作的修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的權利要求保護范圍之內。
權利要求
1.一種組織培養器皿，包括底壁與至少一個側壁以限定出的內腔的培養皿，所述培養皿包括蓋子，其特征在于所述內腔中還包括至少一個碗狀容器，所述碗狀容器包括半球形的碗底與開口，所述開口處設有與碗狀容器側壁垂直的邊擋，所述邊擋的內緣直徑小于開口，外緣直徑大于開口 ；所述碗狀容器底部與培養皿底壁連接。
2.根據權利要求I所述的組織培養器皿，其特征在于所述邊擋外緣與培養皿的側壁連接。
3.根據權利要求I所述的組織培養器皿，其特征在于多個所述碗狀容器的邊擋相互連接。
4.根據權利要求I所述的組織培養器皿，其特征在于所述碗狀容器由塑料制成。
5.根據權利要求I所述的組織培養器皿，其特征在于所述碗狀容器與培養皿由透明塑料一體制成。
6.一種使用權利要求I所述的組織培養皿的組織培養方法，其特征在于包括以下步驟 (1)在組織培養前，使用親水性較強的無菌的明膠溶液對所述碗狀容器進行包被； (2)將所述組織培養皿正置，使碗狀容器開口朝上，添加組織培養液于明膠溶液包被過的碗狀容器內，培養液以添加到所述碗狀容器邊擋的下緣為宜； (3)切割培養組織塊，使培養組織塊的體積為0.f Imm3 ;把培養組織塊放入添加培養液的碗狀容器內； (4)合上組織培養器皿蓋子，將組織培養皿整體倒置，使碗狀容器開口朝下，然后放入培養箱中培養。
7.根據權利要求6所述的組織培養方法，其特征在于所述明膠為分析純級別以上的細胞培養用產品，明膠溶于水高壓滅菌后即為無菌的明膠溶液。
全文摘要
本發明公開了一種組織培養器皿與組織培養方法。組織培養器皿包括底壁與至少一個側壁以限定出的內腔的培養皿，培養皿包括蓋子，內腔中還包括至少一個碗狀容器，碗狀容器包括半球形的碗底與開口，開口處設有與碗狀容器側壁垂直的邊擋，邊擋的內緣直徑小于開口，外緣直徑大于開口；碗狀容器底部與培養皿底壁連接。組織培養方法包括如下步驟(1)用親水性明膠包被碗狀容器；(2)添加培養液；(3)切割和加入組織塊；(4)倒置培養皿后放入培養箱。本發明通過在普通培養皿的內腔設置碗狀容器，營造了組織培養所需要的氣液共存的培養環境，其使用方便、成本較低、效果較好，特別適宜體積較小和密度較大的組織塊的培養。
文檔編號C12N5/076GK102719361SQ20121020396
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月20日 優先權日2012年6月20日
發明者劉亞, 張運海, 曹鴻國, 李運生, 楊盼, 章孝榮, 蒲勇, 陶勇 申請人:安徽農業大學