專利名稱：一種機用需氧型細菌培養液的制作方法
技術領域：
本發明屬于血液檢測技術領域，尤其涉及到ー種機用需氧型細菌培養液。
背景技術：
全自動需氧血培養瓶是ー種應用于醫學臨床檢驗領域的新型微生物培養系統，是與全自動血培養儀配套使用的新一代微生物檢測試劑。它由瓶體、固體傳感器和培養液等三部分組成，與全自動血培養儀器結合使用即可快速檢測血液或其他標本中是否感染細菌、真菌及分枝桿菌，從而為臨床迅速有效地進行抗感染治療提供診斷依據。全自動血培養系統最早在上個世紀九十年代由美國BD公司，法國梅里埃公司等開始研發，目前已經批量生產和銷售，對中國處于技術保密狀態，國外進ロ產品價格昂貴，給我國的醫療機構及患者帶來沉重的經濟負擔。目前我國國內只有上海奧普生物技術公司等少數生物企業從事此項研究，尚未形成產業化。研制質量優良，價格便宜的自動培養瓶，打破國際壟斷，不僅具有良好的經濟效益，并且能夠降低患者負擔，減少醫療費用，具有廣泛的社會效益。 現在培養瓶中最重要的部分之一的培養液多數是增菌肉湯，它的檢測原理是提供細菌生長的必要營養物質，使致病的細菌快速生長，從而代謝的產物通過和化學試劑反應釋放出能夠被儀器識別的物理和化學信號，來檢測出血液致病的病原體，隨著檢測儀器的迅速發展，其精度及靈敏度也顯著的提高，而且抗生素類的藥物的發展及普遍使用，從而使培養液也必須發生相適應的變化，現在培養液的要求是使細菌繁殖的更快，還要拮抗中和血液內抗生素，從而確保檢測高效、省時、準確度高。
發明內容
本發明公開的ー種機用需氧型細菌培養液，顯著提高細菌繁殖的速度，且能夠拮抗中和血液中的抗生素，從而使細菌生長的速度快，縮短血液的檢測時間；另外，細菌代謝產物可以通過和培養液中碳酸氫鹽反應轉變成能被儀器識別的化學訊號，使血液檢測準確度高，因此在血液臨床檢驗領域擁有廣泛的應用前景。該培養液包括細菌生長所需的營養物質、抗凝血劑與拮抗抗生素試劑，三種成份的濃度比是52:3:10。細菌生長所需的營養物質可以由蛋白胨、胰胨、牛肉膏粉、心腦浸粉、葡萄糖中的ー種或多種混合物與維生素和碳酸氫鹽組成，其濃度比為26:0. 03:0. 68 ;維生素可以由維生素A、維生素D、維生素E、B族維生素、維生素C中的ー種或多種混合維生素組成；碳酸氫鹽由碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫銨中的一種或多種組成；抗凝血劑可以為肝素、こニ胺四こ酸鹽、枸椽酸鈉其中的任意的ー種；能夠與血液中抗生素發生拮抗中和作用的試劑可以是聚茴香腦磺酸、對氨基苯甲酸、硫酸鎂、吸附抗生素復合樹脂中的一種或多種混合試劑；除此之外，在制備培養液時還需加入鹽或酸液、堿液之類用以提供適合細菌生長的PH環境。如上述配方選擇帶有葡萄糖作為細菌生長的營養物質，則在制備培養液中應注意，除成份中的葡萄糖、吸附抗生素復合樹脂和碳酸氫鹽外，全部稱量混合，加熱溶解，溶解后需將溶液進行常溫冷卻，待稍冷卻時加入葡萄糖和無菌蒸餾水；再將培養液高壓蒸氣滅菌，同時冷卻至室溫；將碳酸氫鹽稱量溶于無菌蒸餾水中，単獨盛于不能漏氣且可以高壓滅菌的溶器內，高壓蒸氣滅菌，冷卻至室溫；在無菌操作臺中將兩者混合，用鹽、酸液或堿液調節PH值至7. 2-7. 3后，將培養液分裝于血培養瓶內用滅菌鍋進行滅菌，冷卻至室溫，調節瓶內氣壓至規定范圍，封ロ，批檢、質控后培養液即可使用。
具體實施例方式準備兩個滅過菌的帶密封蓋的1500ml玻璃容器、ー個200ml的燒杯，準確稱量蛋白胨15. 00g、胰胨3. 00g、牛肉膏粉3. 00g、心腦浸粉2. 00g、葡萄糖粉3. 00g、維生素B6粉末0. 03g、碳酸氫鈉粉末O. 68g、枸椽酸鈉L 50g、對氨基苯甲酸O. 03g、聚茴香腦磺酸O. 15g、硫酸鎂0. 20g、氯化鈉5. 00g、吸附抗生素的混合樹脂5g，除成份中葡萄糖、混合樹脂和碳酸氫鈉，其余所有成份裝入玻璃容器中，用無菌蒸餾水50ml加熱溶解，完全溶解后，需將溶液進行常溫冷卻，稍冷卻后加入葡萄糖和無菌蒸餾水，加入的無菌蒸餾水至900毫升；再將培養液高壓蒸氣滅菌15min后，冷卻至室溫；將稱量好的碳酸氫鹽溶于裝在燒杯中的無菌蒸餾水，単獨盛于密閉且可以高壓滅菌的容器內，高壓蒸氣滅菌15min，冷卻至室溫；在無菌操作臺將兩者混合于玻璃容器中，用鹽酸或氫氧化鈉調節PH值至7. 2-7. 3后，另加入吸附抗 生素的混合樹脂5g，將培養液定容至1000ml，將培養液分裝于血培養瓶內用滅菌鍋進行滅菌，冷卻至室溫，調節瓶內氣壓至規定范圍，封ロ，批檢、質控后培養液即可使用。上述各個成份的作用蛋白胨和胰胨主要作為細菌生長的氮源、也可為碳源，它特點為易溶于水，又是雙性化合物，具有一定的緩沖作用；牛肉膏粉主要作為細菌生長的氮源、也可為碳源，它含有多種能刺激細菌生長的物質如肌酸、黃嘌呤、尿酸、腺苷酸、次黃嘌呤、核苷酸、脲、谷氨酰胺、β -丙氨酸、肝糖、磷酸己糖、乳酸、琥珀酸、無機鹽；心腦浸粉細菌提供生長所需的營養。氯化鈉提供無機鹽；葡萄糖細菌生長碳源主要供應者；維生素Β6 :提供細菌生長的生長因子；聚茴香腦磺酸抑制血液中不利于細菌生長的物質，如抗生素ー類的，同時具有抗凝作用；對氨基苯甲酸能中和血液中磺胺類藥物的抑菌作用；硫Ife續能破壞血液中存在的四環素、金霉素、土霉素、多粘囷素及鏈霉素的抑囷作用；吸附抗生素的復合樹脂能吸附多種抗生素，特別是β-內酰類抗生素；枸椽酸鈉主要防止血液凝血凝固；碳酸氫鈉能把細菌生長過程中代謝產物轉變成能被儀器和血培養瓶底所識別的化學訊號、緩沖溶液中紅細胞存活能利用葡萄糖所產生的酸、提供細胞生長必要ニ氧化碳氣體。利用該培養液檢測血液中致病細菌的原理培養液提供血液中致病細菌生長所需的營養物質，為了能夠使血液始終呈液體狀態需加入抗凝血劑防止血液凝固，另外，為了使細菌生長迅速，還需加入拮抗抗生素試劑來避免血液中抗生素的干擾。細菌在本培養液中生長，它有各種各樣代謝產物，例如葡萄糖被細菌利用后，能產生丙酮酸、こ酰甲基甲醇、琥珀酸、乳酸、(甲、こ、丙、丁)酸、こ醇、こ酸以及完全分解成ニ氧化碳和Η2蛋白質的代謝產物主要有氨、C02和各種有機酸、胺類等。這些代謝產物均能使培養液中的PH發生變化，代謝產物與碳酸氫鈉發生如下化學反應
NaHCO3, +H2O靜 HCO3^Na+
C02+H20H2CO3 H++HCCV H++NaHC03+H20 HCO3^Na+每ー血液培養瓶底部都含有Novel顏色感應器，當血液培養瓶內有微生物生長代謝釋放出CO2或H+后，使培養液中的PH發生變化，同時瓶底部含有Novel顏色感應器之酸堿值也跟著改變，顔色也隨之變化，顔色的變化訊號傳送至血培養儀中，從而達到檢測的目的。權利要求
1.ー種機用需氧型細菌培養液，其特征在干，該培養液包括細菌生長所需的營養物質、抗凝血劑與拮抗抗生素試劑，三種成份的濃度比為52:3:10。
2.根據權利要求I所述的ー種機用需氧型細菌培養液，其特征在于，所述細菌生長所需的營養物質包括蛋白胨、胰胨、牛肉膏粉、葡萄糖中的ー種或多種混合物、維生素和碳酸氫鹽，其濃度比為26:0. 03:0. 68。
3.根據權利要求2所述的ー種機用需氧型細菌培養液，其特征在于，所述維生素由維生素A、維生素D、維生素E、B族維生素、維生素E中的ー種或多種混合維生素組成。
4.根據權利要求2所述的ー種機用需氧型細菌培 養液，其特征在于，所述碳酸氫鹽由碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫銨中的一種或多種組成。
5.根據權利要求I所述的ー種機用需氧型細菌培養液，其特征在于，所述抗凝血劑為肝素、こニ胺四こ酸鹽、枸椽酸鈉中的ー種。
6.根據權利要求I所述的ー種機用需氧型細菌培養液，其特征在于，所述拮抗抗生素試劑為聚茴香腦磺酸、對氨基苯甲酸、硫酸鎂、吸附抗生素復合樹脂中的ー種或多種混合試齊 。
全文摘要
本發明公開的一種機用需氧型細菌培養液，包括細菌生長所需的營養物質、抗凝血劑和拮抗抗生素試劑，三種成份的濃度比是52:3:10養液與傳統的血液增菌肉湯、手工雙向需氧血培養瓶等血液微生物培養工具中的培養基相比，細菌繁殖快，從而縮短血液檢測時間；另外，細菌代謝產物可以通過和培養液中碳酸氫鹽反應轉變成能被儀器識別的化學訊號，使血液檢測準確度高，因此在血液臨床檢驗領域擁有廣泛的應用前景。
文檔編號C12Q1/04GK102747132SQ20121025402
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月23日 優先權日2012年7月23日
發明者史煜波 申請人:史煜波